亚硝酸盐的测定方法步骤

1. 食品中亚硝酸盐的测定

(一)亚硝酸盐测定
2原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
3试剂
实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
3.1氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。
3.2硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O)，用水溶解，并稀释至1000mL。
3.3氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
3.4对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
3.5N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
3.6显色剂：临用前将N－1－萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
3.7亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
3.8亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。

2. 谁知道亚硝酸盐怎么检测越简单越好

亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺起重氮化作用，
再与盐酸N-(1-萘基)-乙烯二胺发生偶合反应，
生成紫红色的偶氮染料.

3. 测亚硝酸盐含量操作

GB5009.33—2010 分光光度法

1、原理

亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定测定。

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。

2、试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。

2.1 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O）

2.2 乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）

2.3 冰醋酸（CH3COOH）

2.4 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）

2.5 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）

2.6盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）

2.7亚硝酸钠（NaNO2）

2.8硝酸钠（NaNO3）

2.9锌皮或锌棒。

2.10硫酸镉。

2.11亚铁氰化钾溶液(106g/L)：

称取106.0g 亚铁氰化钾（2.1），用水溶解，并稀释至1000mL。

2.12乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0g乙酸锌（2.2），先加30 mL 冰醋酸（2.3）溶解，用水稀释至1000mL。

2.13饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠（2.4），溶于100 mL 热水中，冷却后备用。

2.14对氨基苯磺酸溶液（4 g/L） ：称取 0.4g对氨基苯磺酸（2.5），溶于100mL20%

（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

2.15盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺（2.6），溶于100mL 水中,

混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

2.16亚硝酸钠标准溶液（200 μg/mL）：准确称取0.1000g于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

2.17亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于 200mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

2.17硝酸钠标准溶液（200 μg/mL，以亚硝酸钠计）：准确称取0.1232g 于110 ℃～120

℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于入500mL 容量瓶中，并稀释至刻度。

2.18硝酸钠标准使用液（5 μg/mL）：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50mL，置于100mL

容量瓶中，加水稀释至刻度。

3、仪器和设备

3.1 天平：感量为0.1mg 和1mg。

3.2组织捣碎机。

3.3超声波清洗器。

3.4恒温干燥箱。

3.5分光光度计。

4、测定

4.1试样的预处理

新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。

4.2提取

称取5g（精确至0.01g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于

50 mL烧杯中，加12.5 mL 饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以 70 ℃左右的水约300mL 将试样洗入500 mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

4.3提取液净化

在振荡上述提取液时加入5mL 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入5 mL 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度, 摇匀, 放置30 min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液30mL, 滤液备用。

4.4亚硝酸盐的测定

吸取40.0mL 上述滤液于50mL带塞比色管中，另吸取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 μg、1.0 μg、2.0 μg、3.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0μg、12.5 μg亚硝酸钠），分别置于50mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3min～5min 后各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用2cm 比色杯，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。

5、分析结果的表述

5.1亚硝酸盐含量计算

亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按式（3）进行计算

式中：

X1——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

A1——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）；

m——试样质量，单位为克（g）；

V1——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；

V0 ——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

6、精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

4. 实验室中亚硝酸盐应怎样鉴定

亚硝酸盐具有强还原性，所以重氮化是其特征反应之一

一、 测定方法 重氮化偶合分光光度法 质量标准
二、 方法依据 《生活饮用水卫生规范》（2001）
三、 测定范围 1. 本法用重氮化偶合分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的亚硝酸盐氮。 2. 本法适用于测定生活饮用水及其水源水中亚硝酸盐氮的含量。 3. 水中三氯胺产生红色干扰。铁，铅等离子可能产生沉淀，引起干扰。铜离子起催化作用，可分解重氮盐使结果偏低，有色离子干扰，也不应存在。 4. 本法最低检测质量为0.05µg亚硝酸盐氮，若取50mL水样，最低检测质量浓度为0.001mg/L。
四、测定原理 在pH1.7以下，水中亚硝酸盐与氮基苯磺酰胺重氮化，再与盐酸N-(1萘)-乙二胺产生偶合反应。生成紫红色的偶氮染料。比色定量。
五、试剂 1.氢氧化铝悬浊液 称取125g硫酸铝钾[KAl(SO4)2.12H2O]或硫酸铝铵[NH4Al(SO4)2.12H2O]溶于1000mL纯水中。加热至60oc，缓缓加入55mL氨水(ρ20=0.88g/mL)。使氢氧化铝沉淀完全。充分搅拌后静置，弃取上清液。用纯水反复洗涤沉淀，至倾出上清液中不含氯离子（用硝酸银溶液试验）。然后加入300mL纯水成悬浊液，适应前振摇均匀。 2.对氨基苯磺酰胺溶液：（10g/L） 3.盐酸N-(1萘)-乙二胺溶液（1.09g/L） 4.亚硝酸盐氮标准储备液[ρ(NO2-_N)=50µg/mL]： 称取0.2463g在玻璃干燥器内放置24h的亚硝酸钠（NaNO2），溶于纯水中，并定容至1000mL。每升加2mL氯仿保存。 5.亚硝酸盐氮标准使用液[ρ(NO2-_N)=0.1µg/mL]： 取10.00mL标准储备液于容量瓶中，用纯水定容至500mL。再从中吸取10mL，用纯水于容量瓶中定容至100mL。
六．仪器 具塞比色管50mL 分光光度计
七．分析步骤 1.若水样中浑浊度或色度过大，可先取100mL，加入2mL氢氧化铝悬浮液，搅拌后静置数分钟，过滤。 2.先将水样或处理后的水样用酸或碱调进中性，取50mL置于比色管中。 3.另取50mL比色管配制标准浓度系列。其中空白与最低检测限必须配制。其他系列视检测的具体情况而定。 4.向水样及标准系列中分别加入1mL对氨基苯磺酰胺溶液。摇匀后放置2-8min，加入1.0mL盐酸N-(1萘)-乙二胺溶液。立即混匀。 5.于540nm波长下，用1 cm比色皿，以纯水作参比，在10min-2hr内测定吸光度。如含量低于4mg/L，改用3cm比色皿。 6.绘制标准曲线。从标准曲线上查得水样中亚硝酸盐氮的含量。
八、计算 ρ（NO2——N）=m/V 式中：ρ（NO2——N）----水样中亚硝酸盐氢的质量浓度，㎎/L m----从标准曲线上查得样品中亚硝酸盐氢的质量，㎎ v----水样体积，mL

5. 亚硝酸盐定量测定可以用什么方法

亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定。

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由测得的亚硝酸盐总量减去试样中亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。

硝酸盐和亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。人体内硝酸盐在微生物的作用下可还原为亚硝酸盐，N-亚硝基化合物的前体物质。

外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。

(5)亚硝酸盐的测定方法步骤扩展阅读

食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：

用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，（国标规定食盐（精盐）中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg）。

当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。

6. 亚硝酸盐检测方法是什么

亚硝酸盐的检测方法有使用亚硝酸盐快速检测管、检测硝酸盐试纸条法、光度法、示波极谱法、荧光分析法、离子色谱法、毛细血管离子电泳法、液相色谱法。
亚硝酸盐是一类无机化合物的总称。主要指亚硝酸钠，亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水

7. 食品中亚硝酸盐的测定

(一)亚硝酸盐测定
2
原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与n－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
3
试剂
实验用水为蒸馏水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。
3.1
氯化铵缓冲液：1l容量瓶中加入500ml水，准确加入20.0ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至ph9.6～9.7。
3.2
硫酸锌溶液(0.42mol/l)：称取120g硫酸锌(znso4·7h2o)，用水溶解，并稀释至1000ml。
3.3
氢氧化钠溶液(20g/l)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1l。
3.4
对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
3.5
n－1－萘基乙二胺溶液(1g/l)：称取0.1gn－1－萘基乙二胺，加60%乙酸溶解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
3.6
显色剂：临用前将n－1－萘基乙二胺溶液(1g/l)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
3.7
亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。
3.8
亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。

8. 亚硝酸盐的含量测定

由此，测定亚硝酸盐的含量是食品安全检测中非常重要的项目。
部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以NaNO2计） 品 名 限量标准mg/kg 品 名 限量标准mg/kg 食盐（精盐）、牛乳粉 ≤2 香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊 肉 ≤20 鲜肉类、鲜鱼类、粮食 ≤3 肉制品、火腿肠、灌肠类 ≤30 蔬菜 ≤4 其他肉类罐头、其他腌制罐头 ≤50 婴儿配方乳粉、鲜蛋类 ≤5 西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头 ≤70 说明：
①生活饮用水中常存有微量的亚硝酸盐不能作为测定用稀释液。
②若显色后颜色很深且有沉淀产生或很快退色变成浅黄色，说明样品中亚硝酸盐含量很高，须加大稀释倍数重新测定。
③对超标样品应进行重复实验，有条件时送实验室准确定量。
常温避光保存 有效期18个月，生产日期见包装。
附：
亚硝酸盐快速检测管 使用说明：
方法原理：按照国标GB/T 5009.33做成的速测管，与标准色卡比较定量。 1. 食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，（国标规定食盐（精盐）中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg）。当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。2. 液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐的含量mg/L（以NaNO2计）。（牛乳及豆浆也可直接检测，结果不得超过0.25mg/L ，有颜色的液体样品可加入一些活性炭脱色过滤后测定）。
3. 固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量。 某些泌尿系统存在的细菌可以将尿中蛋白质代谢产物硝酸盐还原为亚硝酸盐因此测定尿液中是否存在亚硝酸盐就可以快速间接的知道泌尿系细菌感染的情况作为泌尿系感染的筛查试验。
临床上尿路感染发生率很高并且有时是无症状的感染在女性病人中尤其如此诊断尿路感染需做尿细菌培养需较长时间和一定条件而尿亚硝酸盐定性实验可以很快的得到结果有助于该病辅助诊断。
当明显尿路感染者利用细菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐的特性酚类偶联产生红色为阳性反应。
尿亚硝酸盐阳性率取决于尿液在膀胱中存留时间大于4小时阳性率可达80%若尿路感染细菌不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐或尿在膀胱停留时间较短或尿中缺乏亚硝酸盐也会产生阴性结果阳性结果提示尿中存在细菌数100000/ml以上。
正常值：阴性记为(-) 亚硝酸盐阳性结果常见于：由大肠杆菌(大肠埃希氏菌)引起的肾盂肾炎其阳性率占到总数的三分之二以上；由大肠埃希菌等肠杆菌科等细菌引起的有症状或无症状的尿路感染膀胱炎菌尿症等。
尿亚硝酸盐试验阴性时并不表示没有细菌感染只是由于某些不具备还原硝酸盐能力的细菌引起的泌尿系感染不能显示阳性这类细菌有不动杆菌等非发酵菌或尿液在膀胱中未能潴留4小时以上。
注意若尿路感染细菌不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐或尿在膀胱中存留较短或尿中缺乏硝酸盐也会产生阴性结果。

9. 食品中亚硝酸盐的测定是什么

食品中亚硝酸盐的测定可以用离子色谱法进行测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,采用相应的方法提取和净化,以氢氧化钾溶液为淋洗液,阴离子交换柱分离,电导检测器或紫外检测器检测。以保留时间定性,外标法定量。

亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定,硝酸盐采用镉柱还原法测定，试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料,外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐,测得亚硝酸盐总量,由测得的亚硝酸盐总量减去试样中亚硝酸盐含量,即得试样中硝酸盐含量。

防止亚硝酸盐中毒注意事项

首先要防止错把亚硝酸盐当做食盐用，在厨房不应该存放此类物品，蔬菜应该妥善保存，防止腐烂不吃腐烂的蔬菜等。吃剩的蔬菜，这些不可在高温下存放长时间后再使用。不要吃大量刚腌的菜，腌菜时，盐应该多放至少腌制15天以上以后再使用。

不要在短时间内吃大量叶菜类蔬菜，或先用开水浸泡5分钟弃汤后再烹调。肉制品中，硝酸盐和亚硝酸盐用量要严格按国家卫生标准规定不可多加，苦井水勿用于煮粥，尤其不要存放过夜。

以上内容参考网络-亚硝酸盐

10. 亚硝酸盐检测方法是什么

1.食盐中亚硝酸盐的快速检测及食盐与亚硝酸盐的快速鉴别：用袋内附带小勺取食盐1平勺，加入到检测管中，加入蒸馏水或纯净水至1ml刻度处，盖上盖，将固体部分摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为食盐中亚硝酸盐的含量mg/ kg，（国标规定食盐（精盐）中亚硝酸盐的限量卫生标准应≤2 mg/kg）。当样品出现血红色且有沉淀产生或很快退色变成黄色时，可判定亚硝酸盐含量相当高，或样品本身就是亚硝酸盐。
2.液体样品检测：直接取澄清液体样品1ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值即为样品中亚硝酸盐（以NaNO2计）的含量mg/L。如果亚硝酸盐的含量是以氮（N）为计算单位（如饮用水或水源水等），读取色阶上的数值后除以5即可。如果亚硝酸盐的含量是以亚硝酸根（NO2-）为计算单位（如矿泉水、瓶装饮用纯净水等），读取色阶上的数值后除以3.28即可。
3.乳浊样品检测：牛乳及豆桨可直接取1ml加入到检测管中，，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，找出与检测管中溶液颜色相同的色阶，该色阶上的数值乘以2即为样品中亚硝酸盐的近似含量mg/L。
4.固体或半固体样品检测：取粉碎均匀的样品1.0g或1.0ml至10ml比色管中，加蒸馏水或去离子水（纯净水）至刻度，充分震摇后放置，取上清液（或过滤或离心得到的上清液）1.0ml加入到检测管中，盖上盖，将试剂摇溶，10分钟后与标准色板对比，该色板上的数值乘上10即为样品中亚硝酸盐的含量mg/ kg，L（以NaNO2计）。如果测试结果超出色板上的最高值，可定量稀释后测定，并在计算结果时乘上稀释倍数（如从10ml比色管中取出1.0mL转入另一支10ml比色管中，加水至刻度，从中取1.0mL加入到检测管中测定，测试结果乘上100（倍稀释）即为样品中亚硝酸盐的含量。
5注意事项
5.1亚硝酸盐含量较高时，试剂显红色后不久会变为黄色，将黄色溶液再稀释放入另一新的速测管中又会显出红色，由此区分是亚硝酸盐还是食用盐。
5.2当样品反应后的颜色大于标准色板2.00mg/L色阶时，应将样品稀释后再测，计算结果时乘上稀释倍数。
5.3生活饮用水中常有亚硝酸盐存在，不宜作为测定用稀释液。
6试剂质量控制
6.1将0.025、0.1、0.25、0.5、1、2、5mg/LNaNO2标准溶液分别加入装有固体格林试剂的速测管，盖盖将试剂摇溶，10min后与标准色板进行对比，其含量与色板上的色阶标识含量应当相同或相近。