⑴ 凝膠電泳分析軟體gelpro使用方法2.如何拍攝凝膠的照片
正確地拍攝凝膠照片比使用軟體更重要。最好是有一台凝膠成像系統,用它來拍攝凝膠圖片。用自己的數碼相機來拍攝凝膠圖片是不行的,如果要作圖像分析,就更不行了。
上一篇已經說到凝膠成像系統有三大件,暗箱,相機與電腦上的控制分析軟體。就按這個順序說吧。
暗箱里是四組照片燈光。最常用的是透射紫外燈箱與透射白光板。作過凝膠電泳的同學都用過紫外燈箱,暗箱里也是這東西。紫外燈箱是觀察EB染色的核酸電泳的。白光板則用來拍攝SDS PAGE凝膠。
圖片:紫外燈箱。注意暗箱後壁上還有塊板可以拉下來,那就是白光板。
圖片:其實白光板與醫院里看X-光片的燈箱是一個道理。看SDS PAGE凝膠就得放在這個上面。放在桌子上自己用數碼相機拍張照片是不行的。
1.凝膠要拍大一點,讓它充滿畫面。
2.曝光不能過度。這會導致條帶的分析產生錯誤。此時最亮的條帶會呈現為一個大白斑。
3.加樣孔放在上面,凝膠塊要擺得橫平豎直。如果是豎長條的凝膠,也可以橫著拍攝,然後用旋轉圖片的方法把加樣孔轉到上方。
4.圖片要以12位灰度甚至16位灰度保存為TIFF格式。不能存為jpeg圖片。下面圖片上的那些馬賽克就是gpeg惹的禍。
各種凝膠成像系統的具體操作方法當然是不同的,不過它們都是下面這個程序:
1.放入凝膠塊,調整其位置,(在後面的過程中還需要細調其位置讓它處在畫面中間)
2.關上門,打開相對應的燈光。(手控的光源開關在暗箱上,程序控制的在軟體的暗箱控制項模塊上)
3.調整相機鏡頭的光圈及曝光時間以調整圖像亮度,變焦調整圖像的放大與縮小,讓凝膠圖像盡量充滿整個畫面。還有個對焦距的功能,使圖像清晰。
4.拍攝照片。要保存為TIFF圖片格式,如果相機夠好,還能保存為12位灰度的圖片文件。