平板划线方法和步骤

㈠ 平板划线法步骤图示

在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，因此按照图中划线顺序（1→2→3→4→5），整个划线过程中需要对接种环进行灼烧的次数为6次．
故选：D．

㈡ 培养基倒平板培养后怎样划线分离

平板划线法分离菌种实验步骤

1、融化培养基

将装有伊红美蓝琼脂培养基的三角瓶放入热水浴中加热至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培养基冷却至50℃左右后，按无菌操作法倒平板(每皿约倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一条稍大于瓶口的缝隙，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

3、作分区标志（操作熟练后此步骤可省略） 在皿底用记号划分成4个不同面积的区域，使A<B<C<D，且各区的夹角应为120°左右，以便使D区与A区所划出的线条相平行、美观。

4、划线操作

1)挑取菌样：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。

2)先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。

3)划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转至划线位置，把接种环通过A区(菌源区)而移至B区，随即在B区轻巧地划上6~7条致密的平行线，接着再以同样的操作在C区和D区划上更多的平行线，并使D区的线条与A区平行(但不能与A区或B区的线条接触！)，最后，将左手所持皿底放回皿盖中。烧去接种环上的残菌。

5、恒温培养

将划线后的平板至37℃倒置培养2~3天。

6、挑单菌落

良好的结果应在C区出现部分单菌落，而在D区出现较多独立分布的单菌落。然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。

7、清洗培养皿

将废弃的带菌平板作煮沸杀菌后进行清洗、晾干。

㈢ 平板划线的操作步骤

用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到纯化分离微生物的一种方法。是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。用于目的微生物的分离。 记得先要灭菌处理，在无菌环境下接种。每次接种完后要灼烧接种环以去处菌种，再在上一次划线的末端继续划线。

㈣ ]常见的平板划线法有

常见的平板划线法有如下。
1、连续划线分离法：此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板1/5处密集涂布，然后来回作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。
2、分区划线分离法：本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区(第一区)内，约占平板1/5面积，再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区，均将接种环灭菌一次。

㈤ 一般工件的划线方法、步骤

(一)划线准备工作

划线的质量将直接影响工件的加工质量。要保证划线质量,就必须做好划线前有关准备工作。

1)清理工件,对铸、锻毛坯件,应将型砂、毛刺、氧化皮除掉,并用钢丝刷刷净,对已生锈的半成品将浮锈刷掉。

2)分析图样,了解工件的加工部位和要求,选择好划线基准。

3)在工件划线部位,按工件不同材料涂上合适的涂料。

4)擦干净划线平板,准备好划线工具。

(二)常用的基本划线步骤

1)仔细分析图纸,明确工件及其划线各有关部分在机械中的作用和要求,了解加工工艺。

2)选择划线基准。

3)清理并检查工件,去除毛刺、飞边、泥沙、油污等。

4)工件涂色。

5)划线。

6)仔细检查划线是否正确,有无漏划。

7)在线条上轻轻冲眼。

㈥ 生物中接种方法→平板划线法要注意什么

（1）要注意全程无菌操作；

（2）滑动时用力要均匀，切勿将接种环嵌入培养基内；

（3）平板应较硬、较厚、表面干燥；

（4）需要分区的时候，划完一个区后必须烧去接种环上的残菌，待冷却后再划另一个区；

（5）划线的线条宜平行、密集、整齐。

接种是食用菌生产中的关键环节之一，如果接种技术不过关，即会造成杂菌污染，成活率低而前功尽弃。无论是菌种分离、传代还是扩繁，都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。

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常用的接种方法

1、三点接种

在研究霉菌形态时常用此法。此法是把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。

2、穿刺接种

在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针，用的培养基一般是半固体培养基。用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。

3、浇混接种

将待接的微生物和45℃左右的固体培养基进行混合，这样菌液就达到稀释的目的，待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。

4、涂布接种

将菌液倒入凝固的平板上面，用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落

5、注射接种

用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。

6、活体接种

活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。

㈦ 划线的要求、基准、步骤是什么

1、以两个相互垂直的平面（或直线）为基准；

2、以两条相互垂直的中心线为基准；

3、以一个平面和一条中心线为基准。

零部件划线下料要求如下：

（1）划线时应做到线条清晰、均匀、数字准确，各种划线、符号，应完整准确，各线条样冲眼的偏差<0.5mm。

（2）划线偏差要求受压元件圆筒形部分的同一截面上最大直径与最小直径之差不应大于其公称内径的0.5%；锅壳每米长度内的直线度不应大于1.5mm，全长直线度不应大于7mm；锅壳总长度偏差范围为±15mm。根据以上要求确定，根据筒节直径算出的展开料的两对角线划线偏差、周长划线偏差。

型钢下料(包括管、板材的下料)

（1）内外弯曲的角钢、槽钢，按展开公式加装夹、加工余量。

（2）拼接或对接后，必须进行平面校正，达到图纸、工艺要求。

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划线工具使用方法

1、平台。一般由铸铁制成。工作表面经过精刨或刮削，也可采用精磨加工而成。较大的划线平板由多块组成，适用于大型工件划线。它的工作表面应保持水平并具有较好的平面度，是划线或检测的基准。

2、方箱。一般由铸铁制成，各表面均经刨削及精刮加工，六面成直角，工件夹到方箱的V形槽中，能迅速地划出三个方向的垂线。

3、划规。划规由工具钢或不锈钢制成，两脚尖端淬硬，或在两脚尖端焊上一段硬质合金，使之耐磨。可以量取的尺寸定角度、划分线段、划圆、划圆弧线、测量两点间距离等。

4、划针。一般由4～6mm弹簧钢丝或高速钢制成，尖端淬硬，或在尖端焊接上硬质合金。划针是用来在被划线的工件表面沿着钢板尺、直尺、角尺或样板进行划线的工具，有直划针和弯头划针之分

5、样冲。用于在已划好的线上冲眼，以保证划线标记、尺寸界限及确定中心。样冲一般由工具钢制成，尖梢部位淬硬，也可以由较小直径的报废铰刀、多刃铣刀改制而成。

㈧ 连续划线法操作步骤

连续划线法步骤：从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。

1、轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。

或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。

2、靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环。

3、待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。

培养皿倒置于适温的恒温箱内培养（以免培养过程皿盖冷凝水滴下，冲散已分离的菌落）。培养后在划线平板上观察沿划线处长出的菌落形态，镜检后再接种斜面。

划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种。

分区划线法分离时平板分四个区，故又称四分区划线法。划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线。

其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120°左右。

1、先将接种环沾取少量菌在平板1区划3~5条平行线，取出接种环，左手关上皿盖，将平板转动60~70°，右手把接种环上多余菌体烧死，将烧红的接种环在平板边缘冷却，再按以上方法以1区划线的菌体为菌源，由1区向2区作第2次平行划线。

2、第2次划线完毕，同时再把平皿转动约60~70°，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼烧接种环，关上皿盖，同上法培养，在划线区观察单菌落。

㈨ 土壤中自身固氮菌的分离与培养怎样划线

土壤中自身固氮菌的分离与培养划线方法如下：平板划线分离法，是用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”的稀释而达到分离的目的。方法如下:步骤一，倒平板，熔化已经配制好并灭过菌的琼脂培养基，冷却至45℃左右倒平板。水平静置待冷却凝固。
步骤二，将待划线分离的平板倒置于煤气灯的左侧，贴上标签（或做记号），若划线时分区没把握，可在皿底上预先分为四个区。
步骤三，接种环烧红灭菌，并伸入菌种试管内冷却，挑取少量斜面菌苔。
步骤四，左手拿培养皿底，此时皿底尽量与桌面垂直，然后将接种环上的菌种先在平板的A区划3～5条平行线，再烧掉环上剩余的菌种。
步骤五，将烧红的接种环在平板培养基的边缘冷却。然后将平板转动一定角度（约60°），用接种环通过A区向B区做来回平行划线；同样，由B区向C区划线。最后由C区向D区划线。区与区的线条间的夹角最好成120°，这样可使D区的线条与A区线条相平行，并可避免此两区线条接触。最后将平板倒放在培养皿盖中。