簡述食用菌菌種保藏原理及方法

A. 為什麼要進行菌種的保藏工作

菌種保藏是食用菌菌種生產中的一項必不可少的重要環節。獲得一株優良的菌株是很不容易的，但又不可能一勞永逸。因為一個優良菌株在長期保存和應用過程中，如果保藏設備和手段不適宜，或傳代次數過多，培養時間過長，或因受不利外界環境條件的影響，常會導致種性衰退甚至死亡。因此，需在一定時間內使菌種的生活力、純度和優良性狀穩定地保存下來，就必須採取相應的措施，認真做好菌種的保藏工作。菌種保藏前，必須種性清楚、來源正宗、名稱准確，具一整套有關技術數據和資料，並處於良好狀態。

菌種保藏工作要有專人負責，每個生產單位都要有自己的菌種檔案，詳細記錄菌種來源、移植經過、保藏情況和在生產上使用的結果。管理人員要定期檢查保藏情況，及時清除已被污染的菌種。使用菌種時，在任何情況下，都不應將保藏的菌種全部用完。菌種的標簽，要字跡清楚，可長期保留，字跡模糊或沒有標簽的菌種最好不要使用。對保藏的菌種，至少兩年要做1次出菇試驗，從生長情況和經濟性狀上綜合考察保藏效果。

作為普通菌種生產企業和食用菌栽培者，由於條件、設備和技術水平的限制，常常只是菌種的貯藏。

B. 食用菌制種技術的菌種保藏

一個優良菌株被選育出來以後，必須保
持其優良性狀，防止雜菌污染，才不致降低生產性能。因此保藏好菌種，對研究和生產食用菌都具有十分重要的意義。菌種保藏的方法有斜面低溫、沙土管、液體石蠟封藏、冷凍真空及液氮超低溫等。
斜面低溫保藏法
這是最簡單最普通的保藏方法，即將菌種在適宜的斜面培養基上培養成熟後，置於4—5'C的低溫下保藏，以後每隔2～3個月轉管一次。此法適用於除草菇外的所有食用菌菌種。草菇對低溫忍耐力差，它的菌絲體在5 0C下即易死亡，因此草菇菌種應保藏在lo～13'(2的環境中。若需置於4～5℃的低溫下保藏，應在草菇菌苔上灌注3～4mL的防凍劑。一般生產上，草菇多採用室內常溫保藏。
低溫保藏菌種的培養基一般用營養豐富的天然培養基，如馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養基等。為防止菌種在保藏過程中產生酸過多，在配製保藏用培養基時需添加少許緩沖鹽，如磷酸二氫鉀(KH2P04)或碳酸鈣等。
斜面低溫保藏菌種雖然簡便，但保藏時間較短，需經常轉管，故容易發生退化現象。為了彌補這一缺點，在生產上，最好把斜面低溫保藏法與其他保藏法結合起來，以減少轉管次數。母種在第一次轉管時，盡量多移斜面試管，部分用第一次生產，取幾管作礦油保藏(或冷凍乾燥、液氮低溫保藏)，其餘則作為以後幾批生產用的母種，暫存於4～6'C低溫處，待低溫保存的菌種用完後(或超過儲存期後)，再從第一代礦油保存的菌種移出殖。這樣做能使每批生產使用的菌種都保持在前幾代的水平上，有利於菌種優良性狀的保持(圖3—1)。
液體石蠟保藏法
食用菌菌絲均可用石蠟保藏，一般可保存3年以上，但最好1—2年移接一次，即使不移接，室溫下可保藏6～8個月。用此法保藏的菌種不必置於冰箱內，室內比冰箱內保藏效果更好。
液體石蠟又名礦油，是一種導瀉劑，在醫葯商店有售。分裝於三角瓶中加棉塞封口，高壓蒸汽滅菌2～3次(每次30min)，然後經無菌檢查合格後方可使用。由於高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入，需在4'C溫箱或烘箱中烘烤8～10h，使水分蒸發。用無菌吸管將滅菌石蠟加入要保藏菌種斜面試管內，用量要高出斜面尖端約lcm。將棉塞齊口剪平，再用蠟密封管口。
使用礦油保藏菌種時，不必倒去礦油，用接種工具從斜面上取一小塊菌絲先在無菌水
中洗滌，然後移接於斜面培養基上即可。原母種可重新封口繼續保藏。
沙土保藏法
此法是將食用菌孢子保藏於乾燥的無菌沙土中，保藏期為2一10年。具體方法如下：
1．取河沙過篩(60～80目篩子)，除去大沙粒，用10%的鹽酸浸泡以除去有機物。鹽
酸用量以淹沒沙面為宜。浸泡2～4h後，倒去鹽酸，用水洗幾次，直到接近中性，烘乾或曬
干。
2．沙與土比例以2 ：l～4 ：1為宜，沙過多影響菌種保藏質量，土過多時易結塊，接
種後抽干困難。
3．把干沙、土按比例混合壓裝於安瓿管或小試管，裝入量以0.5～lcm為宜，加棉塞，
高壓蒸汽滅菌(壓力在0．15MPa)滅菌3次，每次30min，乾熱滅菌(160℃，2h)。待無菌檢
查合格後(取少許干沙土放入牛肉湯培養液中，無菌生長)方可使用。
4．用接種環將孢子接於沙土管中拌勻即可。或將孢於接於5mL無菌水的試管中，
充分播勻成孢於懸液，然後用lmL無菌吸管吸取孢子懸液加入沙土管中(每管加0.2mL)
即可。
5．將接種後的沙土管置於盛有乾燥劑(生石灰、氯化鈣或硅膠)的容器內，接上
0．5KW的真空泵抽氣約8h，使沙土基本乾燥。
6．經抽樣檢查，證明無雜菌生長，即可封口進行保藏。
四，真空冷凍乾燥保藏法
此法是採用真空、乾燥和低溫三種手段來保藏菌種，因此菌種保藏期長達10～20年 後仍不降低其原有性能。
冷凍乾燥保藏的基本方法是將需要保藏的孢子懸液裝在特製的安瓿管中，然後驟然 冰凍，並立即抽成真空，使培養物以固體形態升華脫水，熔封後在低溫或室溫下保藏。
試驗證明，用此法保藏蘑菇、香菇、側耳和金針菇等食用菌的孢子和銀耳的芽孢子3 年，全部存活，直至8年後仍有90%存活。可見用此法保藏食用菌孢子至少可存活8年。 但此法不能用來保藏不長孢子的菌類。
其他保藏方法
（一）液體超低溫保藏法
試驗證明，用一130～一196℃液體氮超低溫冰箱能保藏所有食用茵菌種，包括一些不 能用冷凍乾燥保藏的菌種，甚至「怕冷」的草菇以10%甘油和5%～10%二甲基碸做保護 劑，居然也能在超低溫冰箱中保藏。由於超低溫能使代謝水平降到最低限度，因此菌種基 本上不發生變異。
在啟用液氮超低溫保藏的菌種時，應先將安瓿管置於35～40℃的溫水中，使管中的 冰塊迅速溶解，然後再啟安瓿管，取懸浮的菌絲塊移植在培養基上活化培養。
（二）菌絲球生理鹽水法
先將食用菌菌種用液體振盪培養3～7天，然後將形成的菌絲球吸入裝有5mL無菌 生理鹽水的試管中，每管約移人4—5個菌絲球。試管用無菌橡皮塞塞上，並用蠟封口，置 室溫或4℃下保藏。一般可保藏1～2年。
（三）麥粒菌種保藏法
麥粒菌種保藏法是利用麥粒作培養料。用於保藏菌種的麥粒，含水量在25%左右， 這樣的麥粒，在滅菌後種皮不破裂。製作方法；先將小麥浸水5h，濾去水後晾乾麥粒表面 的水分，裝入小試管，裝入量為試管高的l/3；高壓蒸汽滅菌(壓力0.15MPa)滅30min；冷卻後接人孢於液或菌絲懸浮液，搖勻後置於適溫培養。當試管中的麥粒發滿菌絲後，放人 裝有氯化鈣的乾燥器內，進行抽氣乾燥，乾燥後，將乾燥器放於低溫(20℃以下)處保藏。 此法保藏菌絲，經1～2午後，再接到培養基上，菌絲生長仍然良好。