⑴ 如何悬浮培养贴壁型的细胞
贴壁细胞分为两种,上皮细胞型和成纤维细胞型,在显微镜下观察时,贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形,而且晃动培养液时,细胞不动.
悬浮细胞漂在培养液中,呈圆形,晃动培养液时细胞也随着漂动。
所谓的贴壁培养是指大多数动物细胞在离体培养条件下都需要附着在带有适量正电荷的固体或半腔悔固体的表面上才能正常生长,并最终在附着表面扩展成单层。其基本 操作过程是:先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法分散成细胞悬液,经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加 有适宜培养液的培养皿(瓶、板)中,再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良胡扮好且易于观察,适于实验室研究。但贴壁生长的细胞有接触抑制的 特性,一旦细胞形成单层,生长就会受到抑制,细胞产量有限。如要继续培养,还需将已形成单层的细胞再分散,稀释后重新接种,然后进行传代培养。
而悬浮培养是指少数悬浮生长型动物细胞在离体培养时不需要附着物,悬浮于培养液中即可良好生长。悬浮生长的细胞其培养和传代都十分简便。培养时只需将采集 到的活体动物组织经分散、过滤、纯化、漂洗后,按一定密度接种于适宜培养液中,置于特定的培养条件下即可良好生长。传代时不需要再分散,只需按比例稀释后 即可继续培养。此法细胞增殖快,产量高,培养过程简单,是大规模培养动物细胞的理想模式。但在动物裤圆灶体中只有少数种类的细胞适于悬浮培养。
⑵ 如何做好动物细胞悬浮培养
避免污染,在超净台内操作,操作前半小时先进行紫外杀肢让运菌。
所有用品高温灭菌,或者进行70%酒精擦洗。。
培养过滑知程中,每隔一段时间历梁取出一部分细胞冷冻保存,以防污染后没有细胞可以用。
⑶ 薰衣草组织培养方法是什么
该方法根据植物叶片再生原理,以叶片为外植体,皮侍帆建立生长迅速的愈伤组织悬浮系,进而建立高频稳定再生体系。本发明采用固体—液体悬浮—固体培养的方法,提供了一种薰衣草离体快繁的方法,是在MS培养基上培养薰衣草叶片,建立生长迅速的愈伤组织悬浮培养体系,最后再生薰衣草幼苗,得到薰衣草无性系。本发明薰衣草芽分化率可达92.5%,生根率可达100%。与谈陵固体培养相比,不仅能够提高愈伤组织生长速度和芽分化率,而且具有操作简便,劳动量少和劳动强度小,接种量大的特点,为薰衣草规模化快繁和遗传转化体系的建立奠定基础。
薰衣草组织培养方法,其特征在于按下列步骤进行:
a、选择一年生薰衣草幼嫩叶片为外植体,先用75%酒精表面灭菌
15-25秒,再用0.1%升汞溶液浸泡2-5分钟,然后用无菌水冲洗至干
净,切割成片状,将其接入琼脂固化燃雹MS+2,4-D0.1mg/L+6-BA0.5mg/L
的愈伤组织诱导培养基,15-25天后,得到愈伤组织;
b、将新鲜、松散的愈伤组织接入液体培养基MS+2,4-D0.01-0.1
mg/L+6-BA0.5-1.0mg/L,在25
⑷ 植物细胞悬浮培养的方法有哪些
1 掌握植物悬浮细胞系建立的方法 原理
2 学会对悬浮细胞培养物进行细胞计数及绘制细胞生长曲线
二实验原理
植物细胞悬浮培养 将游离的植物细胞或小的细胞团置于液体培养基中进行培养和饥磨生长的一种技术
将疏松型的愈伤组织悬浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间形成分散的悬浮培橘隐养 次生代谢的工业生产 育种 快速繁殖 原生质体培养 体细胞杂交 基因转化受体等
三 实验用品
1 器材 超净工作台 高压灭菌锅 摇床 恒温培养室等
2 材料 松软的胡萝卜愈伤组织
3 试剂 MS培养基
四 实验方法
1 切取外植体上新长出的愈伤组织—轻轻夹碎—MS培养液
2 置于摇床—震荡培养—圆肢厅观察(25-28·C,100r/m)
⑸ 高二生物。 植物细悬浮培养的原理是什么定义是什么和植物组织...
目的要求是了解植物细胞悬浮培养的基本原理,通过实验掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。并通过实验练习和巩固无菌操作技术。
基本原理:
利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点,比如在培养过程中,植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布,而且琼脂本身也有一些不明的物质悔冲成分可能对培养物产生影响,从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点,当植物的组织在液体培养基中生长时,我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养雀判是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。
一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~12Or/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的,既有游离的单个细胞,也有较大的细胞团块,还有接种物的死细胞残渣。
在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养,因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬碧岁歼浮培养物来说,细胞在培养到第18~25d 时达到最大的密度,此时应进行第一次继代培养。在继代培养时,应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系,就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作,特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株,即可获得携带有目标基因的个体。
⑹ 悬浮生长的细胞如何进行传代培养
翻译过源自雀答atcc的细胞培纤冲养方法,主要步骤包括:1.
细胞的检查2.
培养液的准备3.
收集细胞4.
细胞的计数5.
细胞的接种6.
细胞的培养具体内容可以自己查看顷竖慧。
⑺ 建立悬浮细胞系的关键技术有哪些
悬浮细胞的同步化:同一悬浮培养体系的腊春所有细胞都同时通过含局桐谈坦细胞周期的某一特定时期,保持相对一致的细胞学和生理学状态。