‘壹’ 微生物计数方法有哪些
测定微生物细胞数目的方法有很多，介绍几种
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。
②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。
④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。
此法也是统计样品中活菌的数目。
4.比浊法
原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。”这里说的显微镜直接计数，我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样，可以有两种情况。
另外，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。
‘贰’ 高中常用的细胞计数法有哪几种分别适用于哪种情况
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。 1、 制备细胞悬液 对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程)。如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物制备成细胞悬液。 (1) 终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。 (2) 给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液。 (3) 加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。 2、计数与计算过程 ( 1) 在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 (2) 用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹糟处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。 (3) 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。 (4) 按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度＝(4个大格细胞总数/4)×104个/ml 注意事项： (1) 务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。 (2) 显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。
‘叁’ 血细胞怎么做计数实验
实验
目的原理 了解血细胞计数的原理并掌握红细胞、白细胞、血小板计数的方法，红细胞计数结果结合血红蛋白值还可以计算出红细胞平均血红蛋白量(MCH)可作为生理机能检查和临床诊断的指标。用相应的稀释液将血液稀释若干倍(另有抗凝、固定、着色作用)，置于计数室中，在显微镜下计数一定容积内的血细胞数。 稀释血液有血细胞吸管法和试管法，本实验采用后者。
实验对象与用品 鸡或家兔。血细胞计数板、专用盖玻片、吸血管、显微镜、手揿计数机、血细胞稀释液、拭镜纸、毛笔。
方法步骤
(一)熟悉计数室
血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer) 计数板在中央横沟的两边各有一计数室，两计数室结构完全相同。计数室较两边的盖玻片支柱低0.1毫米。因此，放上盖玻片时，计数板与其间距即计数室空间的高为0.1毫米(图8-1)。在低倍显微镜下可见计数室被双线划分成９个边长为１毫米的大方格。四角的大方格又各分为１６个中方格，这是用来计数白细胞的。中央大方格被划分为２５个中方格，每一中方格又划分成１６个小方格(图8－2称２５×１６，也有的计数板为１６×２５的，小方格面积一致)。中央大方格的四角及中心５个中方格(１６×２５者则为四角上的中方格)为红细胞或血小板计数范围。
(二)红细胞计数
先用试管稀释法制备禽类血细胞悬液：将禽类红细胞稀释液Ⅰ、Ⅱ分别置水浴锅中预热到４１～４２℃，取Ⅰ液１mL于试管中，用吸血管加入新鲜鸡血(或肝素抗凝血)２０霯，再加入Ⅱ液１mL混匀，置该水浴锅中保温５０s左右，置室温，即为待检的血细胞悬液。可用于充液计数。取干洁的计数板，置于水平的显微镜载物台上，盖上盖玻片，使两侧各空出少许。摇匀血细胞悬液，用滴管吸取，将滴管尖轻轻置于盖玻片边缘外，让滴出的血细胞悬液凭毛细管作用吸入计数室内，刚好充满计数室为宜(图8－3)。静置２min后计数，先用低倍镜观察，不均匀则抛弃。计数时用虹彩、集光器、反光镜等调节入射光角度和强度，认清 计数室位置。采用“由上至下，由左至右，顺序如弓”的顺序，对压边线细胞采取“数上不数下，数左不数右”的原则(图8～4)。依次计数并记录５个中方格中分别有多少个红细胞。
(三)血小板计数
采取血液并立即与抗凝剂混合(由于血小板具有趋向于凝集和粘附于异物表面的特性)。以血小板稀释液(１０％EDTANa2 １０mL与０.８％NaCl９０mL组成)将血液稀释２００倍，混匀后滴入血细胞计数室内，静置１５min，待血小板下沉后。于高倍镜下计数(同红细胞 计数)。在高倍镜下血小板呈椭圆形、圆形或不规则的折光小体分布于红细胞间，注意与杂质相区别。也可用复方尿素稀释液稀释血液，应静置２０min以上，待红细胞充分溶解后再充液计数。
(四)计算
按计数室构造及血液稀释倍数,将血细胞计数结果换算成每立方毫米中血细胞的个数。以每１００mL血液中的血红蛋白量（g）乘以１０再除以红细胞数（106/mm3）得红细胞平均血红蛋白量（MCN，单位μμg）。
(五)仪器洗涤
计数板、盖玻片和测定管用清水冲洗，再用绸布或细布沾干。
要求与思考题
１.计算结果，报告中简要说明计算过程。求出本组同学测定的均值并评价之。
２.了解各类稀释液成分，分析各物质的作用。
注意事项
１.充液前应充分混匀血细胞悬液，充液要连续、适量，充液后应待血细胞下沉后再计
数。
２.计数板、盖玻片、吸血管及测定管等用过后必须立即按要求洗涤干净。
组织建议 将相同类型的计数板集中在一个组内，便于指导。本实验属于基本操作，各位朋友均应独立操作得出结果。
附注：
1.本法可同时计数禽类白细胞数，计算方法也类似。
2.禽类血细胞稀释液为：
Ⅰ液
中性红 25.0mg
NaCl 0.9g
加蒸馏水至100.0mL
Ⅱ液
结晶紫 12.0mg
柠檬酸钠 3.8g
福尔马林 0.8mL
加蒸馏水至100.0mL
3.哺乳类红细胞稀释液可用生理盐水或阿扬(Hayem)氏液(NaCl 1g，Na2SO4·10H2O 5g，HgCl2 0.5，加蒸馏水至200mL过滤)。白细胞稀释液成分为冰醋酸0.1mL，1%龙胆紫1mL加蒸馏水至100mL，或直接用2%醋酸溶液。
4.血小板复方尿素稀释液配方为：尿素10g，柠檬酸钠0.5g，甲醛0.1mL，加蒸馏水到100mL，混合，待完全溶解后过滤。置冰箱内可保存1～2周。
‘肆’ 如何对活细胞进行计数
用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液,取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法.一是首先用细胞培养液稀释细胞样本,然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）.或者直接用台盼蓝溶液稀释样本.
例如：1/40稀释样本
加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释),混合,然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).
3. 涡悬振荡,混合稀释的细胞样本.
4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片,然后用脱脂绵擦干.
5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室.
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本.
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室.不要过满或不足.
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞.分别死细胞和活细胞.死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏,细胞吸收台盼蓝),活细胞透明有折光（未染色）.
9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL
‘伍’ 普通实验室最常用的细胞计数的方法是什么
细胞计数就是从需要计数的细胞悬液中取一定量细胞进行计数,并通过计数得知原始细胞悬液中的细胞密度以及细胞总和数.在细胞计数时,若细胞浓度太高,可进行必要的稀释.常用的细胞计数有细胞电子记数仪计数法和细胞板计数法,但电子计数仪记数法在许多实验室尚未完全推广, 细胞板计数法仍是实验室目前常用的方法.
1. 制备鸡红细胞悬液:取50ml小烧杯一只,以一份鸡血加十份0.17mol/L氯
化钠溶液稀释,形成一种不透明的红色液体,此为鸡红血细胞悬液.悬液制备后应轻轻反复吹打, 使细胞充分分散.
2. 准备记数板:用酒精清洁鸡血细胞悬液及专用盖玻片,再用绸布擦净.
3. 加样: 细胞记数板盖上专用盖玻片,用无菌细口吸管吸取一滴鸡血细胞悬
液,从记数板上盖玻片的边缘一侧缓缓滴入,使之充满记数板和盖玻片之间的的空隙中,注意:加样量不要过多溢出盖玻片,也不要过少或带有气泡.不理想时要重新加样,否则会影响细胞计数结果.
4. 计数:稍候片刻,将计数板放在低倍镜下观察计数.计算出计数板的四角大方格(每个大方格又分16个小方格)内的细胞数.计数时,只计数完整的细胞,若聚成一团的细胞 则按一个细胞计数.在一个大方格中,如果有细胞位于线上,一般计上限细胞不计下限细胞,计左线细胞不计右线细胞.
5. 计算:计完数后,需换算出每mol悬液中的细胞数.由于计数板中每一方格的面积为0.1cm2 ,高为0.01cm,这样它的体积为0.0001cm3 即0.1mm 3 .由于1ml=1000 mm 3 ,所以每一大方格内细胞数×104=细胞数/ ml,故可按下式计算:
细胞悬液细胞数/ ml=4个大方格总数/4×104. 如计算前已稀释,可再乘稀释倍数.
‘陆’ 到底怎样计数细胞呢稀释倍数怎么算
一般来说，细胞的计数方法是：细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000×稀释倍
数
操作步骤：
1.取10ul细胞悬液与10ul台盼兰混合均匀于1.5ml离心管中。
2.盖上盖玻片，取10ul混合液自血球计数盘上方加入，于10倍生物显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞被染成蓝色。
3.分别计数四个大方格，得到细胞总数，再除以4，乘以稀释倍数（本实验为2），最后乘以104，即为每ml细胞悬液中细胞数。若细胞位于线上，只计上线与左线（计上不计下，计左不计右）。
注：
1.细胞数/ml＝4大格细胞总数×稀释倍数×104/4；每一大格的体积为＝0.1cm×0.1cm×0.01cm＝10-4ml
2.计数板计数时，最适细胞浓度为5～10×105个/ml，此范围外计数误差偏大。
3.高浓度细胞悬液，可取出部分作稀释或连续稀释后计数。
例
活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数＝243
平均细胞数/方格＝60.75；稀释倍数＝2；
细胞数/ml：60.75×104×2＝1.22×106；
细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml＝12.2×106
存活率：225/243﹦92.6%