A. 求人外周血B、T淋巴細胞的分離方法
目前常用Ficoll密度梯度離心法直接分離和純化外周血單個核細胞。
方法:
1.在短中管中加入適量淋巴細胞分離液。
2.取肝素抗凝靜脈血與等量Hank's液或RPMI1640充分混勻，用滴管沿管壁緩慢疊加於分層液面上，注意保持清楚的界面。水平離心2000rpm×20分鍾。
3.離心後管內分為三層，上層為血漿和Hank's液，下層主要為紅細胞和粒細胞。中層為淋巴細胞分離液，在上、中層界面處有一以單個核細胞為主的白色雲霧層狹窄帶(如下圖)，單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞。此外，還含有血小板。
4.用毛細血管插到雲霧層，吸取單個核細胞。置入另一短中管中，加入5倍以上體積的Hank's液或RPMI1640，1500rpm×10分鍾，洗滌細胞兩次。
5.末次離心後，棄上清，加入含有10％小牛血清的RPMI1640，重懸細胞。取一滴細胞懸液與一滴0.2％台盼蘭染液混合，於血球計數板上，計數四個大方格內的細胞總數。
單個核細胞濃度(細胞數／1毫升細胞懸液)＝
4個大方格內細胞總數
──────────×104×2(稀釋倍數)
4
6.細胞活力檢測：死的細胞可被染成蘭色，活細胞不著色。計數200個淋巴細胞。計算出活細胞百分率。
活細胞數
活細胞百分率＝──────×100％
總細胞數
用本法分離PBMC，純度在90％以上，收獲率可達80～90％，活細胞百分率在95％以上。
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C. 急問：從人血液中分離淋巴細胞
呵呵 我把整個試驗給你 很詳細的
目的
了解密度梯度離心法分離淋巴細胞的原理及其操作過程。
原理
淋巴細胞分離掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合製成。它具有分子量大、無化學活性、20℃時比重為1.077士0.001的特性。血液中各種細胞的比重不同，淋巴細胞與單核細胞的比重約為1.070，而粒細胞和紅細胞的比重為1.092左右。將血液加至分離液上，通過離心，可使一定比重的細胞按相應密度梯度進行分布，從而將淋巴細胞與其它血細胞分離開。
材料
1. 淋巴細胞分離液 (比重1.077土0.001)。
2. 肝素。
3. 無Ca2+、Mg2+的Hanks溶液，pH7.2～7.6。
4. RPMI-1640培養液(含10%小牛血清)。
5. 其它:注射器、吸管、滴管（均為無菌）,血球計數板，水平離心機，顯微鏡等。
方法
1. 無菌抽取靜脈血2ml，去掉針頭注人含有肝素的無菌試管中搖勻，加入2ml Hanks溶液進行對倍稀釋，混勻。
2. 用吸管吸取稀釋血液沿試管壁緩緩加到含有2ml淋巴細胞分離液的試管中（血液:Hanks液:淋巴細胞分離液的比例為1:1:1），沿管壁流下的稀釋血液疊加在分離液之上，並與分離液形成明顯的界面。
3. 經水平式離心2000r/min×20min，小心取出試管。
4. 用平口吸管小心吸取中層呈白色霧狀的淋巴細胞層，用Hanks溶液洗滌兩次，每次離心1500r/min×10min。
5. 棄上清，加RPMI-1640培養液1ml混勻，取少許進行細胞計數及活力測定。
（1） 細胞計數: 取1滴細胞懸液置血球計數板上，靜置片刻，顯微鏡下計數四角四個大方格內的細胞數（見圖15），按下列公式計算出細胞總數。
四個大方格細胞總數 ×稀釋倍數×細胞懸液毫升數×104
細胞總數 = 4
（2）台盼藍拒染法測定細胞活力: 取4份0.2%台盼藍與1份4.25%生理鹽水混合，將台盼藍生理鹽水溶液與細胞懸液等量混合，在3分鍾之內壓片，在光學顯微鏡下計數未染色的細胞（為活細胞）與染色細胞（染成蘭色,為死細胞），計算活細胞占細胞總數的百分數。
活細胞數 ×100%。
細胞存活率＝ 活細胞數+死細胞數
6. 最後將淋巴細胞懸液用RPMI-1640培養液配成相應的細胞濃度備用。
結果
在回收細胞分離液上界面的總細胞中單個核細胞應佔90%以上（同時細胞存活率應大於90%），其中的粒細胞佔0-5%，血小板小於0.5%，紅細胞佔0-7%。
注意事項
1.抽血後在2小時內使用。
2.注意將稀釋後的血輕輕地沿管壁鋪在聚蔗糖液面上，避免破壞其界面。
3. 在收集單個核細胞時，將吸管輕輕插入單個核細胞層，沿管壁輕輕旋轉吸取細胞。
整個試驗給你 有詳細步驟的 呵呵
希望我的回答對你有所幫助