常用的母種分離方法有

㈠ 菌種鑒定常用的分離方法有哪些

菌種質量檢測的目標包括菌絲形態、菌落特徵以及子實體形態等方面。質量檢測常用方法如下：

（1）建立標準的培養和觀察方法

對於一個栽培品種各菌種的質量檢測，實際上是以該品種典型的生物學特性（包括形態特徵、生理生態特性、栽培習性）為參照標准進行比較，以檢驗菌種是否存在品種退化、菌種老化、病菌侵染、雜菌污染和品種混雜等質量問題。同時，菌種質量檢測不僅要考慮從哪些方面來評價一個菌種的質量優劣，也要考慮用怎樣的標准方法對菌種質量進行評價的問題。因為一定的結果來源於一定的方法和一定的條件。方法和條件不同，結果就失去了可比性，也就無法鑒別，因此，需要建立標准。這些標准包括：培養基、培養條件（溫度、濕度、pH、光照等）、菌種的菌齡等。

（2）連續觀察

在菌種生長過程中，要連續觀察，一切不正常的現象只有在生長過程中才能表現出來。而當菌種長滿培養基表面後，其不正常現象往往會被菌種的過齡而掩蓋。

（3）宏觀檢查

對食用菌母種、原種及栽培種的宏觀檢查要根據其培養特徵來進行（參見前述有關內容），這是菌種生產者及使用者普遍使用的方法，簡單易行，但需要有多年的從業經驗與技術沉澱。如被檢菌種表現出菌落生長速度不一致、氣生菌絲變稀疏或出現扇變菌落、菌落上過早出現色素、或不同特徵的菌落混雜共存、或菌落上出現黑褐色、青灰色、黃褐色或紅色的孢子堆，均可以確定該菌種存在質量問題。優質菌種外觀菌絲潔白、密集粗壯，生長速度一致，齊發並進。

在生產實踐中，廣大菇農和專業工作人員總結出「純、正、壯、潤、香」的質量檢查方法。這種應用感官識別菌種優劣，是經驗的總結，能大致、快速地鑒定出菌種的優劣。具體方法是：

「純」指菌種的純度高，無雜菌感染，無斑塊、無抑制線，無「退菌」、「斷菌」現象等。

「正」指菌絲無異常，具有親本正宗的特徵，如菌絲純白、有光澤，生長整齊，連結成塊，具彈性等。

「壯」指菌絲發育粗壯，長勢旺盛，分枝多而密，在培養基上恢復、定植、蔓延速度快。

「潤」指菌種含水量適中，基質濕潤，與瓶壁緊貼，瓶頸略有水珠，無干縮、鬆散現象。

「香」指具該品種特有的香味，無霉變、腥臭、酸敗氣味。

通過檢測各種食用菌菌絲生長的色澤、速度、均勻度等特徵是否正常，來判斷菌種生長是否正常、是否可用，但辨別不了是否優質高產。

（4）顯微鏡檢查

對菌絲體進行顯微觀察，可以確定菌絲粗細、分枝、隔膜、鎖狀聯合等特性是否均一，是否與該栽培品種的典型特徵一致（參見前述相關內容）。具有不同形態特徵的菌絲體存在於同一菌種體中，表明該菌種存在質量問題；如果出現菌絲體重寄生現象，常表現出不同特徵的菌絲體相互纏繞，或菌絲體中空變細，或在寄生點出現吸器等不正常現象。

鏡檢的方法是：挑取少量菌絲，置載玻片中央的水滴上，用解剖針或接種針撥散，蓋上蓋玻片，也可加碘酒或美藍等染色後進行鏡檢。正常的菌絲一般透明、分枝狀，有橫隔和明顯的鎖狀聯合；異宗結合的食用菌，如僅有單核菌絲，不具結實性，不宜作菌種用；雙核菌絲中，鎖狀聯合多而密，則結菇力強，一般可認為是好菌種。如：

①雙孢菇 觀察雙孢菇單孢子萌發後的菌絲生長形態。凡菌絲潔白、健壯，保存時間較長時菌絲顏色不變，較耐28℃以上氣溫，生長在基質上平貼培養基表面，氣生菌絲不多的，為同化能力較強，產量較高的菌株。相反，菌絲生長初期好，很快變黃變稀，如蜘蛛絲一樣，長出培養基表面菌絲較多的菌株產量較低。

②香菇 觀察香菇的雙核菌絲，在斜面培養基上生長速度達到1.2厘米/天以上的，菌絲不十分粗壯和潔白，鎖狀連合頻繁，鎖狀連合在菌絲間相距較近，且在觀察面上分布均勻，一般均是高產和抗雜能力較強的菌株。香菇出菇的密度與鎖狀連合有一定關系。

③草菇 觀察草菇菌絲，發現菌絲分枝角度大的，出菇率高，產量高。菌絲分枝角度小、平行排列的，產量低。

各種食用菌的菌絲生長是否正常、是否可用，一般都以色澤、速度、均勻度等特徵加以檢測，但這並不能說明其是否優質高產。

（5）拮抗試驗

也稱對峙反應。同一種食用菌，經分離或雜交，將選育出許多不同的菌株，這些菌株的菌絲在形態上很難區別。如不同編號的香菇菌種，都是白色絨毛狀菌絲，鏡檢時均具有鎖狀聯合等。在當前菌種管理工作尚不十分健全的情況下，「同名異種」、「同種異名」的現象普遍發生，要識別異同，可採用「拮抗試驗」加以區別。具體方法是：

用1支20毫米×200毫米的無底試管，中央部位裝入長 5～7厘米的木屑麩糠培養基，兩端壓平並蓋棉塞，滅菌後，兩端各接入兩株受檢的菌種 1小塊，25℃左右條件下培養，當兩端菌絲往中央生長並相互接觸後，把試管移至20℃、約300勒克斯的漫射光下繼續培養，觀察菌絲接觸區有無對峙反應。若無褐色的帶線出現，表示兩個受檢菌株的基因極相似或相同，是相同的菌株，僅編號不同，即同種異名。如果受檢菌株間形成帶線，則表示是不同的菌株。

用平板進行拮抗試驗測試，方法是在無菌的PDA培養基平板上各接入2個或多個被檢菌株的菌種，在上述條件下培養，觀察菌絲相接觸部分有無帶線，以區別相同或不同的菌株。也可用菌種瓶（袋）進行拮抗測試（圖2-11）。

圖2-11 拮抗現象

（6）菌絲長速測定

在適宜的條件下，若菌絲生長迅速、粗壯有力、濃密整齊，一般為優質菌種。若菌絲生長緩慢、中斷或長速極快、稀疏無力、參差不齊和易枯黃萎縮，則為不良菌種。菌絲生長速度測定，可在PDA平板中心接種培養，測量菌落兩個直交直徑，取其平均值。同理，還可在原種、栽培種瓶（袋）壁上劃線測定。

（7）菌絲生長量測定

將等面積的菌苔接入無菌的液體培養基內，在相同的條件下，進行搖床振動培養，經過一定時間後，過濾收集菌絲，反復沖洗干凈後置容器內，80～100℃烘箱中烘乾至恆重後稱重。凡菌絲增殖快、重量重的為優質菌株，而增殖慢、重量輕的為不良菌株。

（8）耐高溫測定

以雙孢菇為例，把菌種置於20～22℃下培養，待菌絲長到1/2試管斜面時，每一菌株取出2～3支試管，置於35℃溫度下，經24小時作抗熱性試驗，然後放到22～23℃下培養，觀察菌絲恢復情況。若菌絲恢復萌發快，仍健壯、旺盛生長，則表明該菌株具有耐較高溫的優良性狀；如果菌絲生長緩慢，出現發黃倒伏，萎縮無力，則為不良菌株。

（9）均一性測定

將母種接種於標准培養基的平板上，並置於標準的環境條件下，每批做30～50個重復，進行長勢和長速的連續觀察記錄。均一性好的品種，每個重復之間長勢和長速幾乎沒有肉眼可見的差異。如果長勢和長速不一，則表明原始的母種的遺傳均一性不良，不宜作生產用種。

（10）純度測定

菌種純度高低是鑒定菌種質量好壞的關鍵環節。優質菌種要求同一管、瓶或袋內只含有所需要的菌種菌絲體，而不能含有其他種類的雜菌。這里所說的雜菌包括細菌、放線菌、酵母菌和各種黴菌，以及含有兩種食用菌菌絲體或同一種食用菌的兩個品種菌絲。凡是被雜菌污染的菌種都是不純菌種，必須予以淘汰。在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察，若有氣泡和菌膜發生，並具酸敗味，說明菌種不純，混有雜菌；如果無上述現象則菌種純正無雜。

（11）長勢測定

菌絲長勢包括菌絲生長的狀態和速度。凡是菌絲生長迅速、整齊濃密、健壯有力的菌種為優良菌種。如果菌絲生長緩慢，或長速特快、稀疏無力、參差不齊、易於衰老，則表明是劣質菌種。在鑒別菌絲長勢時，必須注意，在不同培養基上、不同培養條件下，同一種食用菌菌絲的長勢不同，因此，判斷食用菌的菌種長勢，應採用相同的培養基，這樣，結果就可靠一些。在外界環境條件相同的情況下，菌絲生長旺盛、生長量多、生長速度快的要好於菌絲生長弱、生長量少、生長速度慢的菌種。還有一種方法是在三角瓶內裝入淺層液體培養基，滅菌後接入經搗散的菌種，25℃條件下培養，約1周觀察浮在液面的菌種。如果菌絲向旁邊迅速生長、健壯有力、邊緣整齊，且不斷增厚，說明該菌株生長勢強；若表面生長慢、稀疏、菌絲層薄，說明長勢弱，不宜用於生產。

（12）抗霉性測定

以木耳為例：制備平板，在平板的一邊分別接入不同的木耳菌株，每一菌株3個重復，在26～28℃下培養。待木耳菌絲長到平板一半左右時，在平板的另一邊接上木黴菌絲，繼續培養。之後注意觀察木黴菌絲與木耳菌絲的交界處，出現拮抗線的表示木耳菌株抗霉能力強，木黴菌絲無法長過去，為抗霉能力強的菌株。如果木黴菌絲很快蓋過木耳菌絲，說明這個木耳菌株的抗霉能力差或沒有抗霉力。

（13）出菇試驗

對引進或分離的同一品種的若干菌株進行出菇對比試驗，必須是在各級菌種的培養基成分、培養溫度、培養時間及栽培條件基本一致的情況下進行。出菇試驗可按菇類的常規栽培方法進行，數量可少些。為使試驗准確，每一菌株設3～4個重復，以避免試驗的偶然性。在位置排放上盡可能按菌名拉丁文排列，以相同的措施管理，在管理過程中對環境因子的變化、管理措施及生長歷程、品種本身性狀等要詳細全面記錄。以香菇為例記載內容如下：

①母種菌絲生長情況，如菌絲濃淡、生長快慢、菌苔韌性等。

②原種、栽培種中菌絲生長情況，如菌絲萌動、吃料、生長快慢；菌種表面有無菌皮或菌皮厚薄，白色顆粒狀物有無或多少；培養基轉色情況等。

③栽培階段應記載：菇木轉色快慢、顏色深淺；出菇快慢、菇生長密度；子實體經濟性狀，包括菇的大小、厚度、色澤、圓整程度、菌柄長度、粗細等；轉潮快慢；對水分的敏感程度；產量及產量分布；出口菇比例等。

通過對記載資料分析，選出綜合性狀符合要求的菌株，供大面積生產或出售。

出菇試驗因季節推遲或其他原因，可採用一種較簡單的方法來彌補，即直接將接有各菌株並已發好菌的瓶（袋）裝菌種，小心地敲破瓶頸或打開塑料袋口，使培養料外露（如果是雙孢菇，則要覆土調好土粒的濕度），置最適宜的溫、濕度條件下進行出菇（耳）管理，觀察記載各項指標，最後進行評比。但這種方法的結果只能提供參考。

（14）栽培指標

採用一定的栽培規模，通過不同地區、不同原料、不同栽培方式，進行多次反復栽培觀察，詳細記錄、評比後，具有優質、高產、高抗、高效和遺傳性、穩定性強的菌株，才是優質和可推廣的品種。其鑒定的內容、方法和指標有：

①吃料能力鑒定 將菌種接入最佳配方的原種培養料中，置適宜的溫、濕度條件下培養，1周後觀察種菇（耳）菌絲的生長情況。如果菌種塊能很快萌發，並迅速向四周和培養料中生長伸展，則說明該品種的吃料能力強；反之，菌種塊萌發後生長緩慢，遲遲不向四周的料層深處伸展，則表明該品種對培養料的適應能力差。對菌種吃料能力的測定，不僅用於對菌種本身的考核，同時還可以作為對培養料選擇的一種手段。

②成活率 將菌種接在適宜的培養基上，若菌絲能很快恢復、定植和蔓延生長，成活率很高，是質量好的菌種；反之，接種後恢復慢，成活率不高是質量差的菌種。

③出菇快慢 一般說，高溫型的出菇快，低溫型的出菇慢，中溫型的介於兩者之間。而以菇的質量來說，高溫型的質量差，低溫型的質量好。但同一溫型食用菌品種的不同菌株，其菌種接種後若菌絲分解培養料能力強，培養前後培養料失重大，出菇快而多，總產高，即是好菌種；否則為劣質菌種。

④菇峰間隔 在一個生產周期中，子實體發生可分數潮次，產菇最多時稱菇峰，最低時稱菇谷，每個菇峰和菇谷構成一潮菇。凡菇潮多，間隔時間短，說明菌絲分解能力強，供子實體發生的養分積累多，因此轉潮快，是好的菌種；反之，菇潮間隔時間長，或不明顯，零星出菇，產量低，即為劣質菌種。

⑤乾燥率 鮮菇經干制後乾燥率高，說明轉化率高，子實體含水分低，為優質菌種。

⑥生物學效率 生物學效率，指每100千克乾料可產多少千克鮮菇。生物學效率高，則菌種質量好，反之為劣質菌種。

（15）經濟指標

高產不一定高效、豐產不等於豐收，要佔領市場，獲得較高利潤，還必須具備商品的要求，如產品的色、香、味、形，檔次，上市時間，貨架期和保質期等。凡是鮮菇上市時間早，產量高、品質好、檔次高、含水量低，不易變色、變質、破碎、失重，無農葯殘毒、殘臭，符合食品衛生標准和得到的利潤高等，均表示經濟指標高，則為優質菌株；而上市有效時間短，易變色、變味、變質，含水量高，失水嚴重，易破碎，利潤低的菌種均為劣質菌種。如香菇以大小適中、肉厚、色深、邊緣內卷，柄短細為優良；雙孢菇以色白、子實體大小適中，菌柄短，不易開傘等為優良；銀耳以色白、開片好、蒂頭小、松泡率高為優良等。

㈡ 平菇的組織培養分離母種的方法是怎麼的求大神指教，謝謝

如果你做不到很好的無菌條件的情況下，組織分離是很難成功的，即使分離出了母種，也可能不是純菌種，對你後續使用有可能造成很大的損失。平菇的組織分離是選取生長旺盛的部位組織塊轉接到最適宜的培養基上，經一段時間的最適溫度培養，得到的菌種即為母種試管。
建議：組織分離技術雖然容易操作，但分離過程中很多關鍵點的控制尤為重要，母種最好是由專業的技術人員製作或由研究院所購買，以避免造成不必要的經濟損失。

㈢ 常用的分離技術有哪兩類各包括哪些這些常用的分離技術的基本原理是什麼

分離方法開始主要用於化工行業中化工產品的分離，但是隨著生物工程技術下游技術的不斷發展，結合傳統的化工分離方法，新的高效的分離方法被人們高度重視起來。
常用到得分離方法：鹽析、萃取分離法（包括溶劑萃取、膠團萃取、雙水相萃取、超臨界流體萃取、固相萃取、固相微萃取、溶劑微萃取等）、醫學|教育|網搜集整理膜分離方法（包括滲析、微濾、超濾、納濾、反滲透、電滲析、膜萃取、膜吸收、滲透汽化、膜蒸餾等）、層析方法（離子交換層析、尺寸排阻層析、疏水層析、固定離子交換層析IMAC、親和層析等）。在這些方法中膜分離的方法和層析技術越來越受到人們的重視。
基本原理：
1、雙水相萃取的原理：
   雙水相萃取與水 -有機相萃取的原理相似 ,都是依據物質在兩相間的選擇性分配 ,但萃取體系的性質不同 。當物質進入雙水相體系後 ,由於表面性質、電荷作用和各種力 (如憎水鍵、氫鍵和離子鍵等 )的存在和環境因素的影響 ,使其在上、下相中的濃度不同 .{主要:靜電作用和疏水作用}
2、差速離心法原理：
   採用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進行離心，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的離心時間下分批離心的方法，稱為差速離心法。當以一定離心力在一定的離心時間內進行離心時，在離心管底部就會得到和*重顆粒的沉澱，分出的上清液在加上加速轉速下再進行離心，又得到第二部分較大、較重顆粒的「沉澱」及含小和輕顆粒「上清液」，如此，多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較好分開，這時所得沉澱是不純的，需經再懸浮和再離心（2-3次），才能得到較純顆粒。
3、速率-區帶離心原理：
   不同顆粒之間存在沉降系數差時，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定離心速度沉降，在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。介質梯度應預先形成，介質的密度要小於所有樣品顆粒的密度。
4、等密度梯度離心原理:
   當不同顆粒存在浮力密度差時，在離心力場下，在密度梯度介質中，顆粒或向下沉降，或向上浮起，一直移動到與他們各自的密度恰好相等的位置上形成區帶，從而使不同浮力密度的物質得到分離。

㈣ 平菇菌種（母種）如何使用

母鍾使用方法：

母種培養基配製；

母種分離；

母種擴大培養。

㈤ 紅菇的母種分離

Fries(1987）曾指出，紅菇屬孢子在一般條件下，包括在能夠組織分離紅菇菌絲的培養基上均不能萌發，並揭示能引發孢子萌發的活化因子有三類，外源微生物中酵母（尤其是紅酵母）、孢子自體菌絲體和宿主植物根系浸出物。劉斌曾從紅菇的分離及其培養特徵觀察發現，正紅菇菌絲可用PDA加富培養基，蔡小玲等開展野生紅菇的分離培養試驗，PDA+腐殖土培養基，通過正紅菇子實體組織分離技術獲得，並用該培養基擴大培養和菌種保存。隨著紅菇馴化研發技術的深入，目前紅菇純菌種分離技術已被人們掌握。
(1)適用培養基 這里介紹兩種配方。
配方1：馬鈴薯250克（取其提取液800毫升），紅菇產地腐殖土300克（加水400毫升，煮沸20分鍾，冷卻後取澄清液200毫升），白糖25克，維生素B,10毫克，瓊脂23克。按常規調料煮沸，裝管、滅菌後製成斜面。
配方2：鮮松針100克（水煮過濾），麥芽汁（即84毫升水十16克糖）100毫升，磷酸二氫鉀0.2%，硫酸鎂0.15%，葡萄糖2%，維生素B,10毫克，瓊脂2%，補水至1000毫升，pH5-5.5，滅菌後製成斜面。
(2)種菇分離部位 紅菇菌肉的生殖菌絲是由球狀胞（孢囊狀菌絲）組成，埋在管狀聯絡菌絲的基質中，再生能力較低，如採用以菌蓋的菌肉作為分離材料成功率低。因此紅菇分離部位應選取菌柄中間的組織塊。
組織分離法屬無性繁殖法。它是利用紅菇菌柄的組織塊，在適宜的培養基和生長條件下分離、培育純菌絲的一種簡便方法。具有較強的再生能力和保持親本種性的能力。這種分離法操作容易，不易發生變異。但如果菇體染病，用此法得到的菌絲容易退化；若種菇太大、太老，此法得到的菌絲成活率也很低。
(3）分離操作技術規程
①滅菌消毒 切去菇體基部的雜質，放入0.1%升汞溶液中浸泡1-2分鍾，取出用無菌水沖洗2-3次，再用無菌紗布擦乾。
②切取種塊 將經過處理的種菇及分離時用的器具，同時放人接種箱內，取一玻璃器皿，將3-5克高錳酸鉀放人其中，再倒人8-10毫升甲醛，熏蒸30分鍾後進行操作。或用氣霧消毒劑滅菌。然後用手術刀把種菇縱剖為兩半，在菌柄正中用刀切成3毫米見方的組織塊，用接種針挑取，並迅速放人試管中，立即塞好棉塞。
③接種培養 將接人組織塊的試管，置於24℃條件下恆溫培養3天，菌絲開始萌發，經多次提純，即可獲得紅菇母種。紅菇菌絲長速較慢，接種10天後日平均長速為0.67厘米，在PDA培養基上菌絲外觀白色至黃色，氣生菌絲稀少，出現黃棕色素。10天後通過篩選，挑出菌絲發育快的試管繼續培養，對污染有雜菌和長勢弱的淘汰，經過20-25天的培養，菌絲才長滿試管。

㈥ 什麼是食用菌母種、原種和栽培種

母種:從蘑菇上直接分離得到的菌種(試管種,用培養基培養)。

原種:由母種擴大繁殖得到的菌種(瓶裝種,用培養料培養,一般多拿罐頭瓶或者小袋子培養)。

栽培種:由原種擴大繁殖得到的菌種(袋裝種,用培養料培養,一般都拿蘑菇袋子培養)。

母種用來保存菌種,原種用來擴大菌種,栽培種用來生產的。

組織分離法組織分離法是通過切取菌索、子實體、菌核的新鮮幼嫩的組織進行分離，以獲取純菌絲的方法，是最常用的菌種分離法之一 。

子實體、菌索等實際就是雙核菌絲的紐結物，具有很強的再生能力。因分離時所 選擇的材料不同 ，該方法又可分為菌索組織分離法、子實體組織分離法及菌核組織分離法。

在實踐中，子實體組 織分離法是最有效、最常用的方法。但對於膠質菌，由於其子實體中所含的菌絲量比較低 ，如黑木耳、銀耳等，利用組織分離培養難度較大。

組織分離屬於無性繁殖的范疇，能保持原菌株的特性，遺傳穩定變異小，不僅適於孢子不易收集或萌發的食用菌，也適於穩定優良品種的遺傳性。

孢子分離法 孢子分離法，是採取子囊果或子實體中成熟的子囊孢子或有性孢子萌發成純菌絲，再進一步培養成菌種的方法。

由此法可以獲得強活性、短菌齡的菌絲，該方法的另外一個優點是分離得到的有性孢子兼有雙親的遺傳特性，可用於雜交育種和選育新種中。

只是孢子間不僅存在個體差異，還存在較普遍的自然分化現象，出現的變異較大，必須經過出菇試驗後才能用於生產中團。對於產孢子的真菌，一般其分離法多採用孢子分離法。

以上內容參考：網路-食用菌菌種

㈦ 常用的分離方法有哪些

萃取

是用物理方法進行分離

要求:一,所使用的兩種溶劑必須是不互容的
二,該溶質(就是你要萃取的物質)在兩種溶劑中的溶解度大小必須有差別

分液

也是一種物理方法

是利用兩種溶液不互容,將兩種溶液放在一起是有分層
然後,用分液漏斗進行分液.

分餾
是利用各種物質的沸點不同,在不同的溫度是把不同物質蒸發出來
比如,在進行石油加工是就是用分餾的方法進行的

蒸餾
是在溶液加熱到沸點時 溶液汽化
再將蒸汽冷卻,從而得到蒸餾後的液體
經過蒸餾後的液體是有一定純度的純凈物

蒸發
利用蒸發溶劑使晶體析出的一種方法
比如蒸發硫酸銅溶液
就是讓硫酸銅溶液中的溶劑減少
從而讓硫酸銅晶體析出

㈧ 常用的分離方法有哪幾種

1、分液：分離兩種不互溶的液體，如分離油和水。

2、萃取：加入適當溶劑把混合物中某成分溶解及分離，如庚烷、取水溶液中的碘。

3、蒸餾：溶液中分離溶劑和非揮發性溶質，如海水中取得純水。

4、分餾：離兩種互溶而沸點差別較大的液體，如液態空氣中分離氧和氮、石油的精煉。

5、升華：離兩種固體,其中只有一種可以升華，如分離碘和沙。

6、吸附：去混合物中的氣態或固態雜質，活性炭除去黃糖中的有色雜質。

(8)常用的母種分離方法有擴展閱讀：

分離的原則

1、引入的試劑一般只跟雜質反應。

2、後續的試劑應除去過量的前加的試劑。

3、不能引進新物質。

4、雜質與試劑反應生成的物質易與被提純物質分離。

5、過程簡單，現象明顯，純度要高。

6、盡可能將雜質轉化為所需物質。

7、除去多種雜質時要考慮加入試劑的合理順序。

8、如遇到極易溶於水的氣體時，要防止倒吸現象的發生。

㈨ 楊樹菇菌種分離的方法有哪些

楊樹菇和大多數木生型菇菌一樣，其純菌種可用孢子分離法、組織分離法或菇木分離法獲得。通常以交叉使用前兩種分離方法為主。前面已經說過，我國楊樹菇的單孢子菌株具有結實能力，因此在進行孢子分離時，可採用單孢分離法獲得純菌種，經過出菇鑒定後，挑選優良菌株作母種使用。或在生產上使用的優良菌株中，選取生長健壯、形態正常、無病蟲害的幼嫩子實體作為分離材料，按照組織分離的無菌操作程序分離接種。以下簡要介紹單孢分離法和出菇鑒定要求。

1.單孢分離法

（1）單孢稀釋分離法 將選擇好的種菇置於孢子彈射分離裝置內進行孢子彈射，收集孢子（彈射分離方法見黃傘有關部分）。然後對收集的孢子用無菌水進行稀釋分離。將稀釋後的孢子懸浮液滴在載玻片上，放在低倍鏡下進行檢查，至每滴中有4～5個孢子為合適。接種時，用注射器吸取孢子懸浮液，將試管棉塞拔松，沿試管壁插入注射器針頭，每支試管注入1～2滴孢子懸浮液，轉動試管，使孢子均勻地分布在培養基表面，靜置1～2小時後，移入溫箱培養。

也可將已稀釋的孢子懸浮液注入培養皿內，每個培養皿加1～2滴即可，然後倒入已溶化並冷卻到45℃的瓊脂培養基，厚0.5厘米，在工作台上左右旋轉混勻，靜置1～2小時，倒轉培養。孢子萌發後，將單孢菌落連同少許培養基移接到試管內培養。

（2）單孢定位切割分離法 浙江省農業科學院園藝研究所范雷法等（1996）曾介紹一種自製簡易定位切割器，能快速、准確的分離單孢菌落。定位切割器製作方法如下：選用普通圓珠筆芯塑料空管一小段，長2～3厘米，用刀片將空管一端削成薄片，另一端用火熔化壓成平頭，用一隻乳膠指套，在其中間打一孔，插上上述做好的塑料平頭，將其固定在40或100倍顯微鏡的鏡頭上，使其緊密接觸。

切割器的尖頭部分，要削得薄、長而光滑，使之能切割完好，為粘連切割圈外的培養基；切割器與物鏡固定要緊，且位置在正中，使物鏡與筆芯空管處於同一軸心上。做成之後用以下方法進行校正：在載玻片或培養皿上倒入一薄層（厚2～3毫米）水樣瓊脂培養基，凝固後，用帶有定位器的物鏡鏡頭，輕輕轉動上下調節器，使定位切割器下降，並切割到培養基的2/3處，勿切割到底，以免損壞定位器和瓊脂培養基的表面；再轉動調節器，使定位切割器上升，用低倍鏡觀察定位切割器切割後的培養基塊是否在視野正中，如果不在正中，則應對乳膠指套的相對位置進行調節，至適合要求。如顯微鏡是以載物台作為上下調節的，也可用同樣方法校正。一般普通筆芯內徑在2毫米左右，約是低倍鏡的2倍左右視野。定位切割器使用前浸泡在酒精內消毒備用。

按常規方法將孢子稀釋後製成PDA瓊脂平板，在低倍鏡下檢查，若確認為單孢，則可改用定位切割器進行切割，按上述方法在同一培養皿內將單孢切割完畢。再將金屬針打扁，使尖端平而稍彎曲，用來在培養皿內挑取切割塊，要盡量避免碰到圈外培養基，然後移置在斜面上培養。

（3）試管稀釋點樣法 用滅菌接種針在培養皿內蘸取少量擔孢子，或用接種針直接從菌褶上輕輕刮取少量孢子，洗入試管內的無菌水中，充分搖動，使之均勻分散。然後用滅菌接種針蘸取1滴孢子液，放在載玻片上，用低倍鏡檢查，如果每滴水中仍有3～4個孢子，應繼續稀釋，至每滴中含1～2個孢子為止。將水滴滴在培養皿蓋的邊緣2厘米處，再用低倍鏡檢查，將只有1個擔孢子的水滴用蠟筆在反面作標記，並加1滴營養液。為防止培養液過快蒸發，在培養皿內加少許無菌水，用紙包好進行培養。第二天，孢子萌發，經鏡檢，確認為只有1個芽管，可以在水滴上加一小片瓊脂塊，以便孢子萌發後繼續生長。2～4天後，將菌絲連同瓊脂塊移到試管內培養。

（4）毛細管切割法 將不同稀釋度的孢子懸浮液滴入培養皿的瓊脂平板上，每個培養皿放1～1.5毫升，停留幾分鍾後，倒去多餘的水，進行保溫培養。孢子發芽後，在低倍鏡下用毛細管割取只有1個芽管的單孢子，移接到瓊脂斜面上培養。

2.多孢分離法 按常規方法准備好瓊脂平板培養基，用滅菌紗布或濾紙吸去皿蓋反面的冷凝水。從楊樹菇子實體上剪下一小塊菌蓋，菌蓋下約有6～7片菌褶，再將菌褶的前端和基部剪去，留下的菌褶長約1.5～2厘米，再蓋到培養皿上，放到溫室培養。6小時後，將培養皿蓋按順時針方向移動若干度（不得小於30度），以後每隔3～4小時按同樣方向移動若干度，最後回復到原來位置。然後，移去分離材料，將培養皿放在適溫下培養，在平板上會出現不同密度的菌落，挑選分散性較好，且又連接成片的菌落，轉入試管內培養。用這種方法，能及時發現混入傘菌孢子內的雜菌。或將一小片菌褶貼附在試管壁上，使孢子直接散落在斜面上。

3.組織分離法 選取肉厚、朵大、無病蟲害、六七分成熟的子實體作種菇用，已開始彈射孢子的不可作種菇。將選好的種菇用自來水沖洗數次，再用無菌水沖洗數次，然後用無菌紗布或濾紙吸干水分。在接種箱內按無菌操作方法進行組織分離。用手將種菇蓋邊輕輕撕開，手指不要接觸撕開後露出的菌肉部門。將解剖刀在火焰上燒灼滅菌，待冷卻後，在菌蓋和菌柄或菌蓋與幼嫩菌褶連接處挖取一小塊（約綠豆粒大小），接種在斜面上。在切取組織塊時，不要挖取接近菌蓋邊緣的部分，以減少雜菌污染。接種時，將組織塊准確地接種在斜面的中央，切勿在斜面上到處移動，這樣便於及時鑒別組織塊是否有細菌污染，或當污染出現後便於進行純化分離。接種後，將斜面置於23～25℃下培養，若組織塊上有白色菌絲萌發，並向培養基上蔓延，1～2天後，及時用接種針挑取少量帶有菌絲的培養基，接種到空白斜面上進行純化培養，即可獲得楊樹菇母種。

組織分離時，組織塊附近若出現黴菌污染，因黴菌絲與楊樹菇菌絲生長速度相近或更快，故予淘汰。如果組織塊附近出現灰白色或黃白色黏狀物或水漬樣物，則是細菌、酵母菌污染的表現。這時可降低培養溫度，抑制污染菌落的生長，當楊樹菇菌絲的菌落長到細菌（酵母）菌落之外時，則可採用切割菌落前端的方法進行純化，也可得到楊樹菇的純培養物。當菌絲長滿斜面時，檢查培養基的背面，若在楊樹菇菌絲的下面出現黃褐色的斑塊，則是被菌絲覆蓋的細菌（酵母）菌落，可用切割菌絲生長前端的方法再次進行純化培養，有時這種純化分離要連續進行多次才能獲得純菌種。這種方法只是一種輔助措施，只有當組織分離的絕大部分斜面都被污染時，才可以採用這種純化分離法獲得母種。

4.出菇鑒定 為了檢驗所分離單孢子菌株是否具有結實能力，出菇特性以及產量水平，對分離物要進行出菇鑒定。此工作可分別在液體培養基和固體培養基上進行。

（1）液體出菇 鑒於楊樹菇易於在液體培養基中生長，出菇試驗可採用液體培養。培養液的組成為：玉米粉25克，豆餅粉10克，葡萄糖10克，硫酸鎂1克，磷酸二氧鉀2克，蒸餾水（或自來水）1000毫升。將上述培養液分裝於1000毫升三角瓶中，每瓶裝量200～250毫升，按常規進行高壓滅菌備用。

接種後於25℃靜置培養，約15天左右，在培養液表面陸續開始分化原基，並形成正常子實體。在25℃有散射光條件下，絕大多數單孢菌株在15～20天均能分化原始，但出菇時間的早晚與產量沒有正相關性。出菇早雖然是一個良好的生產性狀，但在出菇較晚的菌株中，也可發現出菇密度高，菇潮集中，產量高的優良菌株，這些考核要在固體培養基上進行。

採用液體培養進行出菇試驗，不但方法簡單，便於觀察，且便於比較在同一單位時間內，不同菌株間的生物量（將濾取菌絲用水淋洗干凈，與子實體分別置於60℃烘乾到恆重，用電子天平稱量）。另一特點是在短時間內即可達到出菇試驗的目的。

（2）袋式栽培 袋栽培養料組成為：闊葉樹木屑37%，棉籽殼37%，麥麩20%，玉米粉5%，石膏1%，調含水量為65%。每袋裝料300克，於稱量後分裝於塑料袋中，按常規方法進行高壓或常壓滅菌備用。

接種後在25℃培養，待菌絲滿袋後，將菌袋移至供出菇試驗的栽培室內，每個供試菌株一般不得少於20袋，隨機排列在床架上，並在同一環境條件下進行栽培管理。待原基分化後，脫去塑料袋，隨後進行水分、光照和通風管理。比較其生產性狀和產量。

選擇原基分化早，菇叢密，菇數多，單菇粗壯，生物學效率高，抗性好的優良菌株用於生產。

㈩ 獲得灰樹花的母種有幾種方法

灰樹花的母種，多數都是通過組織分離方法獲取。母種性能的好壞，對灰樹花生產影響非常重要，所以必須進行認真細致的挑選，並且通過試種，成功之後方可進行大面積推廣和使用。選擇有3種基本方法：（1）對生產、供應母種的單位或個人進行資格考察。

（2）查清楚母種的生產日期、品種、溫型和地點。

（3）直接觀察試管中的生長形態特徵。

優良的母種是：試管內培養基表面均勻的長滿菌絲。菌絲潔白，如白色棉絮狀，表面不幹燥，無其他顏色和隔斷處。如有其他顏色、雜菌、表面乾燥等不良現象，則棄之不用。保存時間過長，外地引進、未通過試種的母種，最好不要使用，以免造成經濟損失。