灭菌釜安装方法求回答

① 分光光度计测磷

水中磷检测方法－分光光度计／维生素丙法 一、方法概要水样以硫酸、过硫酸盐消化处理，使其中之磷转变为正磷酸盐之形式存在后，再加入钼酸铵、酒石酸锑钾，使其与正磷酸盐作用生成一杂多酸 － 磷钼酸(phosphomolybdic acid)，经维生素丙还原为蓝色复合物钼蓝(molybdenum blue)，以分光光度计于波长 880 nm 处测其吸光度定量之。水样如未经消化处理，所测得仅为正磷酸盐之含量。二、适用范围本方法适用于地面水体、地下水、海域水质及废(污)水中磷之检验。采用1公分样品槽时检量线范围为 0.02 ～ 0.50 mg P / L；采用 5 公分样品槽则为 0.005 ～ 0.050 mg P / L。方法侦测极限为0.006 mg P / L。三、干扰（一）高浓度之铁离子或砷酸盐浓度大于 0.1 mg As / L 时，产生干扰，可以亚硫酸氢钠排除干扰。（二）六价铬、亚硝酸盐、硫化物、矽酸盐产生干扰。（三）水样含有较高之色度或浊度时，可于水样中添加除维生素丙与酒石酸锑钾以外之所有相同试剂，并测定其吸光度，作为空白校正值。四、设备及材料（一）玻璃器皿：所有之玻璃器皿先以(1 + 1)之热盐酸溶液清洗，再以蒸馏水淋洗之。（二）pH 计。（三）加热装置或高压灭菌釜。（四）分光光度计，使用波长 880 nm，附 1、5 公分之样品槽。五、试剂（一）试剂水：不含足以形成干扰之污染物之蒸馏水。（二）酚?指示剂：溶解 0.5 g酚?(phenolphthalein)于 50 mL 95 ％ 乙醇或异丙醇(isopropylalcohol)，加入 50 mL 蒸馏水。（三）硫酸溶液，11 N：缓慢将 310 mL 浓硫酸加入于 600 mL 试剂水，冷却后稀释至 1 L。（四）硫酸溶液，5 N：缓慢将 70 mL 浓硫酸加入于 300 mL 试剂水，冷却后稀释至 500 mL。（五）硫酸溶液，1 N：缓慢将 14 mL 浓硫酸加入于 300 mL 试剂水，冷却后稀释至 500 mL。（六）过硫酸铵：试药级，结晶状。（七）氢氧化钠溶液，1 N：溶解 40 g 氢氧化钠(NaOH)于试剂水，稀释至 1 L。（八）酒石酸锑钾溶液：在 500 mL 量瓶内，溶解 1.3715 g 酒石酸锑钾于 400 mL 试剂水，稀释至刻度。贮存于附有玻璃栓盖棕色瓶中，并保持 4 ℃ 冷藏。（九）钼酸铵溶液：溶解 20 g 钼酸铵于试剂水中，再定量至 500 mL。贮存于塑胶瓶并保持 4 ℃ 冷藏。（十）维生素丙溶液，0.1 M：溶解 1.76 g 维生素丙(ascorbic acid)于试剂水中，再定量至 100 mL。使用当天配制。（十一）混合试剂：依次混合 50 mL 5N 硫酸溶液，5 mL 酒石酸锑钾溶液，15 mL 钼酸铵溶液及 30 mL 维生素丙溶液使成 100 mL 混合试剂，每种试剂加入后，均需均匀混合，且混合前所有试剂均需保持于室温，若混合后产生浊度时，摇汤数分钟使浊度消失，本试剂不稳定，应于使用前配制。（十二）磷标准储备溶液：在 1,000 mL 量瓶内，溶解 0.2197 g 无水磷酸二氢钾于试剂水，稀释至刻度；1.00 mL ＝ 50.0 &mug P。（十三）磷标准溶液(Ⅰ)：在 1,000 mL 量瓶内，以试剂水稀释 10.0 mL 磷标准储备溶液至刻度；1.00 mL ＝ 0.50 &mug P，适用于 1 cm 样品槽。（十四）磷标准溶液(Ⅱ)：在 1,000 mL 量瓶内，以试剂水稀释 100 mL 磷标准溶液(Ⅰ)至刻度；1.00 mL ＝ 0.05 &mug P，适用于 5 cm 样品槽。（十五）亚硫酸氢钠溶液，溶解 5.2 g 亚硫酸氢钠于 1.0 N 硫酸溶液中，再以 1.0 N 硫酸溶液定量至 100 mL。六、采样及保存以 1 ＋ 1 热盐酸洗净之玻璃瓶采集水样，添加硫酸至 pH 值 ＜ 2，于 4 ℃ 暗处冷藏，保存期限为七天。若为检测正磷酸盐，则无须添加硫酸，且须于 48 小时内进行检测。七、步骤（一）总磷(包括正磷酸盐、聚(焦)磷酸盐及有机磷，【orthophosphate、condensed phosphate and organically bound phosphate】)1.取 50 mL 水样或适量水样稀释至 50 mL，置于 125 mL 之三角烧瓶，加入一滴酚?指示剂，如水样呈红色，滴加 11 N 硫酸溶液至颜色刚好消失，再加入 1.0 mL 11 N 硫酸溶液。2.加入 0.4 g 过硫酸铵。3.置于已预热之加热装置上，缓慢煮沸 30 ～ 40 分钟或直至残留约 10 mL 液体时(注意勿使水样干涸)；或将水样置于高压釜中，以 120 ℃，1.0 ～ 1.4 Kg / cm2 加热 30 分钟。4.冷却后以蒸馏水稀释至约 30 mL(注 1)，以 1 N 或适当浓度之氢氧化钠溶液调整 pH 至 7.0 ± 0.2 后稀释至 50.0 mL。若使用高压釜消化，则冷却后以 1 N 或适当浓度之氢氧化钠溶液调整 pH 至 7.0 ± 0.2 后稀释至 100 mL(注 2)。5.加入 8 mL 混合试剂，混合均匀，在 10 ～ 30 分钟时段内以分光光度计，读取 880 nm 之吸光度，由检量线求得磷含量(&mug)。（二）正磷酸盐1.取 50.0 mL 水样或适量水样稀释至 50.0 mL，置于 125 mL 之三角烧杯，加入 1 滴酚?指示剂，如水样呈红色，滴加 5 N 硫酸溶液至颜色刚好消失。2.依上述(一)5. 步骤操作之。（三）检量线制备分别精取 0.00，5.00，10.0，20.0，30.0， 50.0 mL 磷标准溶液(I)或(Ⅱ)(或其他适合之浓度)稀释至 50.0 mL，依水样相同之步骤操作，读取 880 nm 之吸光度，绘制磷含量(&mug)- 吸光度之检量线。八、结果处理磷浓度(mg P / L)＝ 检量线求得磷含量(&mug)/ 水样体积(mL)九、品质管制（一）检量线：检量线之相关系数应大于或等于 0.995。（二）空白分析：每十个样品或每批次样品至少执行一次空白样品分析，空白分析值应小于方法侦测极限之二倍。（三）重覆分析：每十个样品或每批次样品至少执行一次重覆分析。（四）查核样品分析：每 10 个或每一批次之样品至少执行一个查核样品分析，并求其回收率。（五）添加标准品分析：每十个样品或每批次样品至少执行一次添加标准品分析。十、精密度与准确度国内某单一实验室进行试剂水添加标准品分析结果表一。十一、参考资料（一）American Public Health Association, American Water Work Association ＆ Water Pollution Control Federation, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th ed, Method 4500 - P E, pp4 &ndash 146 ~ 4 - 147, APHA, Washington, D.C. USA, 1998.（二）U.S. Environmental Protection Agency. Environmental Monitoring and Support Laboratory. Methods for Chemical Analysis of Water and Wastewater, Method 365.2, 365.3. Cincinnati, Ohio. USA, 1983. 注一：若水样含砷或高浓度铁，加入5mL亚硫酸氢钠溶液，混合后置于 95 ℃ 水浴中 30 分钟(保持水样温度为 95 ℃ 20 分钟)冷却之。注二：水样中和后如呈浑浊，添加 2 ～ 3 滴 11 N 硫酸溶液混合均匀，视需要过滤再行稀释。注三：废液分类处理原则 － 本检验废液依一般无机废液处理。 表一 国内某单一实验室进行试剂水添加标准品分析结果水样基质添加浓度平均测定值测定次数回收率(％)相对误差(％)试剂水0.0050.005171020.03试剂水0.010.00917910.09试剂水0.030.031471050.06单位：mg P/ L ，采用5 cm样品槽

② 湿热灭菌器的温度验证要怎么进行

设计要求出发，演化成为目前国内广泛采用的湿热温度验证的大容量注射剂实验方法和实验器具,也是温度验证程序设计的基本要求。使用其作功能测试步骤及参考设备如下：前提： 湿热灭菌设备的安装测试合格，现场和公用工程外接条件完备。即通常讲（DQ， IQ）已经结束后，位置在OQ运行确认。温度验证程序设计基本要求；湿热灭菌的基本程序设计基本要求源于US.FDA在上世纪70年代中期提出的，且在80年代施行的：“关于大容量注射剂GMP技术性原则”五个方面要求：在灭菌工序应能确保产品达到F0 ≥ 8；灭菌前，待实验的容器中有最高带菌量，污染菌应具有最强的耐热性；每一个灭菌釜的每种装载方式及每种规格容器的验证实验均至少使用10支热电偶进行热分布实验；用待实验容器灌注粘度相类似的产品进行热穿透实验，找出容器中升温最慢点的位置，至少使用10个容器，每个均加入适当的生物指示剂并且插有热电偶。当灭菌釜的参数已经达到热分布实验已经证实的可重现状态，温度达到设定的灭菌温度时，开始测定F0 值，直到开始冷却止；当产品达到灭菌温度直到开始冷却的过程，温度变化必须保持在 ±0.5℃以内。目的:探讨预真空压力灭菌器定期进行温度验证的必要性,帮助医疗机构选择合适的方法对其进行温度验证.方法:给出预真空灭菌器的温度性能要求和验证方法,并进行实例分析.结果:灭菌室容积不同时,检验负载和测温点的布置差异较大.结论:在排除影响温度性能因素的基础上,医疗机构应定期对预真空灭菌器进行温度验证.

③ 有关大肠杆菌、金色葡萄糖球菌等有关医疗监测的检测指标和方法啊

检测原理：
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：
2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 3.培养基及试剂：
3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：
检样
↓
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr

↓ ↓
不产气 产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
报告 ↓ ↓
革兰氏染色 乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，无芽孢杆菌 产气 不产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 大肠菌群阴性
↓ ↓ ↓
报告 大肠菌群阳性 报告

5.测定方法：
5.1 检样稀释：
5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
5.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的 试管中，振摇成1：100稀释液。
5.1.3 重复5.1.2的操作，使成1：1000稀释液。
5.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择二个稀释度，每一稀释度接种3管，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。然后置于36±1 ℃培
养箱内，培养24±2hr，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌
群阴性；如有产气者，则可按以下程序进行。
5.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养24hr后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色。
5.4证实试验：在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管，置于36±1℃温箱内培养24±2hr，观察产气情况。乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
5.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数。
食品中金黄葡萄球菌的检测方法
金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。据报导，在正常人群中的带菌率可达30%~80%，其中皮肤带菌率为8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的带菌率在40~50%以上，因此其可通过各种途径和方式，尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素，故一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒。
由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒，在世界各国都极为普遍。特别是在北美及欧洲等地区发病率更高。在上述这些国家中，每年有金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例，仅次于沙门氏菌，而在细菌性食物中毒病例排到第2~3位，有此而造成的经济损失也相当惨重，在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例也时有报导，所以目前世界各国都把金黄色葡萄球菌列为食品卫生的法定检测项目。
我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家标准GB.4789-10-84及检验检疫系统行业标准SN.0172-92作为依据。整个检测过程获得最终结果须时5天左右，既费时又费力，并造成货物积压，也影响货物的及时出运，并使货主的仓储成本提高，造成较大的经济损失。
多年来很多食品微生物实验室都在探索和寻找一些准确性高，并快速的检测方法，最近我们分别从美国3M公司和法国生物梅里埃公司获得两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌的培养基，其名称为：
① Petrifilm RSA. Count Plate（由美国3M公司研制生产），是一种薄膜型快速检测金黄色葡萄球菌的计数平板。
② Baird-parker + RPF Agar.（由法国生物梅里埃公司研制生产的用Baird-Parker琼脂加免血浆纤维蛋白原的金黄色葡萄球菌检测计数平板）。
原理：Petrifilm. RSA. 测试薄膜是由二部分组成。第一部分是由黄金色葡萄球菌培养基片，此培养基中含有经修正的Barid-Parker，营养成分加上以冷水可溶解的胶质。第二部分是一种耐热核酸酶（TNase）反应片，含有DNA及甲苯胺兰 ( Toluidine Blue - O )及四唑指示剂 (Tetraeolium)。此指示剂有助于菌落的计数及确定葡萄球菌耐热核酸酶的存在。
耐热去氧核糖核酸（deoxyribonulcas Dnase）为产毒金葡菌之典型特征，此酶非常耐热，在100℃加热30min，不易丧失活性，在130℃之下，其D值为16.6min，此酶之分子量为16800，等电点PH为9.6,耐热去氧核糖酸与检测血浆凝固酶相似，是一种鉴定金黄色葡萄球菌的方法，在Petrifilm. RSA 检测片上，耐热DNA酶反应看起来，呈粉红色环带包围着一个红色或兰色的菌落。
Petrifilm.RSA检测片，必须与Peyrifilm耐热核酸酶反应片一起使用，单独使用将不会显示菌落，因为具有辅助计数菌落的指示剂是在反应片上，而不是在Petrifilm.RSA检测片上。
Baird-parker + RPF agar，这一培养基中含有丰富的营养成分，其中以氯化锂代替亚碲酸钾，使菌落颜色呈黑色，RPF补充有兔血浆和牛纤维蛋白原，以便检测凝固酶活力，胰酶可以抑制全部或部分围绕凝固酶阳性菌落周围沉淀晕环纤维蛋白的溶解，因此凡存在血浆凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌，将在培养基中呈现有晕环的黑色菌落，即可确认，并作计数。

实验实施
材料和方法：
本次实验采用以下3种试剂：
1. 美国3M公司提供的Petrifilm. Rapid. S. aureus Count Plate.
2. 法国生物~梅里埃公司提供的Baird-Parker + RPF agar .
3. 实验室自配Baird-Park琼脂（英国Oxoid）及新鲜兔血浆。

菌种来自美国菌种保存中心（America TyP Culture Collection）。金黄色葡萄球菌共10株菌株，其菌号分别为：
ATCC 27661 ATCC 27664 ATCC 13565 ATCC 51704
ATCC(K) 12600 ATCC(R) 65389 ATCC 25923 ATCC 29213
ATCC 8095 ATCC 12598
非金黄色葡萄球菌菌种5株，其菌号分别为：
ATCC 51813 （大肠杆菌）、ATCC 624 （无乳链球菌）、ATCC 51816 （阴沟肠杆菌）、ATCC 6051 （枯草杆菌）、ATCC 49214 （肠炎沙门氏菌）、自然食品检样，任意购自市场。
本次实验是以同一测试样品经均质并通过无菌生理盐水作10倍递增稀释后取1至2个稀释度同时接种上述三种培养基作平行实验，在取得最终结果后相互进行比对。
上述三种培养基的接种方法是按生产商所提供的使用说明进行操作，另外Baird-Parker Agar 培养基是按SN0172-92标准进行操作。
A、 本次实验共测试已知标准菌种共15株，其中葡萄球菌10株，其他菌种5株（包括大肠杆菌、阴沟肠杆菌、肠炎沙门氏菌、枯草杆菌和无乳链球菌）。
B、 测试自然食品检样共101只（其中包括肉11只、肉类14只、水产品17只、牛奶25只、蔬菜22只、豆制品12只）。

结果：
A、 被检菌种10株，金黄色葡萄球菌在三种培养基上都能检出生长情况良好，同一稀释度的菌液，除个别菌株外在3种培养基计数检测结果基本都在一个数量级上，无显着差异。而5株非金黄色葡萄球菌的菌株在三种培养基上全部不能生长。
B、 自然食品检样共接种101只，每一检样同一稀释浓度分别同时种三种培养基，最终共检出金黄色葡萄球菌45只，占全部检样的44.5％，其中Petrifilm RSA 检出阳性结果为42只，占全部阳性检样的93.3％，Baird-Parker＋RPF Agar. 检出阳性结果26只，占全部阳性检样的57.7％。Baird-Parker. Agar 检出阳性结果32只，占全部阳性检样的71.1％。

讨论
1. 用15株标准菌在3种培养基中的检测，10株金黄色葡萄球菌以同一浓度接种，结果生长良好，其最终计数基本一致，定位在同一数量级，5株非金黄色葡萄球菌接种上述三种培养基全部不长，说明上述三种培养基对金黄色葡萄球菌选择良好。
2. 以101只自然样品同一均质稀释液，同时接种三种培养基，从最终结果来看，对金黄色葡萄球菌的阳性检出率为44.5％
3. 从检测程序来年，Petrifilm. RSA及Baird-Parker＋RPF. Agar. 都在样品接种后28~30h观察结果，并不必再做证实试验，而如以Baird-Parker Agar检测，须在接种后48h观察平板，并挑取可疑菌落转种到营养肉汤中，在经18-24h后做血浆凝固酶或耐热DNA酶试验进行证实，最终计数，前后约须80h。
4. 从本次试验中观察，使用上述三种培养基对食品中金黄色葡萄球菌含量的直接计数检测，其样品接种液的含量拟控制在100个/ml以内，比较容易分清并计数，如菌量过浓，则将会影响最后的读数，因此对新送的被检样品，如在不了解污染的情况下一般必须要做2个以上的稀释度，同时分别接种，才能获得较为满意的结果。
而在Baird-Parker＋RPF Agar及Baird-Parker. Agar接种时必须将1ml样液作三只平板涂布（0.3、0.3、0.4ml）这样就会造成手续繁琐试剂消耗较大，但Baird-Parker. RPF. 培养基也可以1ml样液作倾注培养，并作计数。
5. 在整个测试过程中，我们发现，按使用说明对Petrifilm. RSA. 及Barid-Parker＋RPF. Agar，操作规定在接种24h后观察结果，此时往往由于菌落长得经较小，特征瓜不明显，但如果继续放置一夜以后金葡萄菌落特征明显，并可能会经第一天观察数量有所增加，这样可以提高检测结果的可信度。
6. 由于对上述两种培养基的试用期间我们尚未获得供应商的报价，故无法测算每一样品的测试成本价格。但可以予计上述两面种快速检测培养基的耗材费用要高于常规经典方法（Baird-Parker Agar）的费用。
7. 通过本次实验，我们感到使用美国3M公司生产的Petrifilm. RSA Plate培养基和法国生物－梅利埃公司生产的Baird-Parker RPF. Agar培养基检测中的金黄色葡萄球菌。可以比目前常规检测方法时间可缩短一半。并可以明显节省大量人力。这完全符合实验室快速检测的要求，尤其是对基层较简陋的实验室条件中，更显其使用方便的优越性。