流式細胞儀的使用方法

『壹』 流式細胞儀測定細胞周期各時相的原理和基本步驟（不用說具體使用的量）

在細胞培養液中加入模擬核苷酸EdU （比較老的方法也可以用BrdU）。培養一小時 後，更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取並整合入新合成的DNA。

培養一段時間後（一般小於一個細胞周期），固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改變緩沖液的pH值，就會發出熒光。而BrdU則需用熒光抗體識別，需要對細胞膜和核膜進行通透處理。

再加入PI對DNA染色。

在二維坐標圖上，橫坐標設為線性PI熒光強度，縱坐標設為模擬核苷酸的熒光強度（log）。

典型的圖就像下面一樣：

G1, G2 和S期就按照圖中的劃分來做。G1期的細胞沒有新合成DNA，所以BrdU信號是陰性，而PI的信號位於1倍體期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是陽性。G2期是已經合成好了2倍的DNA，所以位於2倍體期，信號是G1期的一倍。這個圖中，G1 PI信號是300， G2就是600.

『貳』 鍙浠ョ敤嫻佸紡緇嗚優浠鍋氬埌緇濆硅℃暟鍚

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『叄』 如何用流式細胞儀分析熒光強度

熒光信號由被檢細胞上標記的特異性熒光染料受激光激發後產生，發射的熒光波長與激發光波長不相同。每種熒光染料都有特定的激發波長，激發後又產生特定波長熒光。通過一些波長選擇通透性濾光片，可將不同波長的散射光、熒光信號區分開。選擇不同的單克隆抗體及熒光染料可以利用流式細胞儀同時測定一個細胞上的多個不同特徵。

（一）熒光信號測量與放大器

線性放大器用於測量信號強度變化范圍較小的信號或具有生物學線性過程的信號，如前向散射光的測量與CD3+細胞DNA指數的測量。

對數放大器用於測量信號強度變化范圍較大且其光譜信號較復雜的信號，在免疫測量中最常使用。

（二）熒光補償

依靠濾光片是不能完全阻擋干擾信號，在每兩種熒光的發射光信號中仍有不可避免的重疊現象。該重疊區越大，信號檢測的准確性越差。通常採用熒光補償的方法來消除重疊信號，保證檢測信號的准確性。