㈠ 细胞活性检测的方法有多少种 每种的原理是什么
简单说几个把
染色体法 主要在培养基中利用死活细胞对燃料亲和力不同 来判断
克隆形成实验 原理是单个细胞在体外增至六代后,后代形成的细胞群体 ,通过计算其克隆形成率 来判断
比色法 也是比较经典的 M,RR 活体细胞中的线粒体中的琥珀酸脱氢酶可以将M,rr还原成蓝紫色的结晶甲醋 死细胞无此功能
㈡ 测量细胞大小的方法有哪些
测量细胞大小的方法一般来说就是通过在显微镜下观察它的大小或者是通过技术的方式,也就是在显微镜下看到细胞数目大小的情况。
㈢ 细胞免疫功能测定的常用方法是
正确答案:A
解析:免疫系统功能分为体液免疫和细胞免疫
。体液免疫包括:补体、甘露聚糖结合素、急性期蛋白、干扰素、免疫球蛋白
。B、C、D、E均为体液免疫的测定
。细胞免疫包括:中性粒细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、树突细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞
。故选A
。
㈣ 显微镜下测量细胞长度时尺子应放在那里怎样测量(过程)
测微尺应放在目镜之上,测量时读出测微尺的读数再除以放大倍数,即得到细胞的实际长度。
㈤ 怎样检测细胞的生长,存活及增殖
BrdU标记法
1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。
2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.经固定的玻片空气干燥,0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封闭。
7.甲酰胺100℃,5min变性核酸。
8.冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
9.按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
结晶紫法
1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。
2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3.置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4.加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。
5.用蒸馏水洗涤,至多余的结晶紫液冲洗干净。
6.置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7.加入10%的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8.1h后在酶标仪上测定光吸收度,波长595nm。
酸性磷酸酶法
1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次(如为悬浮细胞则用离心洗涤)。
2.去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3.37℃,孵育1~4h。
4.加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5.在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度,将细胞培养板其中不含细胞,同样处理过的一孔作为空白对照,所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照,以细胞数为X轴,光吸收度为Y轴,可作直线回归,可推算出每孔中的细胞。
㈥ 细胞大小的测量原理
首先微生物的生长分为四个时期,首先是适应期,然后是对数期,稳定期,衰亡期。
在对数期的
时候,细胞都处于生长分裂旺盛时期,所以其细胞大小处于较稳定的情况,而在稳定期的时候,细胞的生长和死亡处于相同的比例,所以不适宜用来测定大小。
对数生长期是指细胞在一定的环境下经过了短暂的适应期,进而快速生长的时期,此时期营养充足,细胞会以对数生长,假如原来只有一个细胞,进入对数期以后就会变为两个,两个再变为四个,四个变为八个...即以2的n次方的速度生长(n为细胞的分裂次数),在对数期生长速率远远大于死亡速率,所以在对数期最显着地特征就是细胞的数目大量增加,但当细胞经过一定时间的生长会消耗掉营养物质,产生大量的次生代谢产物使得ph值下降,其生长环境变得恶劣,此时生长速度下降,生长速率和死亡速率平衡,细胞的总个数基本保持不变,细胞的对数生长期结束进入平台期。
㈦ 细胞活力测定常用的简便方法是
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
细胞活力常用百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简便常用的方法是台盼蓝(trypanblue)染色法。台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。
㈧ 常用的测定微生物细胞量和细胞数的方法
直接计数法
液体稀释法
平板菌落计数法
比浊法
干重法
㈨ 检测体细胞数有哪些方法
目前获得世界各国普遍承认和使用的体细胞计数方法概括起来主要分为显微镜人工计数法和自动计数仪计数法。
1、显微人工计数:体细胞计数的国际标准方法为显微镜镜检法,此法准确,大部分的快速检测方法均用此法作校准,但在制备样品、计数镜检时费时、费力,不适合作为现场快速和大样品量时使用。
2、自动计数仪计数:目前,在乳品生产中牛乳体细胞计数主要是依靠大型的体细胞仪完成的,体细胞自动计数分析研究主要有以下两个方面:
(1)流式细胞分析法.具代表性的产品为美国Bently计数仪,福斯Fossomatic 5000,荷兰Delta体细胞计数仪等。该法检测速度快,适合乳品集中检测,但仪器成本高,不能够保留样本,且需要熟练人工操作,经常性校正监测等。
(2)另一方面是利用数字图像分析系统,典型产品如韩国C-reader ADAM体细胞计数仪,该法数据准确,排除人为因素影响。由于该方法是基于标准镜检法的一种方法,所以其在韩国已经使用该种方法代替标准法对大型自动仪器进行校正。华诚睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是这种检测方法的典型代表。
㈩ 细胞活性检测的方法有多少种
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素掺入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但 MTT 法形成的 Formazan 为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的 Formazan ,故有时重复性略差。为了解决这个问题,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。