『壹』 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟
微生物的顯微直接計數法
一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法,掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多,通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液,如有雜菌或雜質,常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板,一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤(Petrof Hausser)細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同,只是細菌計數板較薄,可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚,不能使用油鏡,計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片,載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬,其中間又被一短橫槽分隔成兩半,每個半邊上面各有一個計數區(圖21-1),計數區的刻度有兩種:一種是計數區分為16個大方格(大方格用三線隔開),而每個大方格又分成25個小方格;另一種是一個計數區分成25個大方格(大方格之間用雙線分開),而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造,它們都有一個共同特點,即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm,則計數區的面積為l mm2,每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後,計數區的高度為0.1mm,所以每個計數區的體積為0.1mm3,每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時,先要測定每個小方格中微生物的數量,再換算成每毫升菌液(或每克樣品)中微生物細胞的數量。
已知:1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以:1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格,即系數K=4×106 。
因此:每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數(N)×系數(K)×菌液稀釋倍數(d)
三、實驗器材
1.活材料:釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面或培養液。
2.器材:顯微鏡、血球計數板、蓋玻片(22mm×22mm)、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋到10-2),以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3.將酵母菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區,勿使氣泡產生,並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上,不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片後,造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。4.靜置片刻,將血球計數板置載物台上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區後,再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。
5.計數時若計數區是由16個大方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數。如果是25個大方格組成的計數區,除數上述四個大方格外,還需數中央l個大方格的菌數(即80個小格)。如菌體位於大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。
6.對於出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),求出每一個小格中細胞平均數(N),按公式計算出每ml(g)菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7.測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾,放入盒內保存。
五、實驗作業:
將實驗結果填入下表中:
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次
『貳』 微生物計數方法有哪些
測定微生物細胞數目的方法有很多,介紹幾種
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數。
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞。
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數。
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸桿菌的數目:將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目。
此法也是統計樣品中活菌的數目。
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大。因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確。
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況。
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。
『叄』 能不能介紹下生物學上統計的方法
一般來說在普通生物上的統計方法基本都是抽樣法,比如蝸牛的牙齒,科學家可以先確定出蝸牛有牙齒的部分面積有多大,然後從這個面上隨機的取一定數量的小方塊,比如100個,比如每個方塊0.1平方毫米。然後算出每個方塊中的平均牙齒數量,然後再乘以總面積,恩,就得出來了。也有可能是其他方法,但思路和這個差不多,抽樣法,絕不可能是一個一個數的。。。
但是關於基因這方面的不是這樣的,1號染色體有多少對鹼基這個我可以負責任的告訴你,確實是一個一個測出來的,這個工程叫「人類基因組計劃」花了10年時間,測出了所有的30億對鹼基。
但是呢,上麵包含的基因數量不完全是確定了的,有一些是通過計算機預測出來的,但很大一部分是被科學家鑒定過的。上面的抽樣法在基因這個層面就不太適用了。
生物統計學是一個專門的學科,如果你有興趣我可以給你介紹一下,你也可以自己找書看看,就找《生物統計學》就好。
『肆』 用來測定細菌生長量的直接計數法和間接計數法包含哪些具體的方法
顯微鏡直接計數法和稀釋平板計數法是測定微生物數量的常用方 法。 直接計數法中常用的是顯微鏡直接計數法,這種方法是先將待 測樣品製成懸液,然後取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數(圖1- 3-1)。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微 生物總數。直接計數法所需設備簡單,可迅速得到結果,而且在計數 的同時能觀察到所研究微生物的形態特徵,其缺點是難以計數微小的 細菌。這種方法一般適用於純培養懸浮液中各種單細胞菌體的計數。 間接計數法最常用的是稀釋平板計 數法,它是根據微生物的培養特徵而設計 的計數方法。這種方法在樣品中含菌數較 少的情形下,也可以完成計數。 應用稀釋平板計數法計數時,需要 將待測樣品配製成均勻的系列稀釋液,盡 量使樣品中的微生物細胞分散開。再取一 定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板 中,使其均勻分布於平板中的培養基內; 或是將一定量的稀釋液,與溶化後冷卻至 45℃左右的瓊脂培養基混合,傾入無菌培 養皿中,搖勻、靜置待凝。經過培養後, 就由單個微生物生長繁殖形成菌落,這樣 的一個菌落就代表著一個微生物個體。統 計培養基中出現的菌落數,即可推算出檢 測樣品中的活菌數。 FOR EXAMPLE:] 土壤中好氣性細菌的計數 土壤中生活的微生物種類和數量是極其豐富的,這些數量眾多的 微生物對提高土壤肥力有重要作用。因此,測定土壤中的含菌量可以 作為判定土壤肥力的一個重要指標。 材料器具 土壤樣品;牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(附錄二)、無菌水;培養皿、 移液管、天平、錐形瓶、試管、酒精燈、恆溫培養箱、搖床等。 活動程序 1.制備土壤稀釋液 取土壤表層5~10 cm 處的土樣。准確稱取1 g 土樣,放入盛有 99 mL 無菌水的錐形瓶(250 mL,放有小玻璃珠)中,用手或搖床振盪 20 min,即製成102 倍的稀釋液。 用1 mL無菌移液管,吸取10 2倍稀釋液0.5 mL,移入裝有4.5 mL 無菌水的試管中,配製成103 倍稀釋液。 用同樣的方法可製成稀釋倍數為104、105、106 的系列稀釋菌液 (圖1-3-2)。 圖 移液時,要將移液管插入液面,吹吸3 次,每次吸上的液面要高 於前一次,讓菌液混合均勻並減少稀釋中的誤差。每配一個稀釋度要 換用一支移液管。 2.取樣及倒平板 將無菌培養皿編號,依次為104、105、106,每一號碼設置三個 重復。 用無菌移液管三支,分別吸取稀釋倍數為104、105、106的土壤稀釋 液各0.2 mL,注入到相應編號的培養皿中(每個稀釋倍數各三個培養皿)。 將已滅菌牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基溶化,待冷卻至45~50 ℃左 右,傾入到無菌培養皿中,每皿約15 mL,輕輕轉動培養皿,使土壤 稀釋液與培養基混合均勻。 3.培養 將上述接種好的平板培養基冷卻後,倒置放入28~30 ℃的恆溫 培養箱中培養24~36 h,直至長出菌落為止。 4. 觀察記錄 將實驗中得到的菌落數填入表1-3-1。 結果分析 1.選取具有合適菌落數的稀釋倍數並計數。 在計算結果時,從接種的3 個稀釋度中選擇一個合適稀釋倍數, 統計出菌落數(圖1-3-3)。選擇的原則是: 過 (1) 細菌、放線菌、酵母菌以每個培養皿內有30~300 個菌落為 宜。黴菌以每個培養皿內有10~100 個菌落為宜。 (2) 同一稀釋倍數各個重復的菌落數相差不太懸殊。 2.將統計出的菌落數按下列公式計算,得出每克樣品菌數。 每克土壤樣品菌數= 某稀釋倍數的菌落平均數×稀釋倍數
『伍』 微生物計數方法有哪些
測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種:
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積上)的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目:將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.
『陸』 生物實驗中常用的數據統計方法
具體要看統計什麼樣的數據了。。。
一般的就是分類統計,把不同「質量」的數據統計在一起,比較,得出規律。例如孟德爾那個 統計。
或者平均值法,用於統計數量性狀。例如觀察XX因素對「葉片生張的影響」啦,就統計在一個因素下全部植株的葉片數,算個平均值了。。。這個就是減小誤差了。
還可以進行χ檢驗,但這些高中都用不到。
『柒』 請教 誰知道高中生物里的一些計數法啊
顯微計數法:利用血細胞計數板,滴取樣夜後蓋上蓋玻片,在顯微鏡下選小格計數.
樣方法(針對植物等移動能力力弱的生物)
標志重捕法(活動能力強的生物)
『捌』 求高中生物涉及到的計數方法 像標識重捕法 樣方法 顯微計數法什麼之類的 謝謝各位了
1-標志重捕發(多用於活動范圍大的動物)
2-樣方法(植物密度)
3-取樣器取樣法(土壤中小動物,調查土壤中物種豐富度的方法)
4-稀釋塗布平板法(培養菌落)
5-顯微計數法
6-紅細胞板計數法
第5和6方法在高考范圍不常考
『玖』 高中生物的調查方法 統計方法 計數方法 取樣方法分別有哪些
1、取樣器取樣法是用來調查土壤小動物的種類時的取樣方法;
2、目測估計法和記名統計法 是調查土壤小動物的時候 具體計數的方法.一個准確一個模糊;
3、顯微計數法 是在顯微鏡下觀察並計算某種微生物的數量的方法;
4、稀釋塗布平板法是用稀釋後 在培養基上形成 菌落的方法來計算 細菌等微生物的數量的方法。
『拾』 生物學的計數方法
生物學計數方法有很多啊,你問的是哪一類的計數方法?
標志重捕法?樣方法?