❶ 怎麼葯敏測試
一、 紙片擴散法 該法是將含有定量抗菌葯物的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的葯物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌葯物的濃度呈對數減少，從而在紙片的周圍形成濃度梯度。同時，紙片周圍抑菌濃度范圍內的菌株不能生長，二抑菌范圍外的菌株則可以生長，從而在紙片的周圍形成透明的抑菌圈，不同的抑菌葯物的抑菌圈直徑因受葯物在瓊脂中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小可以反映測試菌對葯物的敏感程度，並與該葯物對測試菌的MIC呈負相關。 二、稀釋法 稀釋法葯敏試驗可用於定量測試抗菌葯物對某一細菌的體外活性，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。實驗時，抗菌葯物的濃度通常經過倍比（lg2）稀釋，能抑制待測菌肉眼可見生長的最低葯物濃度成為最小抑菌濃度（MIC），一個特定抗菌葯物的測試濃度范圍應該包含能夠檢測細菌的解釋性折點（敏感、中介和耐葯）的濃度，同時也應該包含質控參考菌株的MIC. 2.1 瓊脂稀釋法 首先制備含抗菌葯物的瓊脂稀釋平板。再接種待測菌株，然後是結果判讀。 2.2 肉湯稀釋法 三、抗生素濃度梯度法 四、自動化儀器法
❷ 說下各種需要葯敏試驗的葯物、濃度以及皮試配置方法
確實各個地方的標准不一樣，即使同一個科室每個人也各自為政，一人一個配法。就拿頭孢類葯物皮試說吧，有的不需要做，有的強調凡注射類葯物必須都做皮試。皮試液濃度從100ug_1200ug/ml不等，稀釋的次數在三次到四次。本醫院需做皮試的葯物有青黴素類、頭孢類、破抗、鏈黴素、造影劑、細胞色素C、狂犬病免疫血清、胸腺肽等葯物。個人的配製方法是：青黴素類和頭孢類配製差不多，首次3.5ml—5ml，然後按基礎護理學上的配製方法稀釋三次，最後的濃度200-400u/ml或125ug-250ug/ml。破抗、鏈黴素、造影劑等按書上的做。後兩種按說明書做。濃度稍微偏高一點沒關系，因為實際上做皮試時注入量大多不足0.1ml。此根據雜志上關於皮試液濃度的論文假陰性和假陽性率的判斷，是
❸ 葯物敏感實驗方法主要有什麼，才用培養基為什麼用肉湯
葯敏試驗的方法目前公認的只有三種：KB法、MIC法、E-test法，比較常用的是前兩種。
葯敏試驗並不需要用肉湯，只需要將目標菌培養出菌苔之後，在生理鹽水中研磨配置出一定麥氏單位的濃度菌液即可使用，有時候也可能會用肉湯進行增菌，在肉湯里的細菌麥氏單位達到一定程度也可以用來做葯敏，但是很少這樣做。
❹ 怎麼做葯敏實驗
葯敏試驗根據美國臨床標准委員會（NCCLS）推薦的K-B瓊脂法進行，葯敏紙片選擇中國生物製品鑒定所葯敏紙片，試驗所選擇葯物必須包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉維酸（AMC），頭孢噻吩（CFT），頭孢噻肟（CTX），慶大黴素（GEN），萘啶酸（NAL），環丙沙星（CIP），四環素（TBT），利福平（RFA），復方新諾明（SMZ）。葯敏結果判定標准按照NCCLs手冊2005版。
1. 操作方法：
（1）將待檢菌接種於普通營養瓊脂平板，37℃培養16～18小時，然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落，懸於3ml生理鹽水中，混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。
（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多餘菌液。用棉拭子塗布整個M-H培養基表面，反復幾次，每次將平板旋轉60度，最後沿周邊繞兩圈，保證塗均勻。
（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取葯敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少於24mm，紙片中心距平皿邊緣不少於15mm。在菌接種後15分鍾內貼完紙片。
（4）將平板反轉，孵育18～24小時後取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數毫米數並記錄（附表6）。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長，進入抑菌環，磺胺葯在抑菌環內出現輕微生長，這些都不作為抑菌環的邊緣。結果判斷依據鑒定所葯敏紙片判定標准。
（5）每次葯敏試驗必須用ATCC 25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株的結果才可以報告。ATCC 25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。
0.5麥氏比濁管配製方法：
0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml
0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml
將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。有效期為6個月。
2. 注意事項：
(1) 制備MH瓊脂平板應用直徑90mm平皿，在水平的實驗台上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養基），瓊脂凝固後塑料包裝放4℃保存，在5 日內用完，使用前應在37℃培養箱烤乾平皿表面水滴。傾注平皿前應用pH計測pH值是否正確(pH應為7.3)。pH過低會導致氨基糖苷類，大環內酯類失效，而青黴素活力增強。
(2) 葯敏紙片長期儲存應於－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應至於含乾燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出後,放置平衡到室溫後才可打開，用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。 過期紙片不能使用, 應棄去。
(3) 不穩定葯物如亞胺培南, 頭孢克洛, 克拉維酸復合葯等, 應冷凍保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保證質控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復活。然後每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，傳出細菌供常規用。待用剩至最後一支，可傳種在M-H平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。
3.質量控制
質量控制方法 是用與常規實驗相同的操作方法，測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗布方法等均同常規操作，測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。