細胞凍存盒使用方法

Ⅰ 存儲細胞樣本用什麼液氮罐比較好

你好，好高興回答你的問題。一般來講，1.預先配製凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預冷；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；
3.再次用完全培養液懸浮細胞，將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中，用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封後標記凍存細胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細致直接關繫到細胞復甦時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再總結一句，一般細胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更長時間細胞可以放在凍存管里，吊在液氮罐里，如果存放的數量多，可以選擇使用液氮罐提籃（大口徑液氮罐另配）。天馳液氮罐 工作人員建議，細胞株的凍存方法可按以下步驟操作：
（1）取培養2～3天生長旺盛的細胞，用細胞培養液將細胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞碸（或甘油），混勻後密封。置4℃ 1小時，－20℃ 2小時，然後直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜後浸入液氮中。
班德液氮罐介紹：液氮罐儲存樣品使用注意事項有以下幾點：
1. 本液氮罐採用凍存盒儲存樣品。
2.桶壁為高強度鋁合金製作，但要防止猛烈碰撞。
3. 後部上方有一黑色塑料蓋，內為罐體真空夾層密封口，請勿擠壓。
4. 測量液氮液面請用隨機配備的測量尺。
5. 液氮罐上配有報警器，請定期檢查電池是否有電，電池為常用九伏電池。如更換電池請注意勿扯拉探頭連線，以防止線頭扯斷造成報警失靈。
6. 建議定期用測量尺檢查液氮面,以防止報警器失靈造成樣品損壞。
7. 建議每次取樣品和加液氮應作詳細記錄以防止漏加(液氮罐為滿罐狀態，液氮揮發量最小)
你好，好高興回答你的問題。一般來講，1.預先配製凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預冷；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；
3.再次用完全培養液懸浮細胞，將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中，用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封後標記凍存細胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細致直接關繫到細胞復甦時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；
再總結一句，一般細胞在-80℃存放半年左右，在液氮里可以放置更長時間細胞可以放在凍存管里，吊在液氮罐里，如果存放的數量多，可以選擇使用液氮罐提籃（大口徑液氮罐另配）。天馳液氮罐 工作人員建議，細胞株的凍存方法可按以下步驟操作：
（1）取培養2～3天生長旺盛的細胞，用細胞培養液將細胞配成2×106～2×107/ml。
（2）在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞碸（或甘油），混勻後密封。置4℃ 1小時，－20℃ 2小時，然後直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜後浸入液氮中。

Ⅱ 細胞凍存盒中的異丙醇的作用是什麼為什麼可以直接放在負80的冰箱中，自己就可以緩慢降溫呢 緩慢

會有些影響,在活率方面.70%的細胞應該沒問題. 1）傳統方法:凍存管置於4℃ 40min--->-20℃ 30min--->-80℃ 16～18h (或隔夜)--->液氮中長期儲存. 注意：-20℃不可超過1小時,以防止胞內冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些. （2）程序降溫：利用已設定程序的程序降溫儀以-1～-3℃/min的速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃,再放在液氮中長期儲存.

Ⅲ 怎樣才是正確的液氮罐使用方法呢

將液氮罐內裝好液氮，確定液面到所需的位置。然後將需要凍存的樣品放在凍存盒內，做好標記，放置於凍存架(多層提籃)上，插好固定插銷放入液氮罐中。

低液位報警器可用於液氮低液位報警，液氮液位監控器採用了智能化設計，具有液氮液位聲光預警、報警，溫度顯示，自動補液，數字溫度調節、校準等功能。將報警裝置的探頭固定在其中一個凍存架上，探頭的位置一般在有凍存盒的最上面位置，這樣，當液面低於探頭的位置，報警裝置發出報警聲，提示添加液氮，這樣可以保證足夠的液氮，確保細胞或樣品的凍存效果

Ⅳ 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基，輕輕吹打，接種於10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存於40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配製：70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

注意事項

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（2）細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（3）防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復甦細胞，繼續培養。

(4)細胞凍存盒使用方法擴展閱讀：

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

Ⅳ 細胞凍存盒掉大液氮罐裡面去了怎麼辦

冷凍管因為裡面有東西，所以很難浮上來，我們都會用長把的鉗子夾上來，前提是您的開口足夠還要有光，不然看不到，就只能用完了，但是因為是儲存式的液氮罐，所以不可能用完的，，推薦你勁量夾子夾上來，或者把裡面的東西轉移到另一個液氮罐，然後再去夾，之後再轉移回來，，注意：不要將冷凍的東西空氣暴露太久，畢竟溫差太大，

Ⅵ 我把需要凍存的細胞放 在-20度忘記拿到-80，放了10多天，還有活的希望嗎BxPC-3

如果沒有凍存盒，應該是先放4度12h，-20度12h，然後-80度，一個月內液氮保存。你可以先復甦試試。

Ⅶ 動物細胞培養中細胞如何凍存

細胞凍存的原則是：凍存緩慢降溫，復甦快速升溫。不同的動物細胞稍微有點不同，下面是一般的方法：
（一）細胞凍存
1. 配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2. 取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、；
3. 離心1000rpm，5min；
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
7. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
（二） 細胞復甦
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻；
3. 離心， 1000rpm，5min；
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養；
5. 次日更換一次培養液，繼續培養。

Ⅷ 放入凍存盒中的細胞還需放入4度預冷么

細胞的凍存和復甦一般是遵守「慢凍快融」.常規的慢凍方法是：1.先將凍存管放入4℃冰箱,約40min.2.接著置於-20℃冰箱,約30～60min.3.置於-80℃超低溫冰箱中放置過夜.4.置於液氮罐中長期保存.

Ⅸ 細胞在液氮罐里怎麼儲存

細胞可以放在凍存管里，吊在液氮罐里，如果存放的數量多，可以選擇使用液氮罐提籃（大口徑液氮罐另配）

Ⅹ 正常肝細胞株hl7702多少錢

人肝臟細胞HL7702，只提供給進一步的科研使用，不可應用於治療等其他方面。
細胞描述：
HL7702細胞，又叫L02細胞，正常人肝細胞，葉秀珍於1982年建系。
HL7702細胞增殖能力取決於細胞取材、培養技術、培養條件等綜合因素。請按照正確的培養方法來解凍、傳代，以此保證細胞具備良好的增殖能力，方便您的後繼研究順利進行。

質量控制：
本細胞經過了檢測，不含有細菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。

培養條件：
37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，無菌恆溫培養。

細胞相關操作（注意：細胞操作都需嚴格按照無菌操作）
收到復甦好的貼壁細胞的處理方法：
1. 先從外包裝盒拿出細胞瓶，在細胞瓶表面噴一層酒精，並小心去掉封口膜；
2. 在顯微鏡下觀察細胞狀態，並確定是否染菌，如有染菌，請立即拍照，並將細胞丟掉；
3. 將培養瓶置於37°C，5% CO2的無菌培養箱中培養4-6小時；
4. 倒掉多餘的培養基，留正常體積的培養基；
5. 重新將培養瓶置於37°C，5% CO2的無菌培養箱中培養過夜；
6. 第二天傳代。

收到凍存細胞的處理方法：
1.37°C水浴預熱培養基；
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍後不要繼續暖細胞）；
3.在超凈台中加入5ml培養基重懸細胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養基重懸細胞後轉入T25培養瓶中，輕輕晃勻；
5.置於37°C，5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊)；
6.第二天，用新鮮的培養基給細胞換液後繼續培養。

細胞傳代
1.當細胞融合度達到90%以上時，給細胞傳代；
2.37°C水浴預熱培養基；
3.在超凈台中，棄培養基，加入2-5mlPBS清洗細胞後，再加入1ml胰酶消化細胞；
4.顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，加入5ml培養基終止消化；
5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩餘的細胞，並輕輕吹打將細胞吹散；
6.將細胞移入離心管中，1000rpm離心5min；
7.棄上清，加入15-20ml的培養基重懸細胞後轉入T75培養瓶中或按適當比例傳到T25瓶中（確保細胞貼壁後融合度在25-50%之間），細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布；
8.將培養瓶置於37°C，5% CO2的無菌培養箱中培養。

細胞凍存
1.37°C水浴預熱培養基；
2.消化細胞後給細胞計數:
1)洗凈晾乾血小板計數板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數區；
2)充分混勻細胞，取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液台盼藍混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞，以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；
3)顯微鏡下，數四個計數區的總細胞數，無活性細胞染成藍色，活細胞不被染色；
4)細胞密度=細胞總數/4×10000×2；
這里10000是不變的，因為計數的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3計數池內，1cm3=1ml，將四個計數區的細胞數除以4取平均數，乘2是補償加等體積台盼藍形成的稀釋。
5)細胞活性=活細胞數/細胞總數×100%。
注:細胞密度高時，可調整細胞懸液和台盼藍的比例，計數時乘以相應的稀釋倍數即可。
3.當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時，可以凍存細胞。
4.在超凈台中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5min。
5.棄上清，用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞，並調整細胞密度為1-3×106/ml。
6.將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
7.將裝有細胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°C放1-2h後，-80°C過夜，然後快速轉移到液氮中。