㈠ 植物體細胞雜交的第一步是去除細胞壁，分離出有活力的原生質體，目前比步驟最常用的是酶解法，也就是在溫
細胞壁的主要成分是果膠和纖維素 所以用果膠酶和纖維素酶
㈡ 簡述原生質體分離培養的主要過程解答
（1）纖維素酶 果膠酶 （2）細胞膜、細胞質、細胞核 （3）生長素 細胞分裂素 （4） B （5）植物體細胞雜交植物細胞的質壁分離和復原
㈢ 提取原生質體的方法有哪些
酶解法，植物細胞用纖維素酶和果膠酶
㈣ 酶解分離原生質體有哪些常用的方法
分離常用方法：分離原生質體時，首先要使酶制劑大量吸附到細胞壁上去。
因此，一般先將材料分離成單細胞，然後分解細胞壁。採用將酶液減壓滲入組織，或將組織切成薄片等方法，都可增加酶液與纖維素分子接觸的機會。用酶法分離原生質體可以採用以下兩種不同的方法路線。兩步法或順序法：首先用離析酶或果膠酶處理組織使胞間層降解，把細胞分開再用纖維素酶處理這些游離的細胞，使原生質體釋放出來。
一步法或同時法：即把一定量的纖維素酶、果膠酶和半纖維素酶組成混合酶溶液，將材料置於其中處理，一次即可得到分離的原生質體。因為一步法方便省力，因此很常用。
㈤ 酶解分離原生質體需要哪些植物材料
植物材料：一般來說，植物各個器官，如根、莖、花、果實、種子及愈傷細胞和懸浮細胞等都可作為分離原生質體的材料，但是，要獲得高質量的原生質體，則須選用生長旺盛、生命力強的組織作材料。材料的生理狀況是原生質體質量的決定性因素之一。
A.細胞懸浮培養物：在建立細胞懸浮培養物之前，需提前培養愈傷組織。即取用成熟種胚、未成熟胚、幼穗、花葯、胚芽鞘或幼葉等，經無菌消毒後，在培養基上，誘導愈傷組織，每隔24d轉接一次，從中選出增殖較快而且呈顆粒狀的愈傷組織，或經繼代培養一次後，轉移到液體培養基中進行懸浮培養，經過懸浮培養34個月後，懸浮培養細胞的大小變得較為一致，且細胞質變得較濃時，可用作分離原生質體。
B.葉肉細胞：利用葉片不需要殺死植株就可以分離到大量一致的原生質體，而且葉肉細胞排列鬆散，酶試劑很容易達到細胞壁，因此葉肉細胞是分離原生質體的最好材料。用葉片薄壁組織作為材料，既要考慮植株的生長環境，又要考慮葉片的年齡及其生理狀態對原生質體分離的影響。一般取生理狀態適宜的葉片，有利於原生質體的細胞再生和細胞分裂。
植物的其他器官也可用於分離原生質體，如用花粉四分體、花粉壁細胞、愈傷組織或細胞懸浮培養物等，愈傷組織或細胞懸浮培養物等應當是處於生長早期或指數生長期的，而且經驗表明採用澱粉含量低的易碎組織，分離結果往往較好。
㈥ 請分析回答下面問題：植物葉肉細胞原生質體的分離和培養主要過程可用圖解簡單表示：（1）原生質體的結構
（1）原生質體是植物細胞去除細胞壁後剩餘的部分，由細胞膜、細胞質、細胞核三部分構成．
（2）培育胚狀體需要利用植物組織培養技術；植物組織培養過程需要在無菌條件下進行，因此需要對培養基進行嚴格的滅菌；決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協同作用在組織培養過程中非常重要．
（3）將葉片的葉肉細胞培養成完整的植株體現了細胞全能性．
（4）從葉片的葉肉細胞經過脫分化形成愈傷組織，再經過再分化才能獲得胚狀體，該過程中細胞通過有絲分裂方式增殖，故選：C．
（5）決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，所以圖中需要在培養基中加入激素調整細胞分裂分化的是c、d階段；若為了獲得三七的細胞產物，則只需培養到愈傷組織；通過植物組織培養得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，通過人工薄膜包裝得到的種子，所以為了獲得三七的人工種子，則需要培養到胚狀體．
（6）將目的基因導入植物細胞可採用農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法．
故答案為：
（1）細胞膜、細胞質、細胞核
（2）植物組織培養 細胞分裂素和生長素 滅菌
（3）細胞全能性 C
（4）CD 愈傷組織 胚狀體
（5）農桿菌轉化法、基因槍法
㈦ 關於植物原生質體提取，請做過這方面實驗的高手指教~
1 黃化苗對有的植物來說只會更有利做原生質體，比如玉米。
2 酶液均要過0.45的膜， 過濾滅菌。
3 老的方法要撕下表皮，現在常用手術刀片切，要極細的長條。
4 不會，黃化苗的原生質體在顯微鏡下會成淺淺的黃色，還是能分辨出來的。
你所描述的情況有可能的原因：1 酶失活。2 葉子切得不夠細，起碼要1mm。3 我覺得你調的滲透壓有點高，一般植物0.5-0.6
給你個網址 哈佛大學 Professor shen 的lab， 做原生質體最牛的人，上面有視屏和Protocol, 希望對你有用。（一般做原生質體都是先從擬南芥開始，先練練手，在此基礎上建立感興趣植物的protocol）
http://genetics.mgh.harvard.e/sheenweb/protocols_reg.html
㈧ 原生質體分離
原生質分離：酶（纖維素酶，離析酶）
步驟：葉片表面消毒→去除表皮→葉碎片漂浮在含有酶和滲透壓穩定劑的溶液中→培育→原生質體沉到培養皿底部→除去酶溶液→將原生質體移入CPW清洗→離心→清洗基質兩次→重懸浮於培養基→除去小的個體，用血球計計數→調整到合適的密度重懸浮於培養基。
原生質體的培養：
培養基：MS＋NAA 2.0ppm＋BA 0.5ppm＋3％蔗糖＋9％甘露醇
注意：1、原生質體分離後，非常脆弱，需要滲透壓保護劑的保護直到細胞壁形成。
2、針對不同的研究對象，培養基中生長素和細胞分裂素的水平要做適當調整。
影響原生質體培養的因素：營養需求（NH4＋不能過多），滲壓劑，培養密度（105/mL），
貯藏條件（通常在黑暗處）。
培養方法：液體基質培養法，半液體基質培養法，固體基質培養法，看護培養。
固體培養的步驟：原生質體移入培養基→1體積含原生質體的培養基與1體積含瓊脂糖（40℃）的培養基混和→倒轉培養皿在25℃下培養→原生質體重新產生細胞壁並分裂成細
胞團→細胞團於瓊脂糖基質中傳代培養，培養基中應減少滲壓劑以利於愈傷組織的形成→誘導分化成植物的根，莖。
原生質體分離培養的意義：1、除去了細胞壁為植物細胞之間的融合掃平了障礙，同時葉為製造新雜種開辟了道路。2、原生質體可攝入外源DNA，細胞器、細菌或病毒顆粒，這些特性與植物全能性相結合為高等植物的遺傳飾變打下基礎。3、獲得細胞無性系和選育突變體的優良起始材料。
㈨ 「在植物原生質體的分離與純化甘露醇起什麼作用」
甘露醇(ganluchun)從褐藻細胞中提制的一種脫水劑,可用於醫療上。當用其20%的溶液注進靜脈後,由於它在體內很少被分解,造成一時性的血液滲透壓提高,以...
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(9)最常用的植物原生質體分離方法擴展閱讀：
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㈩ 原生質體是怎樣分離的
獲得大量而有活力的原生質體是原生質體培養能否成功的關鍵。要分離植物原生質體，必須去掉由果膠質、纖維素、半纖維素及木質素和少量蛋白質等構成的細胞壁。