使万民作主门徒聚体方法和步骤

⑴ 简述RT-qPCR的原理,简要说明其操作步骤及在临床科研中的应用

摘要 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用0ligo (dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使测的灵敏性提高了几个数量级，使- - 些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

⑵ DNA粗提取实验步骤

一 教学目的
1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。
2.观察提取出来的DNA物质。
二 教学建议
在本实验的教学中，教师应注意以下几点。
1.实验材料必须准备充足。本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。
2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。
3.获取较纯净的DNA的关键步骤。
(1)充分搅拌鸡血细胞液DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。
(2)沉淀DNA时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。
(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动510 min。
三 参考资料
实验原理的补充介绍
1.DNA的释放 DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来。为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法。蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂。同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),于是释放出DNA,当然也有RNA。但是,释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起。
2.将DNA与蛋白质分离 根据二者的特性,即在浓度较高的氯化钠溶液(物质的量浓度为2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游离出DNA。而DNA在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na+与带负电的DNA结合成DNA钠盐。这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.DNA的析出与获取 利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量(300 mL )蒸馏水,稀释氯化钠溶液,使DNA的溶解度下降,而蛋白质的溶解度增高(这就是蛋白质的盐溶现象),从而使二者分离。这时,加上不停地搅拌,溶解度下降的DNA逐渐呈丝状物。再通过过滤,滤去蛋白质,就可以获取DNA的黏稠物了。如果采用离心法则更好,用4 000 r/min 的旋转频率,离心15 min ,除去上清液(含有蛋白质),留下的沉淀物中含DNA。
4.DNA的再溶解 再用较高浓度的氯化钠溶液去溶解DNA黏稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩 除去了蛋白质的核酸溶液,必须再进一步沉淀和浓缩。最常用的方法是酒精沉淀法。就是将含有Na+的DNA溶液,加入到相当于其两倍体积的体积分数为95%冷酒精溶液中,混匀以后可以使DNA沉淀、浓缩,形成含杂质较少的DNA丝状物,悬浮于溶液中。如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分。浓缩后的DNA丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用)。
6.DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法(配方见下述的“药品配制”)。二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而显现蓝色(溶液呈浅蓝色)。
鉴定时溶液蓝色的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关。
二苯胺试剂的配制
A液： 15 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。
B液： 乙醛的体积分数为0.2%的溶液。
配制： 将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。
DNA粗提取与鉴定的另一种方法
1.材料用具
新鲜菜花(或蒜黄、菠菜)。
塑料烧杯,量筒,玻璃棒,尼龙纱布,陶瓷研钵,试管,试管架,试管夹,漏斗,酒精灯,石棉网,三角架,火柴,刀片,天平。
研磨液,体积分数为95%的酒精溶液,二苯胺试剂,蒸馏水。
2.方法步骤
(1)DNA的粗提取
①准备材料 将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
②取材 称取30 g菜花,去梗取花,切碎。
③研磨 将碎菜花放入研钵中,倒入10 mL研磨液,充分研磨10 min 。
④过滤 在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心,用1 000r/min的旋转频率,离心25 min,取上清液放入烧杯中)。在4 ℃冰箱中放置几分后,再取上清液。
⑤加冷酒精 将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的冷酒精溶液中,并用玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液(玻璃棒不要直插烧杯底部)。沉淀35 min后,可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上。
(2)DNA的鉴定
①配制二苯胺试剂 取0.1 mL B液,滴入到10 mL A液中,混匀。
②鉴定 取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL 二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝)。用沸水浴(100 ℃)加热10 min 。在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色)。
研磨液的配制方法
Tris：10.1 g(相对分子质量为121.14),先加50 mL 蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2 moL/L 的盐酸调至pH8.0,再加下述药品。
NaCl：8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA：37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS：20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定容至1 000 mL。
若在室温低于20 ℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解。如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用。
研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离。
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA。
物质的量浓度为0.15 moL/L的氯化钠溶液：能很好地溶解DNA。
Tris/HCl：提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态。(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
鉴定DNA的其他方法 用紫外灯照射法鉴定DNA效果很好。具体鉴定方法如下。
1.配制染色剂。用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭(EB)溶液。
2.将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。
3.将蜡纸放在紫外灯(260 nm)下照射(暗室中),可见橙红色的萤光(DNA的紫外吸收高峰在280 nm处)。

⑶ 健美操编排的方法与步骤

一、先定音乐，后编动作

音乐是健身健美操的灵魂，它直接影响健身健美操的风格、结构、速度、节奏。音乐选配得好不仅容易激发创编者的创作灵感，还能激发学生的锻炼热情。

二、编排动作的全面性

全面发展身体是健身健美操的锻炼宗旨。为了达到这个目的，在创编健身健美操时，一方面考虑健美操的动作设计讲究对称。

三、编排动作的观赏性

根据不同年龄的人群，一套健身健美操的难易度是不一样的。高中女生的协调性较好，接受能力较强。

四、编排动作的合理性

根据人体运动的生理规律，成套健美操的动作顺序一般分为三个部分：第一部分预备动作、第二部分主体动作、第三部分整理动作。

五、编排动作的艺术性

健美操具有较强的艺术魅力，因此整套操的动作风格包括音乐的选择要符合高中生的身心特点。

(3)使万民作主门徒聚体方法和步骤扩展阅读：

单人动作的编排方法，在编排单个动作时应注意：

1、不同形式的做法。 如果编制行进操，可用1步、1 拍、1拍1动来做，还可走4步4拍，站立做4拍动作。编制定位操一般采用站立做，还可采用蹲、撑、坐和前后左右小移动来做。

2、身体各部分合理配合。每节健美操单个动作都要有主要部分，如髋部动作，髋部动作是主要的动作，应由它为主，上肢和下肢为配合部分，配合部分的动作应吸取于主要的动作的完成。

3、采用不同的做法。用一个动作采用不同做法如臂绕环动作，左右臂依次绕环，同时绕环。

4、选择不同方向的组合。两臂绕环动作，可采用不同方向的绕环，如臂下垂开始向内绕环；向外绕环；向内和向外绕环相结合；向前绕环；向后绕环；向前和向后绕环相结合等。

5、选择不同重复次数的组合。体侧屈动作可采用不同重复次数，如4拍1节动作中，体侧屈1次、2次或3次等，根据对象，运动负荷大小不同，所起的效果也不大一样。

6、选择不同类动作的组合。一节操，某一类动作组合或两类以上的组合，如下肢运动全用踢腿；或全用压腿；或压腿和踢腿相结合。

⑷ 特性要因图它的做成步骤和作用

一、制作步骤

方法一：

第一步，简明扼要的确定结果，即确定需要解决的质量间题。

自左向右画一粗横线代表主骨，并将评价特性写在箭头右边。以“两插保护门难插”为例。

二、作用

1、有利于找到问题的原因所在，然后对症下药，解决问题。

2、可以由项目小组或者和那些实际上关心项日流程的人.员一起完成。

3、使我们问自己:问题为什么会发生……使项日小组聚焦于问题的原因，而不是问题的症状。

4、能够集中于问题的实质内容，而不是问题的历史或不同的个人观点。

5、使组员了解项日小组在围绕某个问题时产生的集体智慧和意.见，有助于找到有效的解决方案。

(4)使万民作主门徒聚体方法和步骤扩展阅读：

特性就是长度，进度，不良率等代表制品、品质特性的简称。此外它也是代表管制品的性能及运转能力，制品是我们的结果，特性则是表示工作的结果，因此品质管理把特性当作结果。

要因就是重要的原因，表示制品品质的特性会因许多原因而变化。不过在所有原因中被认为会影响特性者则视为要因，并记入特性要因图中。

特性要因图因其形状很像鱼骨，故亦称为鱼骨图，他是在推行全公司QC活动时，所有参与人员均非常熟悉的手法。

特性要因图是品管权威石川馨先生所创始的手法，所以国外亦有称石川图，已成为全世界均在活用的手法。

⑸ 小学语文阅读理解答题步骤、方法和技巧，你认为有哪些

小学语文阅读理解答题步骤、方法和技巧，你认为有哪些？

引言：小学生的语文阅读理解一般是比较简单的，都会有一些固定的模式，那么今天我们来讲一下对于小学语文阅读理解的答题步骤，以及它的方法技巧，都有哪些？今天小编带大家来了解一下。

三、多读文章内容

无论是别的题目还是语文的阅读理解，首先我们一定要通读文章内容，如果不去读文章内容的话，那么做题的的时候，就无法根据文章意思来作答。只有通读了文章大意，才可以快速的做出答案。如果对于文章的内容第1遍读不懂，那么一定要多加读几遍。在解答阅读理解的题目时，一定不要慌张不要急躁，要完全用心去感受文章内容，才能更能理解作者在文章中要表达的内容，解题的方面上也会有所提升。

⑹ 电脑版美篇的制作方法和步骤

美篇是南京蓝鲸人网络科技有限公司于2015年7月推出的一款图文编辑工具。美篇支持插入图片、背景音乐和视频，可任意排版，为用户创造流畅的创作体验。
那美篇该怎么制作？下面和大家分享一下。
开启分步阅读模式
操作方法
01
打开美篇APP，创建“图文”美篇：在下方功能栏里点击【+】，选择【图文】进入创建界面。
点击【图片】后会自动打开本地相册，选择你喜欢的照片后点击【确定】。

02
注意：你选择照片的顺序也将会是你编辑内容的顺序。
但如果你对顺序不满意，也可以长按段落并拖曳可调整顺序。

03
图片添加成功后，可以在图片后面点击添加文字。输入你想添加的文字，然后点击完成即可。（文字的大小、粗细、颜色都可以进行调整）

04
点击【设置文章标题】，输入你想设置的标题后点击完成

05
标题设置成功后可以点击【预览】查看效果，效果栏页还可以进行音乐的添加。
点击【音乐】可以直接选择推荐的音乐，然后点完成 。也可以点击【我的】，自动打开存储的音乐，然后点击完成 。也可以搜索在线音乐，输入你想要搜索的歌曲名或者歌手的姓名，然后选择后点击完成。

06
点击“完成”发布美篇。发布成功后，可对封面进行更换。
一般默认首张图片为封面，如果你不喜欢，可以点击【更换封面】，然后重新选择封面图片。要是当前照片都没有满意的，可以点击右下角【上传封面】重新在相册中选择照片，选好后点击【确定】，再点击【完成】即可。

07
如果需要发送到朋友圈可以选择【分享】，并点击【朋友圈】进行分享。
美篇怎么制作一图多图

太平洋电脑网
聊聊硬件，聊聊互联网
现在制作相册的手机软件有许多，制作多图的相册也相当的方便，下面就以美篇为例给大家介绍一下美篇怎么制作一图多图。

美篇怎么制作一图多图

步骤1、手机浏览器输入【美篇下载】，点击【立即下载】，点击【安装】；

步骤2、打开美篇，点击美篇首页下部中间的圈圈加号+，如下图；

步骤3、进去从手机相册里选取要制作美篇的图片，点要选的图片使图片右上角的对号√变色即是选中，将所需的照片都选好，点右上角的【完成】如下图；

步骤4、点左上角【点激设置标题】如下图；

步骤5、输入作的美篇标题文字，如：曲阜师范大学，点右上角【完成】如下图；

步骤6、点添加音乐从已有的音乐或点下部搜索网上音乐，选取陪加音乐，点【完成】如下图；

步骤7、点下部的【模版】，滑动下部的模版式样，选取满意的版式，点模版条上的【完成】；

步骤8、点下部的【下一步】，按照要求设置，点【完成】，如果还要添加文字或图片，就点右上角的【操作】，点第一个【编辑】，进去添加文字图片页面，按前面操作步骤；

步骤9、如果满意完成，要发给朋友，点右下角的【分享】；

以上就是美篇怎么制作一图多图的步骤，希望对大家有所帮助。

⑺ 相贯线的作图步骤是什么求作两回转体表面的相贯线常用哪两种方法

如下：

1、相贯线的作图步骤：

（1）求特殊点；

（2）求一般位置点；

（3）连线。

2、两回转体表面的相贯线常用方法：表面取点法、辅助平面法。

用圆柱面的积聚性法作相贯线

两回转体相交，如果其中有一个是轴线垂直于投影面的圆柱，则相贯线在该投影面上的投影，就积聚在圆柱面得有积聚性的投影上，于是求圆柱和另一回转体的相贯线投影，可以看作是已知另一回转体表面上的线的一个投影，求作其他投影的问题。

这样，就可以在相贯线上取一些点，按已知回转体表面山的点的一个投影求其他投影的方法，作出这些点，顺次连接这些点的同面投影，即可作出相贯线的投影。