分離土壤中的微生物的方法常用

⑴ 急，請問如何從土壤中分離出細菌、放線菌、黴菌、酵母菌、真菌

首先用滅菌水稀釋土壤，充分搖勻，就可以用玻棒蘸取土壤溶液，在經過滅菌的特製培養基培養皿上劃線，然後進行培養。一般我們培養細菌和酵母菌用LB培養基，青黴菌用PDA培養基，其他的沒坐過不太清楚。等培養出來後挑出單一菌落進行繼代培養，用顯微鏡觀察是什麼菌。
土壤里的細菌習性差別很大，生長條件要求也很不一樣，有固氮菌，硅酸鹽細菌，菌根菌，很多很多種，有很多種是很難在一般培養基中生長的，需要有特殊的環境，但也有很多種可以在普通的培養基上培養，生長比較快，可以培養出五彩斑斕的菌落。
對好氧菌培養相對容易一些，如果要培養厭氧菌條件特殊，需要加入特殊的葯品，或者採取深層培養或其他的厭氧條件。
土壤中微生物特別豐富，含有放線菌、真菌等，在培養過程中，可以使用選擇性培養基，加入一些抑制其生長的葯品，盡可能消除其干擾。

⑵ 微生物分離方法

微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養，或獲得一個細胞的後代。其具體方法有：

1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋，取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內，經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。

2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板，待凝後，取分離材料在上面劃線，可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線，使菌樣逐漸減少，最後得到單個孤立的菌落。

(2)分離土壤中的微生物的方法常用擴展閱讀：

微生物分離技術的應用措施：

1、減少毒性氧物質的毒害作用：由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長，適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基，但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。

2、維持微生物間的相互作用：在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用，滿足微生物生長繁殖的要求。

3、供應新型的電子供體和受體：不同微生物的代謝過程不同，因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明，將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中，能夠發現未知的生理型微生物。

4、分散微生物細胞：自然界中很多微生物聚集生長，形成「絮體」和「顆粒」等，致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理，將細胞分散再進行培養，可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。

5、延長培養時間：對「寡營養菌」的培養，可適當延長培養時間，使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長，因為培養時間越長，對培養環境的無菌要求就越高[4]。

6、利用瓊脂替代物：瓊脂對某些微生物具有毒性作用，採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑，可以增加微生物的可培養性。

⑶ 如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物

如何從復雜的土壤樣本中分離我們所需要的目標微生物？
有機肥之中有機質的分解轉化是一個復雜的過程，微生物活動在分解轉化過程之中起著重要作用。土壤環境非常適合微生物活動，所以土壤之中天然微生物數量最多。因為土壤之中微生物種類繁多，數量大；一克土壤之中，微生物有幾十種到幾百種，幾億到幾十億個，土壤微生物繁殖迅速，在有機質的轉化和分解之中起著重要作用。土壤微生物包括細菌、放線菌、真菌和藻類。

（1）細菌



細菌是一種單細胞微生物，是土壤之中分布最廣、數量最多的微生物。細菌有三種基本形態：球形、桿狀和螺旋形；有球菌、桿菌和螺旋體（40種）；包括弧菌&41；三種類型。土壤細菌按其營養類型可分為自養菌、兼性自養菌和異養菌。

（2） 真菌



土壤真菌分布廣泛，適應廣泛的酸性條件，在PH4.0條件之下生長良好，對森林土壤有機質的轉化起著重要作用。土壤真菌是異養的。它們必須從土壤有機質之中獲取能量和碳源，並在發育過程之中需要良好的供氧。根據真菌與樹木的關系及其營養類型，真菌可分為腐生真菌、寄生真菌和共生真菌。

（3） 放線菌



放線菌是細長的菌絲體，呈分枝狀或放射狀。它們在土壤之中僅次於細菌。大多數是腐生植物。許多放線菌能分解纖維素、澱粉、脂肪、木質素和蛋白質。

⑷ 自然界分離微生物的一般操作步驟土樣的採取, 預處理, 培養, 菌落的選擇產品的鑒定

一、分離的基本方法

微生物分離的方法很多，主要有連續稀釋分離法，平板劃線分離法和單細胞分離法等方法。其中，單細胞分離法需要貴重精密儀器，中學無法開展，而連續稀釋分離法和平板劃線分離法卻簡便易行，中學完全具備開展條件。現將這兩種方法說明如下。

1.連續稀釋分離法

①取1克土樣，在火焰旁放入裝有99毫克無菌水的錐形瓶內，充分搖勻，將菌分散。

②用移液管吸取上述菌懸液1毫升，放入盛有9毫升無菌水的試管中，並進一步稀釋成1000倍，即10-3的菌懸液。按10倍稀釋法連續稀釋到10-8（每1次稀釋，都須更換移液管）。

③取3支1毫升移液管分別從10-8、10-7、10-6菌懸液中吸取1毫升菌懸液，分別注入編號10-8、10-7和10-6的培養皿內，同一稀釋液重復做3個培養皿。

④將溫度為45～50℃的營養瓊脂培養基（其成分和配製方法見本章第三節）倒入上述各培養皿內，輕輕旋轉使菌懸液充分混合均勻，凝固後，將培養皿倒扣放置在溫暖處（28℃左右），每天觀察培養基表面有無微生物菌落。

⑤經過一定時間培養後，培養基上長出菌落，根據菌落特徵，初步判斷屬於何種類型的微生物，並在顯微鏡下檢查，若菌體形態一致，則可認為是初步分離到純菌種。

⑥將分離培養所得的純菌種，從平板培養基轉移到試管斜面培養基上培養。

2.平板劃線分離法

①取1克土樣，在火焰旁加進裝有99毫升無菌水的錐形瓶中，堵塞棉塞，製成菌懸液待用。

②取一培養皿置於實驗台上，左手將培養皿打開稍許，向培養皿內注入熔化的營養固體培養基10～12毫升，輕輕轉動培養皿，使其中的培養基分布均勻，平放桌上，使其凝成平板。然後在皿底用蠟筆劃分A、B、C、D幾個區。應連續製作幾份平板培養基。

③將培養皿底部用姆指和無名指固定成傾斜狀態，在火焰旁將培養皿稍微打開。在此同時，用環狀接種針在火焰旁取少許菌懸液，迅速送入培養皿內，在平板培養基的一邊，作第1次平行劃線 6～7條，轉動培養皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，然後再用同樣方法，作第3次平行劃線。劃線時，應使平板培養基表面向下，以免空氣中雜菌落入。接種針應與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養皿邊緣，也不要將培養基劃破。

④將劃線後的培養皿倒放在28℃左右的溫暖處進行培養，待長出菌落後，鑒定微生物類群，並根據鏡檢結果，判斷是否已分離到了純菌種。如果菌種很純，則可轉移到斜面培養基上進一步培養。

連續稀釋分離法和平板劃線法，均須在無菌室或接種箱內進行。

二、各類微生物的分離

1.從土壤中分離好氣性及兼性厭氣細菌

其分離方法見本節「分離的基本方法」

2.從土壤中分離放線菌

①製作高氏一號培養基，趁熱注入培養皿中，凝成平板，待用。

②稱取土壤10克，放入裝有100毫升無菌水的錐形瓶中，並加入10%酚10滴，以抑制細菌生長。振盪10分鍾，製成10-1菌懸液。按照連續稀釋分離法，進一步製成10-3菌懸液。

③用移液管吸取0.1毫升10-3菌懸液，注入平板培養基上，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻塗抹在整個培養基上。然後將培養皿倒置於25～30℃溫箱中，培養7～10天，培養基上會出現微生物菌落。如果菌落的硬度較大，乾燥緻密，且與基質緊密結合，不易被針挑起，這就是放線菌菌落。

④挑取放線菌菌落，接種於斜面培養基上。

3.從土壤中分離黴菌

①製作豆芽汗葡萄糖培養基，並添加80%乳酸數滴，以抑制細菌生長。將培養皿中，凝成平板，待用。

②稱取10克土壤，按上述分離放線菌的方法製成10-4或10-5的菌懸液。

③取0.1毫升菌懸液注入培養皿內培養基上，用玻璃刮刀塗抹均勻。然後將培養皿倒置於25～30℃溫箱內培養3～4天。培養基上會出現微生物菌落。黴菌菌落常長成絨狀、棉絮狀或蜘蛛網狀，可根據這一特徵尋找黴菌菌落。

④挑取培養皿內的黴菌菌落接種於斜面培養基上。

4.從飲水中分離大腸桿菌

①製作伊紅美藍培養基，趁熱注入培養皿中，凝成平板，待用。

②用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。

③取0.1毫升稀釋液接種於伊紅美藍培養基上。用平板劃線分離法進行分離。

④將劃線後的培養皿倒置37℃溫箱中培養18～24小時。培養基中會出現大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發金屬光澤。

⑤將菌落接種於斜面培養基上（由營養瓊脂培養基製成）。

⑸ 怎樣從土壤中篩選微生物

原理： 目前尚無一種培養基可以養出所有的微生物，但我們可以設計一種培養基，其組成份適合所要分離的微生物，而不利其他微生物的生長，如此一來，即使我們想分離的微生物為數不多，也可以將它們分離出來，這就是選擇性培養基。本實驗就是使用選擇性培養基來分離土壤微生物，並計數它們的數量以及觀察在不同的選擇性培養基下，菌落型態的差異。

材料：分離細菌之培養基：TSA（Tryptic Soy Agar）、1/10 TSA 並分別添加100 ppm cycloheximide；分離放線菌之培養基：Alkaline Water Agar、Starch-Casein Agar並分別添加100 ppm cycloheximide；分離真菌之培養基：PDA（Potato Dextrose Agar）添加Triton X-100 (1 mg per mL)及100 ppm streptomycin sulfate、MRB（Martin』s Rose Bengal）再加入30 ppm streptomycin sulfate； (cycloheximide為抑制真核細胞蛋白質合成之抗生素，請小心使用)、9毫升0.85%生理食鹽水、玻璃彎棒、酒精燈、少許農地表土。

步驟：
1. 配製選擇性培養基。
2. 秤過篩農土 1克置入9毫升生理食鹽水中，充分震湯混合，接著作10倍連續稀釋至適當的稀釋度。
3. 取0.1毫升稀釋液塗抹於不同的選擇性培養基平板上。分離細菌取104、105及106倍稀釋之稀釋液；分離放線菌取103、104及105倍稀釋之稀釋液；分離真菌則取102、103及104倍稀釋之稀釋液。
4. 塗抹過稀釋液之平板置於28℃培養箱中培養，按時觀察並記錄菌數、菌落型態、真菌孢子的顏色等。
5. 另外，秤10克濕土置入玻璃燒杯中，於105℃下烘乾至恆重，將燒杯連烘乾後的土放入乾燥器中，冷卻至室溫後秤重，即可知每克濕土的乾重。將平板上的菌數除以乾重，就可以知道每克乾重土壤的菌數。
6. 以t-test 做統計比較，細菌在相同養分但不同濃度下(TSA、1/10TSA)的數目有無差異；另外由分離放線菌的平板，純化 5個菌落型態不同之菌株，同時保留由真菌平板上所篩得的綠黴菌（Trichoderma spp.），作為下次實驗的材料。

⑹ 怎樣分離土壤中的細菌

這個工作量很大
首先是將土壤用生理鹽水洗，再用低轉速離心，取上層液體
然後要明確你需要的菌種，設計或查找培養基，並配好後面滅菌
菌液稀釋到一定比例後塗布或者劃線到鋪有培養基的平板上，或者以一定比例接入液體培養基。用什麼形式的培養基取決於你需要分離的菌
放置與培養箱中培養若干小時
以上為初篩，下面需要進一步復篩，
挑出你需要的菌落，再改進培養基，重復以上步驟
直到完全篩選出目的菌落

以上為自己想出的方案，本人正好是微生物專業，個人認為，動手之前的准備工作要做好，注意多查文獻，多了解目的菌種的特點，採用最快捷的方法

祝你成功

⑺ 《微生物問題》如何從土壤中分離微生物（黴菌，細菌，放線菌等）

1.取以少許土壤（一地表以下10cm處為宜）與適量無菌水混勻備用
2.做浸出液的梯度稀釋
3
.塗平板
4.劃線分離
5.接平板，接斜面
6.檢測

⑻ 土壤微生物的分離方法

取土壤配好適當濃度的溶液，然後稀釋成十的負七次方或者六次方這樣。
用微生物接種的方法在酒精燈邊上稀釋液拿微滴管取500微升置入固體培養基，然後加入玻璃小球搖晃，這是為了讓稀釋液均勻分布。然後37度培養一天到兩天就行了，不能太久不然會長雜菌。
就是這樣吧，抱歉細節沒有寫，太長了。注意過程無菌

⑼ 土壤微生物的分離方法（註：此類微生物不能純化分離）

一般分類細菌用10-7-8次濃度的土壤懸液細菌、10-5-6次放線菌、10-3-4次分離的是真菌。
微生物(microorganism），包括細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生動物等在內的一大類生物群體，個體微小，與人類生活密切相關。廣泛涉及健康、醫葯、工農業、環保等諸多領域。在中國大陸地區的教科書中，均將微生物劃分為以下8大類：細菌、病毒、真菌、放線菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體。

⑽ 如何分離和鑒定土壤中的固氮微生物

自生固氮菌的分離
實驗原理
農田的表層土壤中,自生固氮菌的含量比較多.將用表土製成的稀泥漿,接種到無氮培養基上進行培養.在這種情況下,只有自生固氮菌才能生長繁殖.用這種方法,可以將自生固氮菌與其他細菌分離開來.
目的要求
1．初步學會從土壤中分離自生固氮菌的方法.
2．初步學會製作臨時塗片的方法.
材料用具
農田的表層土壤(土壤溶液的pH不低於6.5).
無菌研缽,無菌玻璃棒,接種環,天平,存放有載玻片的酒精缸,蓋玻片,顯微鏡,酒精燈,火柴,鑷子,恆溫箱,量筒,玻璃鉛筆.
滅過菌的、盛有無氮培養基的培養皿,結晶紫染液,無菌水.
方法步驟
一、接種
1．接種前,將滅過菌的、盛有無氮培養基的培養皿,放在37℃的恆溫箱中一兩天.隨後,選取培養基上沒有生長任何微生物的培養皿供實驗用.
2．取10g土壤,放在無菌研缽中,注入5mL無菌水,並用無菌玻璃棒攪拌均勻,備用.
3．將接種環放在酒精燈的火焰上滅菌.略微打開培養皿蓋,將接種環放在培養基邊緣處冷卻.然後,用接種環蘸取少許稀泥漿,輕輕地點接在培養基的表面上,共點接15～20處(注意：接種時手和衣袖不要碰到火焰,以免燒傷).
4．接種後,輕輕地蓋上培養皿蓋,將培養皿放在實驗桌上,並在頂蓋上寫明實驗內容、接種人的姓名和接種日期.
二、培養
將接過種的培養皿放入恆溫箱內,在28～30℃的溫度下培養3～4d.
三、觀察
4d後,取出培養皿,仔細觀察培養基上稀泥漿周圍長出的培養物——黏液.黏液初為無色透明,以後為乳白色,最後變成褐色,表明含有自生固氮菌.
四、鏡檢
1．製作臨時塗片
(1)用鑷子從存放載玻片的酒精缸中夾取一片載玻片,將載玻片放在酒精燈火焰的上方緩緩烘烤,以便除去上面的酒精.將載玻片放在實驗桌上,待載玻片冷卻後,在載玻片的中央滴一滴無菌水.
(2)在火焰旁,按照接種的要求,用滅過菌的接種環從培養基上挑取少許黏液,將黏液塗在載玻片上的水滴中,加1滴結晶紫染液,混合均勻,染色1min.
(3)另取一片載玻片作推片.將推片自液滴左側向右側移動,使液滴均勻地附著在兩片之間.然後,將推片自右向左平穩地推移(兩片之間呈30～45°夾角),推出一層均勻的菌膜.
2．乾燥
讓臨時塗片自然乾燥(自生固氮菌的臨時塗片不用加熱固定,以免破壞莢膜).
3．在顯微鏡下觀察
依次通過低倍鏡和高倍鏡觀察臨時塗片,可以看到染成紫色的自生固氮菌.
結論
通過顯微鏡能夠看到幾種自生固氮菌?它們在形態上各有什麼特點?將得出的結論寫在《實驗報告冊》上.
討論
1．為什麼盛放無氮培養基的培養皿應當是滅過菌的?
2．假如黏液中有三種自生固氮菌,你能不能想出一種辦法,將這三種細菌分離開來?