❶ 常用的蛋白質電泳方法有哪些
聚丙烯醯胺凝膠電泳:這是一種活性電泳，可以分析混合樣品，並且可用特異檢測手段檢測目標物條帶。
SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳:最常用的變性電泳，可以用來測定蛋白質分子量。比層析法測定要好。
❷ 比較幾種常用電泳方法（酯酸纖維薄膜電泳，瓊脂糖凝膠電泳，PAGE SDS-PAGE,雙向電泳）的原理及優缺點。
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❸ 根據應用電泳支持物不同列舉常用電泳方法有哪些
1.按支持物的物理性狀不同,電泳可分為:
(1)濾紙為支持物的紙電泳;
(2)粉末電泳: 如纖維素粉,澱粉,玻璃粉電泳;
(3)凝膠電泳:如瓊脂,瓊脂糖,硅膠,澱粉膠,聚丙烯醯胺凝膠電泳;
(4)緣線電泳:如尼龍絲,人造絲電泳
2. 按支持物的裝置形式不同,電泳可分為:
(1)平板式電泳:支持物水平放置,是最常用的電泳方式;
(2)垂直板電泳:聚丙烯醯胺凝膠可做成垂直板式電泳.
(3)柱狀(管狀)電泳:聚丙烯醯胺凝膠可灌入適當的電泳管中做成管狀電泳.
❹ 幾種蛋白質凝膠電泳方法的區別和用途
1、醋酸纖維素薄膜電泳 ：醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物,它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經乙醯化而製成.醋酸纖維素膜薄是一種細密而又薄的微孔膜.醋酸纖維素膜對樣品的吸附性較小,因此,少量的樣品,甚至大分子物質都能得以較高的解析度.又由於醋酸纖維素薄膜親水性較小,故電滲作用也較小,並且它所容納的緩沖液也較少,因此電流的大部分由樣品傳導,可以加速樣品分離,大大節約電泳時間.醋酸纖維素具有操作簡單、快速、價廉、定量容易等優點,尤其較紙電泳分辨力強、區帶清晰、靈敏度高和便於保存、照相等,目前醋酸纖維素薄膜電泳己取代紙電泳而被廣泛應用於科學實驗、生化產品分析和臨床化驗,如分析檢測血漿蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎兒甲種球蛋白、體液、脊髓液、脫氫酶、多肽、核酸及其他生物大分子,為心血管疾病、肝硬化及某些癌症鑒別診斷提供了可靠的依據,因而已成為醫學和臨床檢驗的常規技術.
2、 瓊脂糖凝膠電泳 ：瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳,其分析原理與其它支持物電泳的最主要區別是：它兼有「分子篩」和「電泳」的雙重作用.瓊脂糖凝膠具有網路結構,直接參與帶電顆粒的分離過程,在電泳中,物質分子通過空隙時會受到阻力,大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅依賴於凈電荷的性質和數量,而且還取決於分子大小,這就大大地提高了分辨能力.瓊脂糖系天然的瓊脂加工製得,天然瓊脂是一種多聚糖,主要由瓊脂糖（約佔80%）及瓊脂膠組成.瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷.而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象.所以常用於血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶等同工酶的分離和鑒定,為臨床某些疾病的鑒別診斷提供了可靠的依據.與免疫化學反應相結合發展成為免疫電泳技術,用於分離和檢測抗原.可對目前常用的瓊脂糖進行某些修飾,如引入化學基團羥乙基,則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化,被稱為低熔點瓊脂糖.該溫度低於DNA的熔點,而且凝膠強度又無明顯改變.以此為支持物進行電泳,稱為低熔點瓊脂糖凝膠電泳,主要應用於DNA研究.如DNA鑒定,DNA限制性內切酶圖譜製作等,為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構象的分析提供了重要手段.
3、聚丙烯醯胺凝膠電泳 ：聚丙烯醯胺凝膠是由單體丙烯醯胺和交聯劑又稱為共聚體的N,N』-甲叉雙丙烯醯胺（簡稱Bis）在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯醯胺凝膠電泳(簡稱PAGE).應用范圍廣,可用於蛋白質、酶、核酸等生物大分子的分離、定性、定量及少量的制備,還可測定分子量、等電點等.
4、等電聚焦電泳 ：等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質來分離等電點(pI)不同的蛋白質的電泳技術.這是六十年代後期才發展起來的新技術,基本原理是在制備聚丙烯胺膠凝膠時,在膠的混合液中加入載體兩性電解質(商品名Ampholine).這種載體兩性電解質是一系列含有不同比例氨基及羧基的氨羧酸混合物,其分子量在300～1000范圍內,它們在pH2.5～11.0之間具有依次遞變但相距很近的等電點,並且在水溶液中能夠充分溶解.含有載體兩性電解質的凝膠,當通以直流電時,載體兩性電解質即形成一個從正極到負極連續增加的pH梯度.如果把蛋白質加人此體系中進行電泳時,不同的蛋白質即移動並聚焦於相當其等電點的位置.好的載體兩性電解質應具有以下特點：在等電點處有足夠的緩沖能力,不易被樣品等改變其pH梯度；必須有均勻的足夠高的電導,以便使一定的電流通過；分子量不宜太大,便於快速形成梯度並從被分離的高分子物質中除去；不與被分離物質發生化學反應或使之變性等.Ampholine是一種常用的載體兩性電解質.要取得滿意的等電聚焦電泳分離結果,除有好的載體兩性電解質外,還應有抗對流的措施,使已分離的蛋白質區帶不致發生再混合.要消除這種現象,辦法之一加入抗對流介質,用得最多的抗對流支持介質是聚丙烯醯胺凝膠.
等電聚焦電泳與其它區帶電泳比較具有更高的解析度,等電點僅差0.01pH的物質即可分開；具有更好的濃縮效應,很稀的樣品也可進行分離,並且可直接測出蛋白質的等電點.所以此技術在高分子物質的分離、提純和鑒定中的應用日益廣泛.但是等電聚焦電泳技術要求有穩定的pH梯度和使用無鹽溶液,而在無鹽溶液中蛋白質易發生沉澱.
❺ 什麼叫電泳技術分離或分析蛋白質常用的電泳方法有哪些
電泳懸浮於樣品溶液（有機的或無機的，生命或無生命的）帶電粒子，朝向相反的電荷移動的現象的電極的電場的影響下的頻帶本身。
分離方法：（一）醋酸纖維素薄膜電泳
（二）凝膠電泳
（三）IEF
（d）其他電泳
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❻ 常見的電泳方法
實驗室中常見的電泳方法有以下幾種：
一、紙電泳
指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區帶電泳。
將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點於濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕後，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進行電泳。
二、醋酸纖維素薄膜電泳
電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合於病理情況下微量異常蛋白的檢測。
三、凝膠電泳
由區帶電泳中派生出的一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式。
凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯醯胺凝膠電泳是普通電泳中應用最多的兩種形式。
目前，這種辦法被廣泛用來分析蛋白質和核酸。
四、等電聚焦電泳
1．等電聚焦電泳過程
一種利用有pH值梯度的介質，分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。
在一個穩定連續的線性pH梯度的溶液（兩性載體電解質）中進行分離，每一種被分離的兩性物質都移向與它的等電點相一致的pH位置，在那裡不再移動（稱為聚焦）。
2．等電聚焦電泳的特點
使用兩性載體電解質，在電極之間形成穩定、連續、線性的pH梯度；
由於「聚焦效應」，即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區帶界面；
電泳速度快;解析度高;
加入樣品的位置可任意選擇；
可用於測定蛋白質類物質的等電點;
適用於中、大分子量（如蛋白質、肽類、同工酶等）生物組分的分離分析。
五、等速電泳
採用兩種不同濃度的電解質，一種為前導電解質，充滿整個毛細管柱；另一種為尾隨電解質，置於一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高於任何樣品組分，尾隨電解質則低於任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強電場的作用下，各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動，實現分離。
六、雙向凝膠電泳（二維電泳）
第一向採用等電聚焦 根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同，將蛋白質進行分離。
第二向採用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯醯胺凝膠電泳 （SDS-PAGE）就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀，而是呈現為斑點狀。
七、免疫電泳
免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開；然後加入抗體做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇，在二者比例適當的地方，形成肉眼可見的沉澱弧。
❼ 根據應用電泳支持物不同列舉常用電泳方法有哪些
1.按支持物的物理性狀不同,電泳可分為:
(1)濾紙為支持物的紙電泳;
(2)粉末電泳:
如纖維素粉,澱粉,玻璃粉電泳;
(3)凝膠電泳:如瓊脂,瓊脂糖,硅膠,澱粉膠,聚丙烯醯胺凝膠電泳;
(4)緣線電泳:如尼龍絲,人造絲電泳
2.
按支持物的裝置形式不同,電泳可分為:
(1)平板式電泳:支持物水平放置,是最常用的電泳方式;
(2)垂直板電泳:聚丙烯醯胺凝膠可做成垂直板式電泳.
(3)柱狀(管狀)電泳:聚丙烯醯胺凝膠可灌入適當的電泳管中做成管狀電泳.
❽ 什麼是電泳技術
電泳是指帶粒子在電場中向與自身帶相反電荷的電極移動的現象。不同的帶電顆粒在同一電場中泳動的速度不同。常用泳動度（或遷移率）來表 示。泳動度是指帶電顆粒在單位電場強度下電泳的速度。電泳技術以支持物分紙電泳，醋酸纖維素薄膜電泳，澱粉凝膠電泳，瓊 脂（糖）凝膠電泳及聚丙烯醯胺凝膠電泳等。經凝膠形狀分有水平平板電泳，園盤柱 狀電泳及垂直平板電泳。
用支持體的電泳技術：
1.紙上電泳
2.醋酸纖維薄膜電泳
3.薄層電泳
4.非凝膠性支持體區帶電泳 （支持體有：澱粉，纖維素粉，玻璃粉，硅膠等)
5.凝膠支持體區帶電泳 ①澱粉液 ②聚丙烯醯胺凝膠 ③瓊脂（糖）凝膠
不用支持體的電泳技術：
1.Tiselius或微量電泳
2.顯微電泳
3.等電點聚焦電泳技術
4.等速電泳技術
5.密度梯度電泳
電泳技術的應用
在直流電場中，帶電粒子向帶符號相反的電極移動的現象稱為電泳（electropho-resis）。1809年俄國物理學家Peнce首先發現了電泳現象，但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分離蛋白質的界面電泳（boundary electrophoresis）之後，電泳技術才開始應用。本世紀60-70年代，當濾紙、聚丙烯醯胺凝膠等介質相繼引入電泳以來，電泳技術得以迅速發展。豐富多彩的電泳形式使其應用十分廣泛。電泳技術除了用於小分子物質的分離分析外，最主要用於蛋白質、核酸、酶，甚至病毒與細胞的研究。由於某些電泳法設備簡單，操作方便，具有高解析度及選擇性特點，已成為醫學檢驗中常用的技術。
一、電泳技術的基本原理和分類
在電場中，推動帶電質點運動的力（F）等於質點所帶凈電荷量（Q）與電場強度（E）的乘積。
F＝QE
質點的前移同樣要受到阻力（F）的影響，對於一個球形質點，服從Stoke定律，即：
F′＝6πrην
式中r為質點半徑，η為介質粘度，ν為質點移動速度，當質點在電場中作穩定運動時：
F＝F′即QE＝6πrην
上式交換後可寫成
ν/E的含意為單位電場強度下的移動速度，里可用遷移率μ表示，即
從上式可見，球形質點的遷移率，首先取決於自身狀態，即與所帶電量成正比，與其半徑及介質粘度成反比。除了自身狀態的因素外，電泳體系中其它因素也影響質點的電泳遷移率。
電泳法可分為自由電泳（無支持體）及區帶電泳（有支持體）兩大類。前者包括Tise-leas式微量電泳、顯微電泳、等電聚焦電泳、等速電泳及密度梯度電泳。區帶電泳則包括濾紙電泳（常壓及高壓）、薄層電泳（薄膜及薄板）、凝膠電泳（瓊脂、瓊脂糖、澱粉膠、聚丙烯醯胺凝膠）等。
自由電泳法的發展並不迅速，因為其電泳儀構造復雜、體積龐大，操作要求嚴格，價格昂貴等。而區帶電泳可用各種類型的物質作支持體，其應用比較廣泛。本節僅對常用的幾種區帶電泳分別加以敘述。
二、影響電泳遷移率的因素
⒈電場強度 電場強度是指單位長度（cm）的電位降，也稱電勢梯度。如以濾紙作支持物，其兩端浸入到電極液中，電極液與濾紙交界面的紙長為20cm，測得的電位降為200V，那麼電場強度為200V/20cm＝10V/cm。當電壓在500V以下，電場強度在2-10v/cm時為常壓電泳。電壓在500V以上，電場強度在20-200V/cm時為高壓電泳。電場強度大，帶電質點的遷移率加速，因此省時，但因產生大量熱量，應配備冷卻裝置以維持恆溫。
⒉溶液的pH值溶液的pH決定被分離物質的解離程度和質點的帶電性質及所帶凈電荷量。例如蛋白質分子，它是既有酸性基團（-COOH），又有鹼性基團（-NH2）的兩性電解質，在某一溶液中所帶正負電荷相等，即分子的凈電荷等於零，此時，蛋白質在電場中不再移動，溶液的這一pH值為該蛋白質的等電點（isoelctric point，pI）。若溶液pH處於等電點酸側，即pH＜pl，則蛋白質帶正電荷，在電場中向負極移動。若溶液pH處於等電點鹼側，即pH＞pl，則蛋白質帶負電荷，向正極移動。溶液的pH離pl越遠，質點所帶凈電荷越多，電泳遷移率越大。因此在電泳時，應根據樣品性質，選擇合適的pH值緩沖液。
⒊溶液的離子強度電泳液中的離子濃度增加時會引起質點遷移率的降低。其原因是帶電質點吸引相反符合的離子聚集其周圍，形成一個與運動質點符合相反的離子氛（ionic atmosphere），離子氛不僅降低質點的帶電量，同時增加質點前移的阻力，甚至使其不能泳動。然而離子濃度過低，會降低緩沖液的總濃度及緩沖容量，不易維持溶液的pH值，影響質點的帶電量，改變泳動速度。離子的這種障礙效應與其濃度和價數相關。可用離子強度I表示。
式中S表示溶液中離子種類，Ci和Zi分別表示每種離子的摩爾濃度與化合價。最常用I值在0.02-0.2之間。
⒋電滲在電場作用下液體對於固體支持物的相對移動稱為電滲（electro-osmosis）。其產生的原因是固體支持物多孔，且帶有可解離的化學基團，因此常吸附溶液中的正離子或負離子，使溶液相對帶負電或正電。如以濾紙作支持物時，紙上纖維素吸附OH-帶負電荷，與紙接觸的水溶液因產生H3O+，帶正電荷移向負極，若質點原來在電場中移向負極，結果質點的表現速度比其固有速度要快，若質點原來移向正極，表現速度比其固有速度要慢，可見應盡可能選擇低電滲作用的支持物以減少電滲的影響。
三、電泳分析常用方法
（一）醋酸纖維素薄膜電泳
醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙醯化形成的纖維素醋酸酯。由該物質製成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。這種薄膜對蛋白質樣品吸附性小，幾乎能完全消除紙電泳中出現的「拖尾」現象，又因為膜的親水性比較小，它所容納的緩沖液也少，電泳時電流的大部分由樣品傳導，所以分離速度快，電泳時間短，樣品用量少，5μg的蛋白質可得到滿意的分離效果。因此特別適合於病理情況下微量異常蛋白的檢測。
醋酸纖維素膜經過冰醋酸乙醇溶液或其它透明液處理後可使膜透明化有利於對電泳圖譜的光吸收掃描測定和膜的長期保存。
⒈材料與試劑醋酸纖維素膜一般使用市售商品，常用的電泳緩沖液為pH8.6的巴比妥緩沖液，濃度在0.05-0.09mol/L。
⒉操作要點
⑴膜的預處理：必須於電泳前將膜片浸泡於緩沖液，浸透後，取出膜片並用濾紙吸去多餘的緩沖液，不可吸得過干。
⑵加樣：樣品用量依樣品濃度、本身性質、染色方法及檢測方法等因素決定。對血清蛋白質的常規電泳分析，每cm加樣線不超過1μl，相當於60-80μg的蛋白質。
⑶電泳：可在室溫下進行。電壓為25V/cm，電流為0.4-0.6mA/cm寬。
⑷染色：一般蛋白質染色常使用氨基黑和麗春紅，糖蛋白用甲苯胺藍或過碘酸-Schiff試劑，脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色。
⑸脫色與透明：對水溶性染料最普遍應用的脫色劑是5％醋酸水溶液。為了長期保存或進行光吸收掃描測定，可浸入冰醋酸：無水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。
（二）凝膠電泳
以澱粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠等作為支持介質的區帶電泳法稱為凝膠電泳。其中聚丙烯醯胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用於分離蛋白質及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對一般蛋白質不起分子篩作用，但適用於分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應用較廣，介紹如下：
⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結構單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構成大網孔型凝膠。因此該凝膠適合於免疫復合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗中常用於LDH、CK等同工酶的檢測。
⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質中，DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對數成反比；分子構型也對遷移率有影響，如共價閉環DNA＞直線DNA＞開環雙鏈DNA。當凝膠濃度太高時，凝膠孔徑變小，環狀DNA（球形）不能進入膠中，相對遷移率為0，而同等大小的直線DNA（剛性棒狀）可以按長軸方向前移，相對遷移率大於0。
⑴設備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應用比較廣泛。核酸分離一般用連續緩沖體系，常用的有TBE（0.08mol/l Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/l EDTA）和THE（0.04mol/l Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.0018mol/l EDTA）。
⑵凝膠制備：用上述緩沖液配製0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5μg/ml，然後將其注入玻璃板或有機玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時，梳齒下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脫凝固後，取出梳子，加入適量電極緩沖液使板膠浸沒在緩沖液下1mm處。
⑶樣品制備與加樣：溶解於TBE或THE內的樣品應含指示染料（0.025％溴酚藍或桔黃橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣5-10μg。
⑷電泳：一般電壓為5-15V/cm。對大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過程最好在低溫條件下進行。
⑸樣品回收：電泳結束後在紫外燈下觀察樣品的分離情況，對需要的DNA分子或特殊片段可從電泳後的凝膠中以不同的方法進行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區帶的凝膠，將其裝入透析袋（內含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋後，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，100V電泳2-3小時，然後正負電極交換，反向電泳2分鍾，使透析袋上的DNA釋放出來。吸出含DNA的溶液，進行酚抽提、乙醇沉澱等步驟即可完成樣品的回收。
其它還有低融點瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利於小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著下降。
（三）等電聚焦電泳技術
等電聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期問世的利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。由於其解析度可達0.01pH單位，因此特別適合於分離分子量相近而等電點不同的蛋白質組分。
⒈IEF的基本原理在IEF的電泳中，具有pH梯度的介質其分布是從陽極到陰極，pH值逐漸增大。如前所述，蛋白質分子具有兩性解離及等電點的特徵，這樣在鹼性區域蛋白質分子帶負電荷向陽極移動，直至某一pH位點時失去電荷而停止移動，此處介質的pH恰好等於聚焦蛋白質分子的等電點（pl）。同理，位於酸性區域的蛋白質分子帶正電荷向陰極移動，直到它們的等電點上聚焦為止。可見在該方法中，等電點是蛋白質組分的特性量度，將等電點不同的蛋白質混合物加入有pH梯度的凝膠介質中，在電場內經過一定時間後，各組分將分別聚焦在各自等電點相應的pH位置上，形成分離的蛋白質區帶。
⒉pH梯度的組成pH梯度的組成方式有二種，一種是人工pH梯度，由於其不穩定，重復性差，現已不再使用。另一種是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或電泳管正負極間引入等電點彼此接近的一系列兩性電解質的混合物，在正極端吸入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在負極端引入鹼液，如氫氧化鈉、氨水等。電泳開始前兩性電解質的混合物pH為一均值，即各段介質中的pH相等，用pH0表示。電泳開始後，混合物中pH最低的分子，帶負電荷最多，pI1為其等電點，向正極移動速度最快，當移動到正極附近的酸液界面時，pH突然下降，甚至接近或稍低於PI1，這一分子不再向前移動而停留在此區域內。由於兩性電解質具有一定的緩沖能力，使其周圍一定的區域內介質的pH保持在它的等電點范圍。pH稍高的第二種兩性電解質，其等電點為pI2，也移向正極，由於pI2＞pI1，因此定位於第一種兩性電解質之後，這樣，經過一定時間後，具有不同等電點的兩性電解質按各自的等電點依次排列，形成了從正極到負極等電點遞增，由低到高的線性pH梯度，如圖16-3所示。
⒊兩性電解質載體與支持介質理想的兩性電解質載體應在pI處有足夠的緩沖能力及電導，前者保證pH梯度的穩定，後者允許一定的電流通過。不同pI的兩性電解質應有相似的電導系數從而使整個體系的電導均勻。兩性電解質的分子量要小，易於應用分子篩或透析方法將其與被分離的高分子物質分開，而且不應與被分離物質發生反應或使之變性。
圖16－3 pH梯度形成示意圖
常用的pH梯度支持介質有聚丙烯醯胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等，其中聚丙烯醯胺凝膠為最常應用。
電泳後，不可用染色劑直接染色，因為常用的蛋白質染色劑也能和兩性電解質結合，因此應先將凝膠浸泡在5％的三氯醋酸中去除兩性電解質，然後再以適當的方法染色。
（四）其他電泳技術
⒈IEF/SDS-PAGE雙向電泳法1975年O′Farrall等人根據不同組份之間的等電點差異和分子量差異建立了IEF/Sd S-PAGE雙向電泳。其中IEF電泳（管柱狀）為第一向，SDS-PAGE為第二向（平板）。在進行第一向IEF電泳時，電泳體系中應加入高濃度尿素、適量非離子型去污劑NP-40。蛋白質樣品中除含有這兩種物質外還應有二硫蘇糖醇以促使蛋白質變性和肽鏈舒展。
IEF電泳結束後，將圓柱形凝膠在SDS-PAGE所應用的樣品處理液（內含SDS、β-巰基乙醇）中振盪平衡，然後包埋在SDS-PAGE的凝膠板上端，即可進行第二向電泳。
IEF/ SDS-PAGE雙向電泳對蛋白質（包括核糖體蛋白、組蛋白等）的分離是極為精細的，因此特別適合於分離細菌或細胞中復雜的蛋白質組分。
⒉毛細管電泳 Neuhoff等人於1973年建立了毛細管均一濃度和梯度濃度凝膠用來分析微量蛋白質的方法，即微柱膠電泳，均一濃度的凝膠是將毛細管浸入凝膠混合液中，使凝膠充滿總體積的2/3左右，然後將其撳入約厚2mm的代用粘土墊上，封閉管底，用一支直徑比盛凝膠的毛細管更細的硬質玻璃毛細管吸水鋪在凝膠上。聚合後，除去水層並用毛細管加蛋白質溶液（0.1-1.0μl，濃度為1-3mg/ml）於凝膠上，毛細管的空隙用電極緩沖液注滿，切除插入粘土部分，即可電泳。
毛細管電泳分析儀的誕生，特別是美國生物系統公司的高效電泳色譜儀為DNA片段、蛋白質及多肽等生物大分子的分離、回收提供了快速、有效的途徑。高效電泳色譜法是將凝膠電泳解析度和快速液相色譜技術溶為一體，在從凝膠中洗脫樣品時，連續的洗脫液流載著分離好的成分，通過一個連機檢測器，將結果顯示並列印記錄。高效電泳色譜法既具有凝膠電泳固有的高解析度，生物相容性的優點，又可方便地連續洗脫樣品。
❾ 常用於核算分離鑒定的電泳方法有什麼
電泳是指混懸於溶液中的樣品（有機的或無機的,有生命的或無生命的）電荷顆粒,在電場影響下向著與自身帶相反電荷的電極移動的現象.
分離方法：(一)醋酸纖維素薄膜電泳
(二)凝膠電泳
(三)等電聚焦電泳技術
(四)其他電泳技術
❿ 電泳的分類有哪些
目前所採用的電泳方法,大致可分為3類:顯微電泳,自由界面電泳和區帶電泳.區帶電泳應用廣泛,區帶電泳可分為以下幾種類型: 按支持物的物理性狀不同,區帶電泳可分為: (1)濾紙為支持物的紙電泳; (2)粉末電泳: 如纖維素粉,澱粉,玻璃粉電泳; (3)凝膠電泳:如瓊脂,瓊脂糖,硅膠,澱粉膠,聚丙烯醯胺凝膠電泳; (4)緣線電泳:如尼龍絲,人造絲電泳 2. 按支持物的裝置形式不同,區帶電泳可分為: (1)平板式電泳:支持物水平放置,是最常用的電泳方式; (2)垂直板電泳:聚丙烯醯胺凝膠可做成垂直板式電泳. (3)柱狀(管狀)電泳:聚丙烯醯胺凝膠可灌入適當的電泳管中做成管狀電泳. 3.按pH的連續性不同,區帶電泳可分為: (1)連續pH電泳:如紙電泳,醋酸纖維素薄膜電泳; (2)非連續pH電泳:如聚丙烯醯胺凝膠盤狀電泳;
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