寫出線蟲的常用病原學診斷方法

A. 病毒線蟲細菌的常規鑒別方法

對於植物的病毒、線蟲和細菌等病害，通常從它們引起的症狀可以進行判斷：
病毒病通常會引起植株葉片扭曲、花葉、皺縮、畸形；
線蟲一般是使植株根部產生腫瘤、突起，影響根的功能從而影響植物生長；
細菌引起的症狀一般是腐爛壞死，而且病部常常會產生粘狀物或透明膜狀物，是因為有的細菌能產生莢膜

B. 線蟲死活鑒定

首先聲明偶談不上專家，只是目前在做線蟲實驗。據偶所查文獻資料，線蟲死活鑒定方法有以下幾點：

1.刺激法，用挑針自己蟲體，看是否有反應（少數不是很准確）；
2.染色法，用0.05％Newblue水溶液染色，死蟲蟲體為紫色，活蟲為透明；
3.體型的變化，將線蟲放入2％NaCl溶液2min後觀察，死蟲蟲體僵直，活蟲蜷曲扭動；
4.熒光檢測，把蟲子在0.5％丫啶溶液放1天，用熒光顯微鏡鏡檢，活蟲為綠色，死蟲赤銅色。

C. 根結線蟲病的發生症狀、病原、發病規律及防治方法如何

症狀：根結線蟲病在長江流域以南普遍發生，北方保護地育苗栽培發生較重。主要發生在根部的須根和側根上，受害根部腫起，形成不規則瘤狀物，初為白色，後呈黃褐色至黑褐色。由於破壞了根系正常功能，使地上部植株生長衰弱，造成不同程度的矮小，嚴重時整株枯死。

病原

本病是由南方根結線蟲引起，屬植物寄生線蟲。

發病規律

根結線蟲常以2齡幼蟲或卵隨病殘體遺留在土壤中越冬，可存活1～3年。條件適宜，越冬卵孵化為幼蟲，繼續發育並侵入寄主。初侵染源主要是病土、病苗及灌溉水。土溫25～30℃，土壤持水量40%左右，病原線蟲發育快；10℃以下幼蟲停止活動，55℃經10分鍾死亡。地勢高燥、土壤質地疏鬆、鹽分低的條件適宜線蟲活動，有利於發病，連作地發病重。

農業防治：

（1）輪作倒茬。

凡易受根結線蟲為害的蔬菜作物，如南瓜、黃瓜、胡蘿卜等，不宜做加工番茄的前茬，最好與禾本科作物如春小麥、水稻、高粱等輪作。

（2）深翻。

根結線蟲多分布在3～9厘米的表土層中，深翻土壤可減少為害。

（3）選用無線蟲土育苗。

化學防治：土壤消毒，保護地育苗栽培利用7、8月份休閑時間將棚扣嚴一周，用高溫殺死蟲卵和成蟲，或在冬季將棚內灌一次凍水，不扣膜，經2個月結冰冷凍，或每平方米用1.8%愛福丁（阿維菌素）乳油1毫升處理土壤，使用時將其用少量水稀釋噴在地面，立即翻入土中。

D. 蟯蟲病的首先病原學檢查方法是什麼

透明膠紙法、棉簽拭子法

E. 什麼是植物線蟲病害

plant nematode diseases

馮志新，黎少梅線蟲對植物的為害其發病過程與昆蟲咀嚼植物造成的機械損害不同。在攝取寄主體內營養物以前，線蟲由食道腺分泌含有多樣酶系的唾液，注入受害細胞。因唾液的毒害作用，寄主植物內部發生一系列生理病變和組織病變，外部出現症狀。

分布

世界各地區均有分布。不同線蟲病害因地理、氣候條件、寄主植物、土壤類型和發生歷史等因素而不同。而具有一定的地理分布區。多數根結線蟲如南方根結線蟲和爪哇根結線蟲主要在熱帶和亞熱帶地區發生，少數根結線蟲如北方根結線蟲主要分布在月平均溫度最低0℃和最高15℃的北緯35°以北地區。在全世界，南方的植物根結線蟲病之所以較北方發生普遍和危害嚴重，溫度條件起了主要作用。小麥和大麥根癭線蟲病和茶盧斯根腐線蟲病分布在高海拔地區，前者在中國雲南省分布在海拔2000米以上的高山地區，後者在斯里蘭卡分布在900～1800米的高地上。各種病原線蟲對寄主植物種類和品種有選擇性，因而某些線蟲病害與該地區的植被類型和栽培作物的種類和品種有關。如尖頭螺旋線蟲和變尾螺旋線蟲等在英國某些荒地（broadbalk wilderness）上流行，與該地覆蓋的再生林、草類型有一定聯系。松材線蟲萎蔫病[Bursaphelenchus xylophilus（Steiner&Buhrer）Nickle]在日本流行成災，因為日本林地內廣泛分布高度感病的樹種日本赤松和日本黑樹。有些線蟲病害的發生與土壤類型有密切的關系，如根結線蟲病一般分布在砂土地區；洋蔥莖線蟲病[Ditylenchus dipsaci（kühn）Filipjev]則在重粘土地區發生嚴重。此外，某些線蟲病害局限在少數國家發生，如松材線蟲萎蔫病，長期以來只是在日本、美國等少數國家發生，近年來才在中國江蘇、台灣、香港和韓國等國和地區出現。

為害

植物線蟲主要為害糧、棉、油、煙、茶、蔬菜、果樹、林木、花卉、熱作、牧草和葯材等各類作物乃至食用菌，給農林業生產造成巨大的損失。據1971年美國線蟲家協會作物損失委員會統計，美國農作物線蟲病引起平均損失為10%，約為16億美元。美國薩瑟（J.N.Sasser）等1987年估計每年全世界線蟲造成的損失超過1000億美元；巴里加（R.Barriga）報道1976年哥倫比亞由根結線蟲引起咖啡的損失每年多達8億美元。目前在世界各地普遍發生的線蟲病害主要有根結線蟲、短體線蟲、胞囊線蟲、莖線蟲、球形胞囊線蟲、半穿刺線蟲和穿孔線蟲等所引起的各種植物線蟲病害。其中，相似穿孔線蟲、馬鈴薯金線蟲、馬鈴薯白線蟲、松材線蟲、椰子紅環腐線蟲、起絨草莖線蟲、稻莖線蟲和甜菜胞囊線蟲等在某些國家流行，造成毀滅性為害，因此列為中國對外檢疫對象。中國比較突出的線蟲病害有花生、煙草、柑橘、桑、茶、麻、蔬菜、花卉和葯材等多種作物的根結線蟲病及大豆胞囊線蟲病、甘薯莖線蟲病和薴麻根腐線蟲病等。近年來局部地區發生的松材線蟲萎蔫病，小麥根癭線蟲病、小麥禾穀胞囊線蟲病、珠蘭葉斑線蟲病[A.fragariae（Ritzema Bos）Christie]和當歸麻口病（D.destructor Thorne）等也引起較大的經濟損失。還有一類線蟲病害如甘蔗矮化線蟲病、水稻潛根線蟲病和玉米根腐線蟲病等在中國普遍發生，目前尚未造成很大損失，但都是農業生產上值得重視的問題。

症狀

植物線蟲病害的症狀與病原線蟲的為害習性有關。線蟲大多侵染根、根莖、塊根、塊莖和鱗莖等地下部，對侵害的組織不誘發明顯的症狀，少數如根結屬、柯柏線蟲屬等內寄生線蟲與毛刺線蟲屬、擬毛刺線蟲屬以及部分長針線蟲屬、劍線蟲屬、鞘線蟲屬等外寄生線蟲，可引起顯著的外部病變，包括根結、粗短根、發根或其它樣式的根部膨大；內寄生線蟲中的短體線蟲屬、穿孔線蟲屬等線蟲可以誘發地下部壞死。這類病株的地上部往往表現黃化和矮縮，嚴重時出現死株。病株根系的腐爛症狀除線蟲侵染外，常常還有其它微生物的參與，通常屬於復合病症狀。

滑刃科中的部分滑刃屬線蟲、松材線蟲、紅環腐線蟲與粒科中粒線蟲屬、擬粒線蟲屬及莖線蟲屬的部分線蟲僅為害植物地上部，可以引起病株出現特異的症狀，能從被害部分分離到病原線蟲。地上部線蟲病的症狀可以劃為4類。①畸形。包括莖、葉變形和植株矮縮。由起絨草莖線蟲引起的洋蔥、水仙、苜蓿、麥類和豆類等許多作物的莖線蟲病，病莖往往腫大、扭曲、節間縮短，葉和花也發生畸變；草莓春矮病（草莓芽線蟲）和夏矮病（稻干尖線蟲）的典型症狀是葉片皺縮和病株生長受抑，比健株顯著矮小。②壞死和變色。常在一些滑刃線蟲病害中出現。如菊葉線蟲病（菊葉線蟲）及蕨類、珠蘭、秋海棠等線蟲病（草莓芽線蟲）的葉斑症狀與椰子紅環腐線蟲病（紅環腐線蟲）的紅環病變等。③種癭、葉癭和莖癭。在許多植物特別是禾本科植物的粒線蟲病和擬粒線蟲病中，往往在受害的花芽、葉和莖上形成暗色的癭瘤。在癭內普遍貯有病原線蟲的幼蟲。④萎蔫。松材線蟲萎蔫病（松材線蟲）的系統萎蔫是線蟲病中出現這類症狀的唯一實例。

診斷

植物根結線蟲病、小麥粒線蟲病、稻干尖線蟲病和椰子紅環腐病症狀比較特異，根據症狀特點即可作出初步診斷。田間出現局部植株黃化、矮縮以及根系生長不良等現象時，可以初步確定是病原線蟲所致。准確診斷需進行病原線蟲的分離和鑒定，必要時還需進行接種試驗。對於新的線蟲病害，則需要根據柯赫氏法則進行證明。病原線蟲診斷需注意下述問題。為害植物地上部的線蟲和根內的寄生線蟲容易在病組織上分離到，但根的外寄生線蟲一般需要從根圍土壤中分離。因此要選用合適的采樣和分離方法。其次，一種植物往往被多種線蟲寄生，需要根據症狀特點和線蟲群體等因素判斷優勢病原線蟲。此外，進行人工接種試驗時，還需採用適當的接種方法和適宜的發病條件。

控制

植物病原線蟲長期或短期生活在土壤中，繁殖速度快，對寄主的為害程度與其群體的數量往往相關。控制植物線蟲病主要針對病原線蟲，應用植物檢疫、農業的、化學的、物理的和生物的單一或多種防治措施，阻止線蟲群體數量達到或超過其為害水平。對於部分線蟲病也可以通過選育和種植抗病品種進行防治。

一些病原線蟲的遠距離傳播是由於帶病植物、植物產品及其沾附的病土的人為流動所致。因此植物檢疫是許多國家或地區用於控制多種危險性線蟲病的主要措施。

在農業防治中廣泛應用作物輪栽和休閑，降低線蟲群體數量及其危害水平。化學防治以處理土壤為主，少數屬於種苗處理。合理使用殺線蟲劑處理土壤，可以防治許多植物寄生線蟲和增加作物產量，但是對於生產價值不高的作物，化學防治是不經濟的，不能完全取代作物輪栽和休閑等防治措施。熱力處理是防治線蟲最重要的物理方法。濕熱防治線蟲較乾熱防治的有效。熱力防治線蟲只限於溫室和苗床，用於處理大田是很不合算的。在線蟲受控和植物受害之間的溫差極小，適於熱力處理的常是那些較耐高溫的植物材料。在自然條件下，多種土壤微生物如真菌、細菌和病毒等都能侵害植物寄生線蟲，如淡紫擬青黴和厚膜輪枝孢霉可以分別有效地防治南方根結線蟲和燕麥胞囊線蟲。在日益提倡無污染或少污染種植的今天、生物防治線蟲是很有意義的待開發領域。

參考書目

J.M.韋伯斯特編，胡起宇譯：《經濟線蟲學》，農業出版社，北京，1988。

Luc，M.Sihara R.A.and Bridge J.(eds.)，Plant Parasi-tic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture，CAB International，1990.Nickle W.R.(ed.)，Manual of Agricultural Nematolo-gy，Marcel Dekker，Inc.，New York，Basel，Hongkong，1991.

F. 松材線蟲病的鑒定方法

1、形態鑒定：通過顯微鏡觀察線蟲頭部，尾部以及生殖器官等特徵來鑒定其是否屬於松材線蟲。
2、分子鑒定：BX-48松材線蟲自動化分子檢測系統
BX-48松材線蟲自動化分子檢測系統利用分子生物學原理，採用熒光PCR技術，利用松材線蟲特異性引物與探針，達到准確檢測松材線蟲的目的，准確率可達到100﹪；由於使用的是熒光PCR技術，整個檢測過程由儀器自動化完成，故無需人工使用顯微鏡觀察松材線蟲來進行判讀，從而解決了人工鏡檢因視覺疲勞降低工作效率的問題，亦不會出現誤讀誤判，完全避免人為出現誤判的可能性，同時鑒定結果簡單易讀，窗口直接顯示樣本內是否含有松材線蟲；操作簡單便捷，只需將試管放入檢測位內，其餘工作均在電腦上通過滑鼠完成，大大減少了操作人員的勞動強度；該設備擁有48個檢測位，可同時檢測大批樣本，進一步提高工作效率。

G. 如何進行植物病害診斷和鑒定:

進行植物種植，傳統的就是除草、澆水和防治病蟲害，那麼植物病蟲害應該如何去防治呢？首先要知道如何辨別別植物病蟲害，我們生產的植物病害檢測儀可以迅速的將植物病蟲害進行鑒別，不過這是建立在知道植物病蟲害的發病機理上的，下面我們一起看下植物病蟲害是如何被引發的。
一、非傳染性病害：植物在不適宜的土壤上，或是遇到不適合的氣候、水分、肥料過多過少等所引起的病害。如甜菜地里如果土壤中缺乏微量元素「硼」，就要引起甜菜根變黑腐爛，叫做缺硼病。這一類的病害不會傳染蔓延，所以叫做非傳染性病害。

二、傳染性病害：是由病菌侵害發生的，能夠傳染，所以叫做傳染性病害。這類病害種類最多。引起傳染性病害的病菌大多數為真菌，其次就是病毒和細菌，以及線蟲和寄生性種子植物等。
植物得病後，一般常見的症狀有:變色、斑點、矮化、叢生、黃化、壞死、腐爛、萎蔫、縮葉、縮果、扭曲、瘤腫、畸形等。葉面上有時布滿霉狀物(黃色、紅色、綠色等)、黑粉狀物、白粉狀物、銹狀物以及小黑點等顆粒狀物。
傳染性病害中，由於病原菌不同，植物生病後，外部的形態改變也不一樣，而且同一種寄生物在不同的植物上或者在同一植物的不同發育時期，以及受環境條件的影響，都可表現不同的症狀。相反，不同的寄生物也可能引起相同的症狀。因此，對植物病害除分析發病的原因外，還必須進一步鑒定病原生物，才能做出正確的診斷。對植物病害的診斷方法一般採用以下幾個步驟：

1.症狀診斷：
在診斷植物病害時，首先進行症狀觀察，根據症狀特點，區別病害還是傷害。傷害是沒有病變過程，病害是有病變過程的。如果是病害，還要區別是非傳染性的，還是傳染性的病害。在觀察症狀時，一般用擴大鏡或用肉眼觀察病株的外部表現，當外部症狀不明顯時，再進行病理解剖，檢查內部症狀。由於各種病害在田間的發生和發展其表現有一定的規律，因此在觀察植物病害的症狀時，應特別注意：
(1)病害的普遍性和嚴重性多；
(2)病害發展和在田間的分布；
(3)發生時期和植株生育期；
(4)受害寄主和部位位；
(5)栽培管理方法等。

病毒病害與非傳染性病害容易混淆，因為病毒病害在外表看不出病症，區別病毒病與非傳染性病害，除根據有無傳染現象外，還可根據病害的發生特點。非傳染性病害在田間大都是普遍、均勻、成片發生，發病地點與地形土質或環境條件有關。病毒病害在田間多是分散發生，在病株周圍可找到健株，其症狀除呈現花葉、黃化或矮縮畸形外，還常與傳毒昆蟲的活動有密切關系。

2.病原鑒定：
鑒定病原是對植物病害進行診斷最可靠的方法。對不同性質的炳原必須採取不同的鑒定方法。
(1)非傳染性病害的病原鑒定
在對養分、水分、溫濕度和厭圍環境條件進行分析的基礎上，可進行化學診斷，就是將有病的植物榨出液或病土進行分析，測定礦物營養(如氮、磷、鉀、硫、鐵以及其他微量元素的含量)，是否符合健康植物的標准，並查明所缺元素。其次還可以進行人工誘發試驗，如水培法和砂培法，人為的提供可疑的類似條件，觀察是否發病。
(2)傳染性病害的病原鑒定
①病毒病害的病原鑒定

病毒病害的病原用普通顯微鏡觀察不到組織病變。目前在電子顯微鏡還不普及的情況下，多採用人工接種試驗來驗證。人工接種試驗是用病株汁液磨擦接種、嫁接、昆蟲傳染等方法。同時還可以根據病毒的生物學特性，如傳播方法、寄主范圍、寄主反應、體外保毒期、稀釋終點以及血清方法等來區別病毒的種類。有些植物病毒還可以採用指示物進行鑒定。
②細菌病害的病原鑒定

對細菌病害的病原鑒定，多採用「細菌溢」的方法。具體是切取小塊病組織製片，放載玻片於顯微鏡下檢查，如覺現有「細菌溢」從病組織(維管束)湧出，即可勿步確定為細菌病害。
如果鑒定細菌的種類，就可進行革蘭氏染色，通過陽性和陰性反立來區別。此外還可以進行分離培養，獲得較純的培養菌種，然後通過傷口或白然孔(水孔、皮孔、氣孔等)人工接種，來確定細菌的種類。

目前，對細菌病害病原的鑒定，較迅速准確的方法是採用血清反應。具體方法是取一定病原的細菌液少許放載玻片上，然後加入某種用生理鹽水稀釋過的「抗血清」，如果兩者產生「凝集」即證明是某細菌病害的病原。例如鑒定馬鈴薯環腐病的病原菌時，可將已培養好的環腐病細菌液注射到兔子體內，然後抽取兔子血液，使沉澱後取上部的血清(即抗血清)，用生理鹽水稀釋後放載玻片上，與被懷疑為馬鈴薯環腐病的病原細菌掖混合，如產生「凝集」，即證明為環腐病病原。否則為非環腐病病原。
③真菌病害的病原鑒定

鑒定真菌病害，一般常用的方法是挑取病株組織上的菌絲或子實體製片，然後置顯微鏡下觀察病菌的形態、特徵、色澤、大小、結構等。其次是採用分離培養和接種試驗。分離培養是切取小塊病株組織經表面消毒和滅菌水洗後，移到一定的培養基平板上，在一定的恆溫下培養，幾天後觀察菌落、菌絲體、無性抱子、有性抱子等形態、色澤。接種試驗應根據真菌病害不同的侵染類型，將病菌抱子進行拌種、花器接種、土壤接種、塗抹接種或將抱子棍懸液進行噴霧接種。
④線蟲病害的病原鑒定

植物受線蟲為害後，多在受害部位產生蟲廖或膨脹的形態變化，剖切蟲瘦或膨脹部分用針挑取內部含有物製片，然後放顯微鏡下觀察有否線蟲及形態特徵。有些線蟲病並不引起植物形態變化，可採用漏斗分離法和葉片染色法進行檢查，作出診斷結果。

H. 松材線蟲病的檢疫方法是什麼

1、直觀檢驗：此種方法主要在產地調查時使用。在調查時仔細觀察樹木發育是否正常，注意察看有無樹脂分泌減少、停止，針葉變褐、萎蔫，枝幹及整株枯死的現象，同時觀察樹幹上有無天牛蛀食的痕跡、產卵孔、羽化孔等，如有再行解剖檢查。

2、解剖檢驗：用工具將可疑感病的樹木鋸斷劈開，看材質重量是否明顯減輕；木質部有無藍變現象；樹干內有無松褐天牛棲居的痕跡。

3、漏斗分離檢驗：從罹病木發病部位或天牛棲居處鑽取木材組織並粉碎，用雙層紗布包好，置於下方帶有膠管和截流夾的玻璃漏鬥上，加水浸泡12小時，取下部浸泡液離心，取其沉澱液15ml，置於解剖鏡下，對照松材線蟲的形態特徵進行檢查鑒定。

4、接種試驗：把分離到的松材線蟲接種到健康的松樹上，觀察健康樹是否發病。

I. 根結線蟲病如何識別與防治

（1）為害症狀 寄生在植物的根上，形成許多根瘤狀物，即根結。根結初為白色，後成淡褐色，可互相連接成節結狀。被寄生的植株，嚴重時地上部分表現為營養不良，生長勢弱，結瓜少而小，甚至不結瓜。瓜類整個生育期可多次重復被侵染，根結線蟲還可傳播病毒病。
（2）防治方法 ①農業防治。與禾本科作物或蔥、蒜等實行3年以上的輪作或水旱輪作；用雞糞或棉籽餅作基肥，對線蟲有一定的抑製作用；作物收獲後可大水漫灌浸淹1個月，殺滅線蟲；采瓜後，在炎熱季節，翻耕澆灌並覆膜，曬5～7天，殺蟲效果很好。②葯劑防治。在播種和定植前，用殺線蟲劑處理土壤。因殺線蟲劑多為高毒農葯，一定要注意用葯安全。施葯方法，可參看產品使用說明書。

J. 如何鑒別四種腸道寄生的土源性線蟲的成蟲

1、蛔蟲病

成蟲是蛔蟲病的主要致病階段：奪取營養；影響吸收；變態反應；並發症及異位寄生，導致腸梗阻，以及膽道、胰管、闌尾等蛔蟲症，嚴重時可以致命。

2、鞭蟲病

輕度感染一般無明顯症狀，如果感染者糞便的蟲卵數超過5000/g或10000/g時，則往往有症狀，出現食慾不振、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉或便秘，以及消瘦、乏力等症狀。嚴重感染者（糞便蟲卵數超過20000/g）大多發生嚴重腹瀉或者痢疾綜合征。

極重度感染者，成蟲附著於直腸粘膜，可引起慢性痢疾，伴有腹痛和嚴重的里急後重，偶爾可致直腸脫垂。

3、鉤蟲病

鉤蚴侵入人體皮膚可引起鉤蚴性皮炎，病人可感到局部皮膚有燒灼、針刺或奇癢等感覺。多見於手指、足趾間皮膚嫩、薄處，也可見於手、足背部等，俗稱「糞毒」。鉤蟲幼蟲移行至肺泡後，病人可出現咽癢、咳嗽、伴有畏寒、發熱、哮喘樣發作等全身症狀。

成蟲寄生於小腸可引起消化、吸收等功能障礙。持續性、彌散性腹痛為常見症狀，以上腹部和臍周為劇烈。重度感染者還可出現黑色糞便和營養不良等。少數鉤蟲病人有喜食常人不能吃的東西，稱「異嗜症」。

4、蟯蟲病

蟯蟲病的主要症狀為雌蟲爬出產卵引起肛門周圍及會陰部奇癢和炎症，影響睡眠。患兒常有煩躁不安、夜驚、失眠、夜間磨牙、遺尿、食慾減退、消瘦等表現。

人染蟯蟲後，可引起肛門及會陰部皮膚瘙癢、煩躁不安、失眠、食慾減退、夜驚，長期反復感染,會影響兒意的健康和學習成績。當蟯蟲異位寄生時，則可導致嚴重後果，較為常見的是由於蟯蟲的雌蟲侵入陰道後而引起陰道炎、子官內膜炎、輸卵管炎、盆腔炎等。

(10)寫出線蟲的常用病原學診斷方法擴展閱讀

防治原則：糞便無害化處理，加強衛生宣傳，注意個人衛生和飲食習慣。

與生物源性蠕蟲區別：在發育過程中只需一個宿主，蟲卵或幼蟲在外界環境發育後即具感染性，這類蠕蟲稱土源性蠕蟲，如蛔蟲、鞭蟲、蟯蟲和鉤蟲。另一類蠕蟲在其發育過程中需要中間宿主，人的感染來源於另一生物，這類蠕蟲稱生物源性蠕蟲，如常見的吸蟲、豬帶和牛帶絛蟲、絲蟲等。