㈠ 测植物叶片内叶绿素含量的方法是什么
用不同提取介质(丙酮、丙酮一乙醇混合液、95 乙醇)浸提不同植物材料，采用分光光度法测定提取液叶绿素含量，其吸收光谱在长光波段基本相同，因此可用AmorL法公式计算叶绿素含量综合前人及本试验结果，选用丙酮和无水乙醇(2：1)混合提取液浸提叶绿素效果较好，沸水浴中可快速提取叶绿素，但也会破坏叶绿素．若能结合提取介质的选择，也可减少对叶绿素含量的影响，例如采用丙酮一乙醇混合液并加热，这可快速提取大批量植物样品,光会使提取液叶绿素水平下降，所以在浸提过程中要尽量避免光照。
㈡ 怎样测叶绿素a 以及怎样进行蓝藻计数
欲知封闭水域会否出现藻类疯长，如蓝藻爆发等现象，应监测水域中的藻类数量以及水质，由于对藻类等浮游植物采用计数的方法测定误差较大，耗时费力，对检测人员的工作经验要求相对较高，一般可测定水中的叶绿素a含量代替藻类测定。当水中的叶绿素a含量突然增高，而且水中含有大量氮、磷等营养物质，加上阳光照射强烈，气候炎热等因素，该水域极有可能发生藻类疯长，可通知各有关部门尽早采取应对措施。
因为藻类是一类含叶绿素的、光合自养的、无胚的原植体植物，在浮游藻类里叶绿素a的含量大约占有机物比重的1～2%，是估算藻类生物量的较好指标。可预先测定藻类计数和叶绿素含量的相关关系，以叶绿素a的含量来推算藻类的数量，即通过测定水中的叶绿素来快速了解藻类的大致数量。
测定叶绿素a的仪器和方法有许多种，分光光度法测定叶绿素a是一简便易行的测定方法，水样经离心或过滤浓缩、研磨、丙酮提取后，定容，取上清液分别测量750nm、645nm、663nm、652nm等几个波长下的吸光度值，根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
分光光度法测定叶绿素a，与测定其他物质稍有不同，如：测磷只需测定单一波长的吸光度值，再以该吸光度值代入由标准溶液测得的校准曲线计算含磷量。而叶绿素a无法使用校准曲线，需用几个波长下的吸光度值，根据经验公式来分别计算出各项指标的含量。因为叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b等物质组成，试液是多组分的混合溶液，在试液中分离这几类物质的难度较大，且无必要。叶绿素a在645nm和663nm 处均有吸收，在645nm处吸光系数较小，为16.75，在663nm 处较大，为82.04；叶绿素b 在645nm和663nm 处亦都有吸收，但在645nm处吸光系数较大，为45.60，在663nm 处较小，为9.27。由此可知：叶绿素a的吸收峰值出现在663nm 处，该吸收曲线延伸到645nm处，在此波长处的吸收系数不如在663 nm 处大，因此在计算公式中求算叶绿素a的含量时，需扣除叶绿素b在663nm和645nm 处的吸光度值，再进行计算。
标准分析方法要求，叶绿体色素提取液不可浑浊，在710nm或750nm波长下测量吸光度，其值应小于叶绿素a吸收峰的吸光度值的5％，否则应重新过滤。假定样品在663nm处的吸光度值为0.03，则在750nm处的吸光度值不得大于0.0015，对试液的清澈程度要求很高，测量710nm或750nm的目的是避免悬浮物质的干扰，一般测量水中的浑浊度所采用的波长为680nm，为避免在680nm处仍有叶绿素a产生的吸收值，故将测量浑浊度的波长选在710nm以上。在计算公式中，凡参与计算的各吸光度值都应减去710nm处的吸光度值，以扣除悬浮物质的干扰。
采用分光光度法测定叶绿素含量，对测量仪器分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素a的测定误差为2％，叶绿素b为19％，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和b来校正。
㈢ 测叶绿素的方法
叶绿素含量的测定方法主要有紫外分光光度法、荧光分析法、活体叶绿素仪法、光声光谱法和高效液相色谱法。不过目前应用最为广泛的还是分光光度法。
叶绿素提取液的吸收光谱表明：有两个强吸收峰，分别在红光区和蓝紫区，不同提取溶剂和原料所得的叶绿素溶液的吸收光谱比较相似。叶绿素a、叶绿素b的红区最大吸收峰分别在663nm、645nm附近，在蓝紫区分别为429nm、453nm附近。由于提取溶剂和原料不同，对叶绿素提取液进行光谱扫描后，所得的最大吸收值可能有较小范围的浮动。
高效液相色谱(HPLC)定量检测叶绿素含量准确率较高，效果很好。用甲醇和丙酮作为流动相，体积比为80：20时，同时在流动相中加入质量分数为0.1%的冰醋酸，流速为1.0mL/min。利用每一种色素的色谱峰面积进行定量，叶绿素a、叶绿素b的定量可通过外标法由工作曲线求得。[8]
稳定性影响因子
光
在活体植物中，叶绿素得到了很好的保护，既可以发挥光合作用，又不会发生降解。但离体叶绿素对光照很敏感，光和氧气作用可导致叶绿素不可逆的分解。在自然条件或以胶态分子团存在的水溶液中，叶绿素在有氧的条件下，可进行光氧化而产生自由基，因此一些研究人员认为叶绿素的光氧化降解必需有氧分子参与，而且其降解速率随氧分子浓度的升高而加快。单线态氧和羟基自由基是叶绿素光化学反应的活性中间体，可与叶绿素吡咯链作用而进一步产生过氧自由基和其他自由基，最终可导致卟啉环和吡咯链的分解既而造成颜色的褪去。当然影响光氧化的因素有很多，比如体系中的水分、温度、光照时间、光照强度、光的波长范围等等，在这些影响因素中主要有光照时间、光照强度、光的波长范围、氧的浓度。目前在此方面的研究主要集中在自然光(复合光)对色素的影响而且大多数研究不是很深人。对于单色光(不同波段的光)对叶绿素稳定性的影响研究方面的报道却较少。
叶绿素酶
已有研究表明，叶绿素酶是一种糖蛋白。叶绿素酶催化叶绿素结构中的植醇键而水解生成脱植叶绿素，是叶绿素降解中的关键酶。叶绿素酶是以叶绿素作为底物的，它是一种酯酶。脱镁叶绿素也是叶绿素酶的底物，酶促反应的产物是脱镁脱植叶绿素。叶绿素酶的最适反应温度在60～80℃范围，实验证明，叶绿素酶在80℃以上其活性下降，100%时已完全失活。
温度
一些研究表明，叶绿素提取液在不同受热温度下，其降解速率曲线有明显的拐点，叶绿素在80℃以下，降解速度较慢，90℃以上降解速度急剧加快。总体而言，随着温度的升高，叶绿素降解的速率是逐渐加快的，只是较低的温度下降解速率不明显。
pH值
㈣ 叶绿素a的测定方法有哪些各有哪些优缺点
叶绿素a的测定方法有哪些
一.单色分光光度法测定叶绿素含量时，要测定665和750nm处的吸光度．根据文献，665nm处光密度值应该在0.1-0.8之间.
叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。
回
二.叶绿素含量测定选取待测样品0.5g,用80%丙酮溶液抽提,定容到10mL,测652nm处吸光度.
计算方法方式:
计算样品叶绿素总量
Ct= D652× 1000/34.5 (1)
式中Ct-- 样品总叶绿素含量,mg/L;D652-- 样品丙酮抽提液在652nm处的吸光值。