采核酸的步骤和方法

A. 核酸检测是怎么做的

1、核酸检测是分子生物学检查，一般是用于检测病原体的核酸。这种检测方法直击病毒的RNA或DNA结构，检测血液中是否存在病毒核酸，诊断有无病原体感染。
2、病毒的特点就是形态非常小，在普通光学显微镜下看不到，肉眼更是无法直接观察。但每种病毒都有其独特的基因序列，通过检测病人体内的病毒核酸，就可判断病人体内是否存在病毒。
3、核酸检测原理：以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强。而没有病毒的样本中，由于没有靶基因扩增，因此就检测不到荧光信号增强。所以，核酸检测，其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸。

B. 核酸检测过程

检测时，医生会用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到试管里面，再交给检验部门做相应的病毒核酸的检查。因此，咽拭子采样前应提前漱口。

核酸检测需要经过取样、留样、保存、核酸提取、上机检测五个步骤。

第一步需要采集人体的分泌物，用鼻拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧咽扁桃体处；

第二步需要医务人员进行留样，将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖；

第三步需要将样本管放入密封袋中保存好并及时送检；

第四步便将需样本送进实验室进行核酸提取；

第五步便进行荧光PCR核酸检测，将提取物进行荧光PCR扩增反应。

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核酸检测的原理

目前的病毒核酸检测试剂盒，多数采用荧光定量PCR方法。检测原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标，通过PCR扩增，使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累计的荧光信号就越强。

所以，核酸检测其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中否有病毒核酸。

C. 核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的戚粗分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

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检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭档仔态荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信行源号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

D. 核酸检测方法有哪些

核酸检测采用咽拭子检测，有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。

口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦，刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情，张口发出“啊——”的声音就可以了，检测过程并没有创伤风险，是非常安全的检测。

检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉，不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔，从下鼻道深入抵达鼻咽后壁，然后捻转棉签取样。棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。

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核酸检测相关知识：

核酸检测是检测病毒的方法，它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测，可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染，以及推测是否具有传染性。

季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份，从而判断被检测者是否属于感染者。

新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了，只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分，可以尽早发现感染者，甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。

感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除，不具有传染性了。目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。

E. 核酸检测流程

核酸检测流程并不复杂，通常带上身份证过去检测就可以了，但有些人因为不知道核酸检测流程，导致在核酸检测前吃东西了，喝酒了等等，从而影响核酸检测的结果，这就不太妥当了，接下来我们来具体了解一下核酸检测流程吧。

核酸检测流程和时间

在医学中核酸检测是比较常见的，那么核酸检测流程和时间是什么呢？

核酸检测流程为：刷健康码，测体温进入门诊大厅。凭身份证/市民卡在“门诊综合服务中心”窗口实名挂号开单缴费。到相关的功能科旁或1楼大厅核酸采样处采样。至于检测结果的时间可能需要二十四小时左右出来的，比较快的话可以在几个小时之内出来的，一般就是4到6个小时。

而正常情况下做核酸检测的整个过程大概需要1~2分钟左右的，其实一般问题都不大的，其实跟报告是没什么关系的，而一般材料的时间大概就是在10秒钟左右的，那要准备、或者是取完了之后，其实这个过程大概就需要二三十秒，动作慢一点的可能就一两分钟就可以了。

核酸检测流程和要求

做核酸检测可以检查出不少病毒，那么核酸检测流程和要求有哪些呢？

核酸检测流程为标本采集、标本转送、标本签收及录入、提取核酸、配制试剂、加样、上机检测。通常标本在紧密包装下被护送到实验室后需求实验室签收，录入信息系统。到达实验室时可以直接用于检测的不是样品，而是需要进行预处理以在扩增前从样品中提取核酸的样品。

在医护人员取样做核酸之前，做核酸的地点通常都会安排相应的填写流程。要做核酸的居民一定要在排队的过程中，提前做好相关内容的填写，以免轮到自己的位次是因为信息填写不完整影响整个队伍的检测效率。还有做核酸检测的人，得注意压一压跳脱的性子。排队过程中，尽量保持安静，也是对医务人员、基层防疫人员的尊重。

核酸检测流程及注意事项

做核酸检测有好几个步骤的，一般核酸检测流程及注意事项什么样呢？

核酸检测是针对新型冠状病毒中一段特异性的基因序列作为靶标，通过PCR扩增技术，将这个目标片段不断的扩增，达到可以用仪器检测到的信号。收到样本手工处理后，需要进行核酸提取，检测人员是直接面对新冠病毒，暴露风险很高。核酸提取成功后，加入制备好的反应体系，经过PCR扩增，目标序列片段呈指数级增加，而每一个经扩增出来的DNA序列，都可以与预先所加入的一段荧光标记探针相结合，从而产生荧光信号，而扩增出来的靶基因越多，所累积的荧光信号就越强，通过专门仪器收集识别荧光信号供专业人员判断扩增产物中有无新冠病毒特有的核酸片段，做出核酸检测阳性或阴性报告。

有人进行核酸检测前，管不住自己的嘴巴。一身酒气烟味就去做检测，这样对医护人员很不友好。一方面吸烟喝酒会给检测结果带来干扰，使核酸检测的结果出现严重的偏差；另一方面会极大干扰排队人群和医务工作者的情绪。

核酸检测流程需要带什么

做核酸检测流程是需要一定证件的，那么核酸检测流程需要带什么呢？

做核酸检测一般都需要带身份证。被检测人员要携带身份证等有效证件，出示健康码，有序排队领取体检条形码，间隔距离至少1米以上，采样完毕，立即离开，避免人员聚集。去医院做核酸检测没带身份证的话，一般可以用其他证件（户口本、医保本及医保卡、市民卡、出生证、护照、港澳台证等）挂号进行核酸检测，具体情况要看各个医院机构的规定。

一般待检人员在工作人员的引导下，填写检测申请单并扫码进行线上信息录入，领取核酸取样所需的压舌板和采样拭子。线上信息提交后，待检人员会收到一条确认短信，经现场工作人员核查身份信息，缴纳检测费用后，就可以进入检测点进行取样。

F. 核酸检测步骤

常规核酸检测样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。权重过程如下：

在获得患者样本后，应尽快进行检测。如果样品需要运送到不能立即测试，他们应当根据指令和打包在低温送到一个特殊的测试机构测试。检测机构收到样品后，应从样品中进行核酸提取，核酸提取试剂应使用经批准的《产品规范》规定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先转录成cDNA，然后扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准的产品规范中规定的荧光定量PCR仪。通过荧光定量PCR获得的样本Ct值，可以判断患者样本是否含有新型冠状病毒。

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目前临床核酸检测主要采用咽喉拭子检测。步骤是让被测者用淡盐水漱口，去除口腔中的细菌，然后将标签贴在标本容器上。

通知检查员咽拭子培养的目的和方法，点燃酒精灯，检查人员收取的张开嘴巴，头发啊，完全暴露的喉咙，培养管长消毒棉签轻轻动作敏感和擦两边的腭扁桃体拱门和咽分泌物，抽样已经完成，在试管口在酒精灯火焰消毒，然后插入试管擦洗，插入后及时检验。

核酸检测是目前诊断病原体最重要的依据，是诊断病原体的重要依据。例如，对于目前COVID－19的检测，病毒核酸检测仍是诊断的金标准。