教學製片常用的切片方法

『壹』 常用的玻片標本分為哪三種

切片 塗片 裝片

『貳』 組織學教學標本常用的製片技術是

課堂學習過程中基本組織形式，就是指教師採用一定的方式，運用一定的協調機制等來組織而形成的課堂學習活動的過程模式。例如有：

（一）環套式的組織形式

指通過教師編制一整套的、系統的、層層遞進式的問題（問題情境），以此來引導學生不斷地去探索、發現，直至問題的解決。

例如，在課堂學習兩位數乘法（例題：17×32）是，教師就可以通過下列一組問題來引導學生思考：①17×32表示什麼？能否用算式表示？②第一步先算什麼？為什麼先算17×30？③再算什麼？兩個結果怎樣相加？④怎樣用豎式相加？為什麼這樣對？找到什麼規律？

（二）迴旋式的組織形式

指通過教師編制的一個引導學生對問題情境的探索、思考與發現的系統，來組織學生的學習。並且這個系統不是直線式的，而是一個循環式的迴路系統。在這個系統中，「情景①」和「情景②」之間構成一個不斷比較、探索、思考和修正的迴路，而「情景②」與「情景③」又構成了一個不斷比較、探索、思考和修正的迴路。如此往復不斷地通過嘗試、比較、修正，來逼近問題目標。

『叄』 常用切片技術有哪些

切片伴隨著顯微鏡技術和免疫實驗等的發展而得到廣泛的應用。本文對其中的冰凍切片、石蠟切片、碳蠟切片、超薄切片、塑料切片等幾種常用的實驗方法相關操作步驟

『肆』 中學常用的四種制載玻片的方法

1、塗片法是將材料均勻地塗布在載玻片上的一種製片方法。
塗片材料有單細胞生物、小型藻類、血液、細菌培養液、動植物的疏鬆組織、精巢、花葯等。
塗片時應注意：（1）載玻片必須清潔。（2）載玻片要持平。（3）塗層須均勻。塗抹液滴在載玻片中間偏右，用解剖刀刃或牙簽等塗勻。（4）塗層要薄。用另一載玻片作推片，沿滴有塗抹液的載玻片面（二載玻片夾角應為30°-45°）由右向左輕輕推動，塗成均勻一薄層。（5）固定。如需固定可用化學固定劑或乾燥法（細菌）固定。（6）染色。細菌用亞甲基藍，血液用瑞氏染液。染色液要蓋住全部塗面。（7）沖洗。用吸水紙吸干或烤乾。（8）封片。長期保存用加拿大的樹膠封片。

2、壓片法是將生物材料置於載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組織細胞壓散的一種製片方法。

3、裝片法是將生物材料採取整體封固製成玻片標本的方法，用此法可製成臨時或永久裝片。
裝片材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、水螅，植物的葉表皮；昆蟲的翅、足、口器，人的口腔上皮細胞等。
裝片法製作時應注意：（1）手持載玻片時，應注意持平，或放在平台上。滴水時水量要適當，以恰好被蓋玻片蓋滿為度。（2）應將材料用解剖針或鑷子展開不使重疊，展平在同一平面上。（3）放蓋玻片時，從一側慢慢蓋在水滴上，防止出現氣泡。（4）染色時，將一滴染色液滴在蓋玻片的一側，用吸水紙從另一側吸引，使蓋玻片下的標本均勻著色。著色後，用同樣的方法，滴一滴清水，把染色液吸出後，在顯微鏡下觀察。

4、切片 是用從生物體上切取的薄片製成的玻片標本。
因要求不同，可用刀片進行徒手切片，也可將組織塊包埋於石蠟或火棉膠中或以低溫冰凍，用切片機切片。切成5～10微米薄片，供光學顯微鏡觀察。用環氧樹脂或甲基丙烯酸包埋組織塊切制的超薄切片，其厚度在20～50納米，專供在電子顯微鏡下觀察。一般教學用的如根尖、莖的切片通稱石蠟切片。

『伍』 冰凍切片的冰凍切片的製作方法

低溫恆冷箱冷凍切片製作法
以Shandon As 620 E型恆溫箱冷凍切片機為例，該機的箱面上有電子控制板，裝有即時冷凍鍵和除霜鍵，啟動即時冷凍鍵，機器馬上進行工作狀態，並可持續10mins。啟動即時除霜鍵，可將工作間頂部後面的製冷柵上的霜除掉，並可持續15mins。有照明鍵一個，啟動該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個，當進行一周的工作或者一天的工作後，啟動該鍵，可對工作間進行消毒。當每天工作完畢時，可啟動密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個按鍵，兩個為快速自動進退鍵，兩個為微小進退鍵，還有一個手動旋鈕，調節修組織塊時的進退。
冷凍箱內左邊的冷凍台，溫度可達-60℃左右，冷凍箱的中間為一台切片機，工作間的溫度在0-30℃間可任意調節，並在箱面上的熒屏顯示出來。 ①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，最好為24×24×2mm。
②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放於冷凍台上，冰凍。小組織的應先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小台後，再放上細小組織，滴上包埋劑。
③將冷凍好的組織塊，夾緊於切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
④調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10um間。
⑤調好防卷板。製作冰凍切片，關鍵在於防卷板的調節上，這就要求操作者要細心，准確地將其調較好，調校至適當的位置。切片時，切出的切片能在第一時間順利地通過刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。
⑥應視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根據不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經固定的腦組織，肝組織和淋巴結時，冷凍箱中的溫度不能調太低，在-10- -15℃左右，切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時，可調在-15～20℃左右，切帶脂肪的組織時，應調至-25℃左右，切含大量的脂肪時，應調至-30℃。 ①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持干凈，需經常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片後就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘於刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
②多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放於不同的支承器上，於冷凍台上凍起來，然後依據不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。
③放置組織冰凍前，應視組織的形狀及走勢來放置，所謂「砍柴看柴勢」，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。
④組織塊不須經各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當冰凍發生時，這些水份就存留於組織中，形成了冰晶。
⑤當切片時，如果發現冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。
⑥用於附貼切片的載玻片，不能存放於冷凍處，於室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由於兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發生轉移而產生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由於溫度相同，沒有發生上述的現象。 冰凍切片附貼於載玻片後，立即放入恆冷箱中的固定液固定1分鍾後即可染色。以往，為了防止切片脫落，當切片附貼於載玻片後，即用電吹風吹乾後再固定。根據實驗對比認為這種做法欠妥未經固定的切片，強熱作用後，蛋白發生變性，核內含有的物質由於熱的作用融合在一起，染色後鏡下分辨不出核內的各種物質。冰凍切片附貼於載玻片後，立即放入恆冷箱中的固定液固定，這樣可以使切片中細胞內各種物質都在沒有任何變化的情況下被固定起來，核染色質清晰，核仁明顯，其他物質都完好保存。
方法：
① 切片固定30秒－1分鍾。
② 水洗。
③ 染蘇木素3－5分鍾。
④ 分化。
⑤ 於鹼水中返藍20秒。
⑥ 伊紅染色10－20秒。
⑦ 脫水，透明，中性樹膠封固。
冰凍組織1－2分鍾，切片1分鍾，固定1分鍾，染色共五分鍾。總共在10分鍾內完成快速製片過程，結果與石蠟切片不相上下。
冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環的半導體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說已很少使用，因此在這里不作闡述。

『陸』 生物製片方法有哪些主要包括哪些步驟

生物製片的方法主要包括動物或者是植物細胞的製片，有永久裝片也有一些切片圖片還有其他的一些裝片。不同的裝片方法是不一樣的。

『柒』 誰有組織切片的製作過程

一、制備顯微標本的切片法
一石蠟包埋切片製作法
這是最常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質，將整塊組織加以包埋，最後凝固成均勻一致的固態結構。用切片機製取極薄的切片。為了讓石蠟能浸入組織內部，需將組織經過脫水等處理。過程大致如下：
⑴固定：生物標本脫離機體或培養環境，細胞會發生自溶，腐敗分解。因此，需用固定劑處理，使蛋白質凝固停止瀕死或死後變化。凡供永久保存的標本都需經固定處理。
常用的固定劑是甲醛、乙醇等，能使蛋白質凝固。還有由幾種試劑配成的固定液，例如Carnoy固定液，由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更強，不含水分，可避免水溶性物質如糖原等在固定過程中損失。
⑵脫水：是將組織細胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），濃度遞升到 100%。此過程還使組織塊進一步硬化。
⑶透明：是用既能溶於純酒精又能融解石蠟的有機溶劑，將組織中的酒精取代，以便石蠟浸入。通常用二甲苯（xylene）為透明劑。
⑷浸蠟：在溫箱內進行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中，讓石蠟浸透組織，作為支持介質。
⑸包埋：將已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中，迅速冷凝，組織決便被蠟包埋。
⑹切片：用切片機。常用的切片機有輪轉式、平推式的。用輪轉式的易於切出連續切片。切片厚度隨製片目的而調整。教學標本厚度多是5~6μm。
⑺貼片烤乾：石蠟切片在溫水上展平後，移在玻片上，烤乾，即可供染色處理。染色後用樹膠、蓋坡片封固，可永久保存。
二冷凍切片法
冷凍切片法是借組織在低溫下，凍結變硬而達到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機，或在普通切片上配製冷設施。恆冷切片機是高級冷凍切片設備。它有一個恆冷箱，標本致冷台和切片機都裝在箱內。恆冷箱的作用類似冰箱，可在一定范圍內調整溫度，其結構有利於保持箱內恆定低溫，減少箱門打開時環境溫度的干擾。切片機的輪轉把手裝在箱外，便於操縱切片。
冷凍切片法的優點是：在處理得當時，它可以最大限度地保持組織的新鮮狀態。並且，由於不需經脫水、透明、浸蠟等過程中有機溶劑的處理，及濕箱浸蠟熱的影響，甚至可不經固定。所以能很好地保存組織細胞的各種成分和酶的活性，因此在酶的組織化學研究中常用此切片法。
二、顯示標本結構成分的染色法
一蘇木素伊紅染色法（HE染色法）
為最常用的染色法。該法應用於各種組織的染色，是組織學技術的基本方法，對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用，只是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的HE染色法。
1、脫蠟：石蠟切片的組織內部充滿石蠟，不能使水溶性染液著色，因此在染色前必須首先用二甲苯將石蠟脫掉，共兩次。
2、下行入水：將已脫蠟的標本浸入無水酒精及各級酒精，使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。
4、蘇木素溶液染色約5—15分鍾
5、自來水洗去多餘染料。
6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色，邊分色邊鏡檢，至核呈紅紫色，細胞質無
色為合適。
7、分色後用自來水或加數滴氨水鹼化，直至細胞核變成藍色。這一步驟也可稱為「藍化」。
8、入蒸餾水洗去鹼性水分。
9、入70%酒精→80%酒精各5分鍾。
10、入伊紅染液染色30秒至數分鍾。
11、以95%酒精對伊紅分色，至胞漿，結締組織等呈桃紅色。
12、上行脫水：染色後的切片，因組織內含水而不透明，不能清晰地觀察其微細結構。因此，須將組織內的水分經各級酒精→無水酒精逐步置換，最後進入不含水份的透明劑內。
13、透明：入二甲苯透明劑，二次（各數分鍾）。
14、取出切片：將組織周圍多餘的二甲苯擦去，滴樹膠後加蓋玻片封固。
結果：細胞核藍紫色，胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，彈性纖維呈明亮桃紅色。
二組織化學和細胞化學染色法
組織化學和細胞化學，是將物理和化學的技術運用到組織標本，用顯微鏡和化學分析方法來研究組織和細胞內的化學成分，並觀察該化學成分在組織、細胞內的定位、含量及其變化規律。這些化學成分借著化學反應所產生的不溶性著色物質來顯示。對於某些化學成分，例如：Fe++糖原、核酸等，可以用直接或間接的化學反應產生著色沉澱而顯示其部位和相對含量。對於酶類，顯示它的活性，須有該種酶的底物（被該種酶作用的物質），由酶對底物的分解，直接或間接地生成著色物質而被顯示。凡是在光學顯微鏡下觀察細胞原位顯示的化學物質，稱組織化學，若用電鏡觀察細胞原位化學成分的著色部位，則稱電鏡細胞化學，下面從原理方面簡要介紹幾種常用的組織化學染色技術：
1、顯示琥珀酸脫氫酶（SDH）活性的硝基-BT法：
（Succinate dehydrogenase）
⑴酶的定位及生物學意義：
琥珀酸脫氫酶是線粒體標志酶，其存在於所有有氧呼吸的細胞，和線粒體內膜緊密結合。該酶不需輔酶而自身有黃素蛋白（FP,Flavoprotein）為輔基。在組化反應中常用來反映三羧酸循環的情況。其催化過程如下：
弱-單甲（紫紅色）
HOOC-CH2-CH2-COOHFPH2四唑（甲）↓
（有色）強-雙甲（深紫藍色）
（琥珀酸）（黃素蛋白）
HOOC-CH=CH=COOHFPH2四唑（無色）
（延胡索酸）
⑵原理：上述的反應最後一步的原理是，硝基-BT（Nitro-blue tetrozolyum，四唑氮藍）系異環族化合物四唑鹽，當它接受氫時，本身被還原為有色沉澱產物（甲
）（Formazan）。
⑶孵育液配製：
A液（貯備液）
0.2M磷酸緩沖液（PH7.6）10ml等量混合
0.2M琥珀酸鈉（S01.succinate） 10ml備用
B液：
硝基四唑（Nitro-Br）2mg
2ml
0.2M磷酸緩沖液（PH7.6） 2ml
取：A液2ml
B液2ml孵育液
聚乙烯吡烷酮（PVP） 300mg
⑷方法：
①新鮮恆冷箱冷凍切片，厚6~8μm，平貼在蓋玻片上。
②滴染法：將有冷凍切片的蓋玻片（標本面朝上）平放於預熱好的培養皿中（底部墊一濕濾紙），滴加孵育液至全部覆蓋組織，於37℃溫箱中孵育45~60分鍾（肝，心肌組織15分鍾即可）。
③於生理鹽水中沖洗二次（輕晃，以防脫片）。
④10%福爾馬林生理鹽水固定10分鍾。
⑤15%酒精浸洗5分鍾（換二次）。
⑥甘油明膠封片。
⑸結果：酶活性強處呈藍色顆粒（雙甲沉澱），酶活性較低時形成紫紅色單甲。在光鏡下，該酶活性於肝小葉內分布呈明顯分帶現象，周邊帶強於中央帶。在心肌細胞縱切面，酶活性顆粒沿心肌細胞長軸整齊排列，相鄰心肌細胞的空白處為閏盤。

2、顯示葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）活性的鉛法：
（Glucosel-phosphate phosphohydrolase）
①酶的定位及其生物學意義：
該酶主要位於內質網，是內質網的標志酶。G-6-Pase參與糖代謝，能水解葡萄糖-6-磷酸而釋放出葡萄糖和磷酸。
⑵原理：G-6-Pase將底物（葡萄糖-6-磷酸鉀鹽）水解產生磷酸離子，後者被孵育液中的硝酸鉛所捕獲，最終反應物為顆粒狀的硫化鉛沉澱，其反應式如下：
酶Pb(NO3)2
葡萄糖-6-磷酸鉀+H2O葡萄糖+磷酸

(NH4)2S
Pb2(PO4)2PbS↓
(無色)（棕色）
（試劑配製及方法詳見組織學技術專著）
⑶結果：酶活性部位呈棕色硫化鉛顆粒沉澱。在光鏡下G-6-Pase活性顆粒較均勻地分布於胞質中。
3、顯示鹼性磷酸酶（APL）的鈣鈷法（Alkaline phosphohydrolase）
⑴酶的定位及其生物學意義：
ALP在鹼性環境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解，參與磷酸根的跨膜轉運過程，並有磷酸轉移的作用，故在細胞膜上運輸較活躍，如毛細血管內皮細胞，腎近曲小管刷狀緣，腸上皮紋狀緣等處，該酶的活性較高。
⑵原理：ALP將磷酸鹽底物（如β-甘油磷酸鈉等）分解產生磷酸根離子，後者為孵育液中的氯化鈣捕獲生成磷酸鈣沉澱，但該沉澱為非金屬鹽，需加入硝酸鈷，使其生成磷酸鈷沉澱，因無色，再需通過硫化銨處理，形成棕黑色硫化鈷沉澱而被顯示。在PH9.2—9.4環境中表現最大活性。反應式如下：
ALPCa++
β-甘油磷酸鈉磷酸離子Ca2(PO4)2

Co(NO3)2(NH4)2S
CO2（PO4）2CoS↓
（無色）（棕黑色）
⑶結果：酶活性部位為棕黑色CoS沉澱。
4、顯示核酸的甲綠一派喏寧（Methyl green-pyronln）染色：
⑴原理：甲綠和派喏寧都是鹼性染料，對兩種核酸（DNA和RNA）能分別染色，其機制可能在於兩種核酸分子都是多聚體，但聚合程度有所不同。甲綠具有兩個帶電荷的氨基，而派喏寧只有一個。因此在混合的染液中，二者競爭的結果是甲綠易與聚合程度較高的DNA結合呈現藍綠色，而派喏寧則與聚合程度較低的RNA結合呈現紅色。
（試劑制備及方法詳見組織學技術專著）
⑶結果：核內DNA呈藍綠色，核仁及胞質內RNA呈桃紅色。
5、顯示糖原的過碘酸雪夫氏（PAS）反應：
⑴原理：糖原是一種動物多糖，無色，富含於肝細胞和肌細胞胞質中。PAS反應（Periodic acid schiff Reaction）能在糖原所在部位生成紫紅色物質，從而將之顯示。RAS反應分為兩步：首先是強氧化劑過碘酸（Periodic acid,分子式為HIO4），將糖原中的葡萄糖分子的C-C鍵打開，將CHOH-CHOH氧化，生成二醛基，然後Schiff試劑中的無色亞硫酸品紅分子與糖的醛基結合，生成新的紫紅色復合物。
HIO4schiff試劑
多糖醛基紫紅色反應產物
（氧化）
（試劑配製及方法詳見組織學技術專著）
⑵結果：糖原呈紫紅色顆粒狀。

『捌』 冰凍切片，he是最常見的製片和染色方法嗎

冰凍切片，HE的確是最常見的製片和染色方法
冰凍切片HE蘇木素伊紅染色步驟
切片固定30秒到1分鍾。
水洗。
染蘇木素3到5分鍾。成熟蘇木素製作，加入碘酸鈉0.2g碘酸鈉每1L蘇木素。
分化。
於鹼水中返藍20秒。
伊紅染色10到20秒。
脫水，透明，中性樹膠封固。

『玖』 石蠟切片技術和超薄切片技術有什麼區別

石蠟切片（paraffin section） 組織學常規製片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用於觀察正常細胞組織的形態結構，也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用於其他許多學科領域的研究中。教學中，光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法制備的。活的細胞或組織多為無色透明，各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區別出；組織離開機體後很快就會死亡和產生組織腐敗，失去原有正常結構，因此，組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡，而能清晰辨認其形態結構。

超薄切片技術由於電鏡產生的電子束穿透能力很弱，必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用，這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射電鏡的樣品制備方法中，超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似，需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。