蛋白質沉澱常用方法中不變性的

❶ 蛋白質的沉澱與變性的區別有哪些

1、性質不同

蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉澱。蛋白質的變性（denaturation），在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質的改變和生物活性的喪失，稱為蛋白質的變性。

2、結果不同

蛋白質沉澱，破壞蛋白質分子的水化作用或者減弱分子間同性相斥作用的因子，使蛋白質在水中的溶解度降低而沉降下來轉化為固體的分離方法。

蛋白質變性，蛋白質的變性不涉及一級結構的改變，蛋白質變性後，其溶解度降低、黏度增加，生物活性喪失，易被蛋白酶水解。若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素後，有些蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為復性。變性的蛋白質不一定發生沉澱，在一定條件下也可以使蛋白質不變性而沉澱（如鹽析）。

3、方法不同

蛋白質沉澱常用的方法有鹽析、等電點沉澱、有機溶劑沉澱、生物鹼試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉澱等。能使蛋白質變性的化學方法有加強酸、強鹼、重金屬鹽、尿素、丙酮等；能使蛋白質變性的物理方法有加熱(高溫)、紫外線及X射線照射、超聲波、劇烈振盪或攪拌等。

❷ 沉澱蛋白質的方法有哪些，各有和特點

等電點沉澱法和鹽析

一、等電點沉澱法

等電點沉澱法是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。

在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉澱物。

等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利於懸浮液的過濾。

二、鹽析

鹽析是指在蛋白質水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質沉澱出來的現象。中性鹽是強電解質，溶解度又大，在蛋白質溶液中，一方面與蛋白質爭奪水分子，破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜；另一方面又大量中和蛋白質顆粒上的電荷，從而使水中蛋白質顆粒積聚而沉澱析出。

向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液後，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。向某些蛋白質溶液中加入某些重金屬鹽，可以使蛋白質性質發生改變而凝聚，進而從溶液中析出，這種作用叫作變性，性質改變，是化學反應，無法復原。

把動物脂肪或植物油與氫氧化鈉按一定比例放在皂化鍋內攪拌加熱，反應後形成的高級脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物（膠體）。往鍋內加入食鹽顆粒，攪拌、靜置，使高級脂肪酸鈉與甘油、水分離，浮在液面。

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蛋白質的變性

1、物理因素包括：加熱、加壓、攪拌、振盪、紫外線照射、X射線、超聲波等

2、化學因素包括：強酸、強鹼、重金屬鹽、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。

3、在熱、酸、鹼、重金屬鹽、紫外線等作作用下，蛋白質會發生性質上的改變而凝結起來。這種凝結是不可逆的，不能再使它們恢復成原來的蛋白質．蛋白質的這種變化叫做變性。蛋白質變性之後，紫外吸收，化學活性以及粘度都會上升，變得容易水解，但溶解度會下降。

4、蛋白質變性後，就失去了原有的可溶性，也就失去了它們生理上的作用，因此蛋白質的變性凝固是個不可逆過程。

❸ 欲使蛋白質沉澱且不變性宜選用（ ）A. 加熱 B. 重金屬鹽 C. 某些酸類 D. 鹽析

選D，加熱、重金屬鹽、某些酸類都會使蛋白質變性，鹽析蛋白質會沉澱，不會變性。

❹ 蛋白質沉澱法原理

原理：蛋白質通過鹽析的辦法沉澱的原理是降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出。

蛋白質分子聚集而從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉澱。由於水化層和雙電層的存在，蛋白質溶液是一種穩定的膠體溶液。如果向蛋白質溶液中加入某種電解質，以破壞其顆粒表面的雙電層或調節溶液的pH，使其達到等電點，蛋白質顆粒因失去電荷變得不穩定而將沉澱析出。

蛋白沉澱法是毒物分析過程中對生物樣品進行前處理的一種常用方式。對於富 含蛋白質的檢材，在進行分離、提取時要將 大量干擾測定的蛋白質沉澱除去，使待測毒 物仍留存於溶液中。

操作時一般要先將檢材組織磨碎，然後再加入蛋白沉澱劑進行蛋白質沉澱，組織中的蛋白質與沉澱劑形成疏鬆的絮狀沉澱物，而毒物則留在溶液中。

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有機溶劑易使蛋白質或酶變性，常採用降低溫度的方法進行有效控制， 而且有機溶劑使用量大，溶劑的使用及回收；儲存都比較困難或 麻煩。 鹽析法：鹽析法簡單方便，可用於蛋白質抗原的粗提、丙種 球蛋白的提取、蛋白質的濃縮等。

鹽析法提純的抗原濃度不高，只用於抗原的初步純化。 金屬離子沉澱法純度高,太耗電，沉澱效果很好，容易使生物分 子變性，復合物難分解。

選澤性變性沉澱法：溶解度下降、粘度 增加、紫外線吸收增加、側鏈反應增強、對酶的作用敏感，易被 水解 （這就是為何蛋白類食品在被加熱至變性後人體對其中氨基 酸的吸收。能力增強） 等電點沉澱法無機酸會引起較大的蛋白質不可逆變性的危險等電點裝置復雜,也比較純。

蛋白質變性指在某些物理和化學因素如熱、有機溶劑、重金屬離子、生物鹼試劑等作用下，蛋白質特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。

❺ 蛋白質沉澱不變性的有哪些

蛋白質的變性與沉澱有密不可分的關系,常可以看到變性的蛋白質在溶液中沉澱,但並不是所有變性的蛋白質都會在溶液中沉澱.具體地說,變性蛋白質一般易於沉澱,但也可不變性而使蛋白質沉澱,在一定條件下,變性的蛋白質也可不發生沉澱,變性蛋白質只在等電點附近才沉澱,沉澱的變性蛋白質也不一定凝固.例如,蛋白質被強酸、強鹼變性後由於蛋白質顆粒帶著大量電荷,故仍溶於強酸或強減之中.但若將強鹼和強酸溶液的pH調節到等電點,則變性蛋白質凝集成絮狀沉澱物,若將此絮狀物加熱,則分子間相互盤纏而變成較為堅固的凝塊.
蛋白質沉澱的原理.蛋白質形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素,即顆粒表面的水化層和電荷.若無外加條件,不致互相凝集.然而除掉這兩個穩定因素(如調節溶液pH至等電點和加入脫水劑),蛋白質便容易凝集析出.如將蛋白質溶液pH調節到等電點,蛋白質分子呈等電狀態,雖然分子間同性電荷相互排斥作用消失了.但是還有水化膜起保護作用,一般不致於發生凝聚作用,如果這時再加入某種脫水劑,除去蛋白質分子的水化膜,則蛋白質分子就會互相凝聚而析出沉澱.反之,先使蛋白質脫水,然後再調節pH到等電點,同樣可使蛋白質沉澱析出.

❻ 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例求答案

沉澱可以是由蛋白質變性從而產生沉澱，也可以是由於鹽析。
蛋白質變性是指光照，熱，有機溶濟以及一些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質的空間結構被破壞，使得蛋白質喪失活性，該過程不可逆。
鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質沉澱析出，這是由於加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質又會溶解。
（一）材料的預處理及細胞破碎
分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：
1. 機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。
2. 滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3. 反復凍融法
生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
4. 超聲波法
使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。
5. 酶法如用溶菌酶破壞微生物細胞等。
(二) 蛋白質的抽提
通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。
（三）蛋白質粗製品的獲得
選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：
1. 等電點沉澱法
不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。
2. 鹽析法不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解而不變性。
3. 有機溶劑沉澱法
中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉澱蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機溶劑濃度。
（四）樣品的進一步分離純化
用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。

❼ 蛋白質沉澱了就變性了嗎用什麼方法能讓它溶解且有活性

用普通的鹽不會變性
只有加熱，重金屬鹽，強酸強鹼，各種射線才會變性
沉澱不一定變性的

❽ 為什麼說蛋白質變性不一定沉澱，而沉澱不一定變性

1、蛋白質變性是指光照，熱，有機溶濟以及一些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質的空間結構被破壞，使得蛋白質喪失活性，該過程不可逆。

2、沉澱可以是由蛋白質變性從而產生沉澱，也可以是由於鹽析。鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質沉澱析出，這是由於加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質又會溶解.。

(8)蛋白質沉澱常用方法中不變性的擴展閱讀：

一、蛋白質變性的結果：

1、生物活性喪失：

蛋白質的生物活性是指蛋白質所具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體、血紅蛋白的載氧能力等生物學功能。生物活性喪失是蛋白質變性的主要特徵。有時蛋白質的空間結構只要輕微變化即可引起生物活性的喪失。

2、某些理化性質：

蛋白質變性後理化性質發生改變，如溶解度降低而產生沉澱，因為有些原來在分子內部的疏水基團由於結構鬆散而暴露出來,分子的不對稱性增加，因此粘度增加，擴散系數降低。

3、生物化學性質

蛋白質變性後，分子結構鬆散，不能形成結晶，易被蛋白酶水解。蛋白質的變性作用主要是由於蛋白質分子內部的結構被破壞。

二、引起蛋白質變性的原因可分為物理和化學因素兩類。

1、物理因素：加熱、加壓、脫水、攪拌、振盪、紫外線照射、超聲波的作用等。

2、化學因素：強酸、強鹼、尿素、重金屬鹽、十二烷基硫酸鈉(SDS)等。

❾ 使蛋白質沉澱但不變性的方法有： A.中性鹽沉澱蛋白 B.鞣酸沉澱蛋白 C.低溫乙醇沉澱蛋白 D.重金屬鹽沉澱蛋

A和C
別的都簡單，C選項：低溫乙醇分離法是十九世紀40年代創建的一種血漿蛋白分離純化的生化技術，乙醇作為一種蛋白沉澱劑，具有許多優點：介電常數低、與水易混溶、在正常環境和工作條件下無易爆性、低分子量、化學上的相對惰性、低毒、價廉、易得和抑菌作用。至今，大規模血漿蛋白分離仍基本採用低溫乙醇分離法。