分区划线方法步骤

⑴ 培养基倒平板培养后怎样划线分离

平板划线法分离菌种实验步骤

1、融化培养基

将装有伊红美蓝琼脂培养基的三角瓶放入热水浴中加热至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培养基冷却至50℃左右后，按无菌操作法倒平板(每皿约倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一条稍大于瓶口的缝隙，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

3、作分区标志（操作熟练后此步骤可省略） 在皿底用记号划分成4个不同面积的区域，使A<B<C<D，且各区的夹角应为120°左右，以便使D区与A区所划出的线条相平行、美观。

4、划线操作

1)挑取菌样：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。

2)先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。

3)划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转至划线位置，把接种环通过A区(菌源区)而移至B区，随即在B区轻巧地划上6~7条致密的平行线，接着再以同样的操作在C区和D区划上更多的平行线，并使D区的线条与A区平行(但不能与A区或B区的线条接触！)，最后，将左手所持皿底放回皿盖中。烧去接种环上的残菌。

5、恒温培养

将划线后的平板至37℃倒置培养2~3天。

6、挑单菌落

良好的结果应在C区出现部分单菌落，而在D区出现较多独立分布的单菌落。然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。

7、清洗培养皿

将废弃的带菌平板作煮沸杀菌后进行清洗、晾干。

⑵ 硬盘分区方法和步骤

新购买的机械硬盘、固态硬盘都需要先分区才能使用，新电脑也需要对硬盘进行分区之后才能安装系统，这里详细的说一下硬盘分区流程和注意事项，为初学者做一个参考。

工具/原料

• DiskGenius 分区助手

方法/步骤

• 1

  如果是新购买的移动硬盘、扩容的机械硬盘等直接连接到电脑主机上，运行DiskGenius软件；如果是新电脑、加装固态硬盘等原机器没有系统的情况下硬盘分区需要进入WinPE环境运行DiskGenius，进行分区操作

  

• 分区全部对齐，磁盘就可以正常使用了！

注意事项

• 一个硬盘只能有一个主分区，主分区可以作为活动分区安装系统，主分区外就是扩展分区，扩展分区可以分为若干个逻辑分区

• 如果是固态硬盘，一定要4K对齐，否则降低硬盘性能，差距非常大，普通机械硬盘最好也4K对齐，不过对性能影响有限

⑶ 土壤中自身固氮菌的分离与培养怎样划线

土壤中自身固氮菌的分离与培养划线方法如下：平板划线分离法，是用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”的稀释而达到分离的目的。方法如下:步骤一，倒平板，熔化已经配制好并灭过菌的琼脂培养基，冷却至45℃左右倒平板。水平静置待冷却凝固。
步骤二，将待划线分离的平板倒置于煤气灯的左侧，贴上标签（或做记号），若划线时分区没把握，可在皿底上预先分为四个区。
步骤三，接种环烧红灭菌，并伸入菌种试管内冷却，挑取少量斜面菌苔。
步骤四，左手拿培养皿底，此时皿底尽量与桌面垂直，然后将接种环上的菌种先在平板的A区划3～5条平行线，再烧掉环上剩余的菌种。
步骤五，将烧红的接种环在平板培养基的边缘冷却。然后将平板转动一定角度（约60°），用接种环通过A区向B区做来回平行划线；同样，由B区向C区划线。最后由C区向D区划线。区与区的线条间的夹角最好成120°，这样可使D区的线条与A区线条相平行，并可避免此两区线条接触。最后将平板倒放在培养皿盖中。

⑷ 连续划线法操作步骤

连续划线法步骤：从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。

1、轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。

或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

2、靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环。

3、待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。

培养皿倒置于适温的恒温箱内培养（以免培养过程皿盖冷凝水滴下，冲散已分离的菌落）。培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，镜检后再接种斜面。

划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种。

分区划线法分离时平板分四个区，故又称四分区划线法。划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线。

其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120°左右。

1、先将接种环沾取少量菌在平板1区划3~5条平行线，取出接种环，左手关上皿盖，将平板转动60~70°，右手把接种环上多余菌体烧死，将烧红的接种环在平板边缘冷却，再按以上方法以1区划线的菌体为菌源，由1区向2区作第2次平行划线。

2、第2次划线完毕，同时再把平皿转动约60~70°，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼烧接种环，关上皿盖，同上法培养，在划线区观察单菌落。