① 純種分離的方法有哪三種
平板劃線法,稀釋塗布法,選擇培養基分離。
② 實驗室常用哪種方法分離純種細菌
最常用的肯定是平板劃線接種法
原理:通過在平板上劃線,將混雜的細菌在瓊脂平板表面充分的分散開,使單個細菌能固定在一點上生長繁殖,形成單個菌落,以達到分離純種的目的。若需從平板上獲取純種,則挑取一個單個菌落作純培養。
③ 微生物分離方法
微生物分離法是獲得微生物純培養物的一種分離方法。通過這個方法可實現一種微生物的培養,或獲得一個細胞的後代。其具體方法有:
1、稀釋倒平皿法。將待分離的材料作一系列稀釋,取不同稀釋度適量塗布於固體培養基平板上或與已熔化的固體培養基一起傾注入平板內,經過培養即有一個微生物細胞繁殖來的單個菌落。
2、劃線法。先將已熔化的固體培養基製成平板,待凝後,取分離材料在上面劃線,可作平行劃線、扇形劃線或其他形狀的連續劃線,使菌樣逐漸減少,最後得到單個孤立的菌落。
(3)常用的純種分離方法有擴展閱讀:
微生物分離技術的應用措施:
1、減少毒性氧物質的毒害作用:由於常規培養方法使用的高濃度營養基質不利於微生物生長,適當降低營養基質的濃度可以減弱這種不利影響。發現低濃度基質的培養基培養出的細菌在數量和種類上均多於高濃度基質的培養基,但營養濃度過低時會使培養出的微生物數量反而下降。
2、維持微生物間的相互作用:在培養基中加入微生物相互作用的信號分子就可簡單模擬微生物間的相互作用,滿足微生物生長繁殖的要求。
3、供應新型的電子供體和受體:不同微生物的代謝過程不同,因此對反應的底物要求也不盡相同。供應微生物需要的特有底物有助於新陳代謝反應的進行及微生物的正常生長。大量的研究表明,將新穎的電子供體和受體應用到微生物培養中,能夠發現未知的生理型微生物。
4、分散微生物細胞:自然界中很多微生物聚集生長,形成「絮體」和「顆粒」等,致使其內部的微生物不易被培養。對「絮體」和「顆粒」進行適度的超聲處理,將細胞分散再進行培養,可以使更多的微生物接觸培養基而得到培養。
5、延長培養時間:對「寡營養菌」的培養,可適當延長培養時間,使其能長至肉眼可見的尺度。當然培養時間不能無限增長,因為培養時間越長,對培養環境的無菌要求就越高[4]。
6、利用瓊脂替代物:瓊脂對某些微生物具有毒性作用,採用無害且凝結作用較好的替代物質作為培養基固化劑,可以增加微生物的可培養性。
④ 常見物質分離提純的10種方法
1.結晶和重結晶:利用物質在溶液中溶解度隨溫度變化較大,如NaCl,KNO3。
2.蒸餾冷卻法:在沸點上差值大。乙醇中(水):加入新制的CaO吸收大部分水再蒸餾。
3.過濾法:溶與不溶。
4.升華法:SiO2(I2)。
5.萃取法:如用CCl4來萃取I2水中的I2
6.溶解法:Fe粉(A1粉):溶解在過量的NaOH溶液里過濾分離。
7.增加法:把雜質轉化成所需要的物質:CO2(CO):通過熱的CuO;CO2(SO2):通過NaHCO3溶液。
8.吸收法:用做除去混合氣體中的氣體雜質,氣體雜質必須被葯品吸收:N2(O2):將混合氣體通過銅網吸收O2。
9.轉化法:兩種物質難以直接分離,加葯品變得容易分離,然後再還原回去:Al(OH)3,Fe(OH)3:先加NaOH溶液把Al(OH)3溶解,過濾,除去Fe(OH)3,再加酸讓NaAlO2轉化成A1(OH)3。
10.紙上層析(不作要求)
⑤ 純種分離的方法有哪些簡述菌種分離和篩選的步驟
稀釋法,平板劃線法,常用的就是這兩種
篩選就用不同的培養基,加不同的抗生素
⑥ 分離純化微生物的方法有哪些各方法適用分離什麼菌種
主要有:劃線法、倒平板法、塗布法,根據分離的菌種選擇不同的培養基。
稀釋混合倒平板法、稀釋塗布平板法、平板劃線分離法、稀釋搖管法、液體培養基分離法、單細胞分離法、選擇培養分離法等。其中前三種方法最為常用,不需要特殊的儀器設備,分離純化效果好。
從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中,不僅需要通過分離。
分離技術
主要是稀釋和選擇培養,稀釋是在液體中或在固體表面上高度稀釋微生物群體,使單位體積或單位面積僅存留一個單細胞,並使此單細胞增殖為一個新的群體。最常用的為平板劃線法。
如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數量極少或者增殖過慢而難以稀釋分離時,需要結合使用選擇培養法,即選用僅適合於所要分離的微生物生長繁殖的特殊培養條件來培養混雜菌體,改變群體中各類微生物的比例,以達到分離的目的。為保證分離到的微生物是純培養,分離時必須用。
以上內容參考:網路-微生物分離純化
⑦ 純種分離
純種的分離
在純種分離工作中,為了獲得純種,通常採用各種條件以控制雜苗的繁殖。主要採取的方法,是利用分離微生物的各種特性,發展所需要的純種微生物,抑制有害微生物。操作要求如下:
1.營養條件的控制:
例如,分離麴黴用察氏培養基,控制其營養在最低限度,防止菌落的過份擴張,分離酵母用麥芽汁瓊脂,不僅有利於酵母生長,而且能限制芽孢桿菌的擴展,還可以根據所分離菌種,能同化某些碳源或氮源的特點,限制其它雜菌的生長,如分離漢遜酵母以乙醇為唯一碳源等。
2.酸鹼度的控制:
如分離黴菌,在培養基中加入乳酸,可以控制雜菌的生長。
3.特殊生理特性的控制:
如分離酵母菌,可利用酵母耐酒精的特性,在培養基中加入2%以上的乙醇,以抑制許多其它微生物的生長。典型者如紅麴黴分離,可加乳酸至1%以上,加酒精至8%(V/V)。從嚴重污染物中分離純種,採用特殊抑制劑的方法很多,如分離放線菌時,加入苯酚數滴,可抑制黴菌生
長;青黴素對格蘭氏陽性菌有抑製作用,而對格蘭氏陰性卻作用甚微;四環素能抑制細菌,但對酵母、黴菌則很少有抑製作用,制黴菌素、灰黃黴素,對酵母、黴菌都有抑製作用,而不能抑制細菌和放線茵。芽孢桿菌的污染,常常給菌種培養帶來極大的困難。為了抑制大多數芽孢桿菌的生長,不防礙黴菌的繁殖,需要在分離培養基中加入選擇性的防腐劑。G.smith發現在培養基里加入玫瑰紅(四氯、四碘螢光素)是非常有效的,其加入量是每升培養基加0.035克。在培養基滅菌後,可以不必加抗菌素。假如需要的話,玫瑰紅在培養基里的濃度可以增加到每升0.067克,這個濃度可發揮顯著的抗擴展作用,超過這個濃度,黴菌也要受到抑制。下面三個培養基可以作為分離黴菌抗細菌的培養基:
①Littman氏培養基(1947),
葡萄糖 1.0%
蛋白腖 1.0%
牛膽汁 1.5%
結晶紫 1∶100,000
鏈黴素 30單位/毫升
水 l00毫升。
培養基先在不加鏈黴素時製成,用一般方法滅菌,冷卻到50℃,用無菌生理鹽水(0.85%)配成鏈黴素,在培養基 倒入培養皿前加入。培養基中的牛膽汁可防止黴菌菌落擴張。
②G.smith氏培養基:
葡萄糖 10克
NaNO3 1克
K2HPO4 1克
瓊 脂 1.5克
玫瑰紅 0.067克
20%土豆汁 1000毫升。
③Cooke氏培養基;
葡萄糖 10克
蛋白腖 10克
KH2PO4 1克
MgSO4·7H2O 0.5克
瓊 脂 20克
玫瑰紅 0.035克
水 1000毫升
金黴素 35微克
金黴素在培養基滅菌並冷卻後,倒入培養皿前加入。
⑧ 實驗室微生物菌種純化方法
1、傾注平板法
首先把微生物懸液通過一系列稀釋,取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營養瓊脂培養基充分混合,然後把這混合液傾注到無菌的培養皿中,待凝固之後,把這平板倒置在恆箱中培養。單一細胞經過多次增殖後形成一個菌落,取單個菌落製成懸液,重復上述步驟數次,便可得到純培養物 2、塗布平板法
首先把微生物懸液通過適當的稀釋,取一定量的稀釋液放在無菌的已經凝固的營養瓊脂平板上,然後用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地塗布在培養基表面上,經恆溫培養便可以得到單個菌落。3、平板劃線法
最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環取培養物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多,常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。當接種環在培養基表面上往後移動時,接種環上的菌液逐漸稀釋,最後在所劃的線上分散著單個細胞,經培養,每一個細胞長成一個菌落。
4、富集培養法
富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件只讓所需的微生物生長,在這些條件下,所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭,在生長能力方面遠遠超過其他微生物。所創造的條件包括選擇最適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下,經過多次重復移種,最後富集的菌株很容易在固體培養基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌,就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中,使其大量生長。通過多次重復移種便可以得到純的寄生菌。
5、厭氧法
在實驗室中,為了分離某些厭氧菌,可以利用裝有原培養基的試管作為培養容器,把這支試管放在沸水0浴中加熱數分鍾,以便逐出培養基中的溶解氧。然後快速冷卻,並進行接種。接種後,加入無菌的石蠟於培養基表面,使培養基與空氣隔絕。另一種方法是,在接種後,利用N2或CO2取代培養基中的氣體,然後在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些厭氧菌,可以把所分離的樣品接種於培養基上,然後再把培養皿放在完全密封的厭氧培養裝置中。
⑨ 物質的提純與分離的方法有什麼
物質的提純是要提純一種純凈的物質,包括物理方法和化學方法.
物理方法:過濾、蒸發、冷卻熱的飽和溶液的方法結晶(重結晶)、蒸餾等方法.
化學方法:加試劑發生化學反應,把雜質變成氣體、沉澱等,然後過濾分離.
物質的分離是將幾種物質分離開,主要的方法是物理方法:
如:過濾、冷卻熱的飽和溶液的方法結晶(重結晶)、蒸餾等方法.