rna含量测量方法

1. RNA的测序原理及方法！^~^

细胞中的RNA可以分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类，不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解，释放出RNA，并通过不同方式去除蛋白，DNA等杂质，最终获得高纯度RNA产物的过程。

RNA 提取流程
1. 样品处理
从各种不同来源样品（如细菌、酵母、血液、动物组织、植物组织和培养细胞）,或同一来源样品的不同组织（如植物幼嫩叶片、成熟根、茎等）中提取高质量的RNA，因细胞结构及所含的成分不同，样品预处理的方式也各有差异。
样品的要求：
最好使用新鲜的样品或取样后立即在低温（-20℃或-70℃）冷冻保存的样品，避免反复冻融，因为这会导致提取的RNA降解和提取量下降。
样品预处理方式：
植物材料-液氮研磨
动物材料-匀浆、液氮研磨
细菌-溶菌酶破壁
酵母-液氮研磨、玻璃珠处理、混合酶破壁
2. 细胞裂解
异硫氰酸胍/苯酚法（TRIZOL）
这是一种传统的RNA提取方法，适用于大部分动植物材料，但对于次生代谢产物较多的植物材料提取RNA效果较差。异硫氰酸胍能使核蛋白复合体解离，并将RNA释放到溶液中，采用酸性酚-氯仿混合液抽提，低PH值的酚将使RNA进入水相，而蛋白质和DNA仍留在有机相，从而可以完成RNA的提取工作。
该法应用非常广泛，适用于包括动物组织、微生物、培养细胞等在内的各类动物性材料，同时还适用于次生代谢物较少的植物性材料，如幼苗、幼叶等。该法主要应用在动物组织和培养细胞的RNA提取中。
胍盐/ β- 巯基乙醇法：
适用于各种不同动物材料和次生代谢物少的植物材料。
在这种方法中，胍盐使细胞充分裂解，β-巯基乙醇作为蛋白的变性剂在实验全程中可以抑制RNaseA的活性，保护RNA不被降解。
我公司的“GREEN ”系列总RNA 提取试剂盒是基于这种方法开发的产品，分别适用于各类不同的材料。此系列产品的具体实验步骤和适用范围在实验技术手册中有详细介绍，实验者可根据自己的需要进行选择。
其它方法：
有些植物材料多糖多酚含量较高，如植物果实，番茄的叶子等，有些植物木质化程度较高，如根茎等组织。针对这类材料本公司推出了一种全新的植物总RNA提取试剂，该试剂特别适合于从富含多糖、多酚、淀粉的材料中提取纯度高、完整性好的总RNA，有关的具体步骤将在分论中详细介绍，实验者可根据自己的需要进行选择。

3. RNA 纯化及获得
纯化要求
RNA样品中不应存在对酶（如逆转录酶）有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子。避免其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染。排除DNA分子的污染。
纯化方法及沉淀
方法一：有机溶剂抽提法
氯仿抽提
在使用RNA提取试剂进行RNA提取时，常使用氯仿进行抽提，以去除蔗糖、蛋白等杂质，并促进水相与有机相的分离，从而达到纯化RNA的方法。在本公司的提取RNA的产品中，与TRIzol同型试剂法及其衍生试剂盒。
沉淀
氯仿抽提RNA后，一般采用了异丙醇或乙醇来沉淀水相RNA。加入0.6倍水相体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇，室温沉淀20-30分钟，高速离心，可获得RNA沉淀。
洗涤沉淀
加入无RNase的75%乙醇，将RNA沉淀振荡悬浮，使RNA沉淀中的盐离子被充分溶解。然后再离心10-30分钟。再次沉淀RNA。离心后，小心倒掉上清（注意不要倒出RNA沉淀），随后快速离心1-2秒，将残留在管壁上的乙醇手机到管底后，用小枪头吸净，超静台中风干1-2分钟（注意不要晾得太干，否则RNA沉淀不易溶解）。
溶解沉淀
加入适量RNase-free ddH2O溶解RNA沉淀。
方法二：硅基质吸附法
随着实验方法的改进，现已发展出一种采用吸附材料纯化核酸的方法。目前较常见的有：硅基质吸附材料、阴离子交换树脂和磁珠等。硅基质吸附材料因其具有可特异吸附核酸，使用方便、快捷、不使用有毒溶剂如苯酚、氯仿等优点，成为核酸纯化的首选。
本公司生产的总RNA提取试剂盒（ZP403-ZP407）和GREENspin系列总RNA提取试剂盒即采用硅基质吸附达到RNA分离纯化目的，通过专一结合RNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，使样品在高盐条件下与硅胶膜特异结合，而蛋白、有机溶剂等杂质不能结合到膜上而被洗脱，盐类则被含有乙醇的漂洗液洗涤，最后用RNase-free ddH2O将RNA从硅胶膜上洗脱下来。

2. 检测DNA和RNA检测方法有什么区别

您好！检测DNA的方法有：1.光密度测定。2.琼脂糖电泳凝胶检测法。3。二苯胺法。
检测RNA的方法有：1.光密度测定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共轭双键，使碱基，核苷，核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性，在260nm,处是最大的紫外光吸收值，根据朗波-比尔光吸收定律来计算出核酸含量。

3. RNA的提取方法

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

(3)rna含量测量方法扩展阅读：

DNA提取原则：

1、保证核酸一级结构的完整性；

2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；

3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；

4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

4. RNA提取和定量测定的原理和方法

动物细胞的RNA提取一般使用Trizol，你可以到网上找它的使用说明

测定的方法的话可以有：
紫外分光光度计：通过测定OD260、280和230来检测RNA是否被杂质污染
琼脂糖凝胶电泳：检测RNA是否发生降解
RT-PCR：将其反转录成cDNA，通过荧光定量PCR检测各mRNA的表达量

5. 酵母rna含量测定的方法有几种

酵母rna含量测定的方法有几种
(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。
(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。
(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
(5) 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。 每毫升菌液含菌数＝每小格酵母细胞数×4000×1000×稀释倍数 。
(6) 血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。

6. 核酸含量的测定方法及原理都有哪些

核酸定量常用方法及原理如下：
1、光吸收法：核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收，吸收强度与核酸浓度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量约为9.5%，因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。

7. 如何测量RNA的纯度和含量

RNA胶（凝胶成像）检测。例如：原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。

凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢，因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。RNA-seq即转录组测序技术，把mRNA，smallRNA等用高通量测序技术把RNA的序列测出来。反映出RNA的表达水平。

RNA纯度：RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响，这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同，可以鉴别出溶液纯度及浓度。

组成结构

RNA和DNA一样，也是由各种核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链，但与DNA有一系列差异。

在化学组成方面，RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是，每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶，这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的，此外，前面已提到，少数DNA含有少量核糖，但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。

以上内容参考：网络-核糖核酸

8. 如何测定RNA浓度

一般按照1OD=40µg／ml计算RNA浓度。你将2µl样品稀释到200µl，稀释倍数就是100倍，所以你提取的RNA浓度=0.154×100×40µg／ml=616µg／ml。因为你RNA的量是50µl，所以你提取的RNA总量=616µg／ml×50/1000ml=30.8µg。

9. RNA定量分析的方法有哪些

核酸总含量可用紫外吸收法和定磷法测定,用地衣酚显色法测定RNA含量,二苯胺显色法测定DNA含量。
如果样品较纯，直接用紫外吸收测定就行。
real-time RT-PCR需要设计引物......

10. 如何用酶标仪测定RNA浓度

换滤光片，340、280、260、230
石英的96孔板，每个孔的体积为200ul，空白直接200ulDEPC水，实验组196ulPEPC水+4ulRNA
如果换了滤光片了，测试步骤与MTT测试步骤差不多，主要就是设置吸光度，点击四次吸光度，设置为340、280、260、230。
1、进板后确定板类型和板孔
2、设置吸光度，点击四次吸光度，分别设置为340、280、260、230。
3、开始

酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。 测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下，用一般光电比色计无法完成测试，因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。