❶ 基因表達的方式有哪些
基因表達概念:就是基因轉錄和翻譯的過程。
基因表達的方式有(1)組成性表達也稱基本表達:有些基因產物對生命全過程都是必需或不可少的。這類基因在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續表達,不易受環境條件的影響,稱基本表達,更簡單來說,管家基因的表達稱為基本表達。
(2)誘導:有一些基因對環境信號應答時被激活基因表達產物增加,這種基因表達方式稱為誘導。
(3)阻遏:有一些基因對環境信號應答時被抑制,基因表達產物水平降低,這種基因表達方式稱為阻遏。
❷ 常用於研究基因表達的分子生物學技術
首先,基因表達是基因轉錄和翻譯的過程,大多數基因表達都經歷「轉錄→翻譯→蛋白質」的過程,因此研究基因表達就是檢測mRNA和蛋白質。DNA印跡,是通過雜交檢測DNA的缺失、插入的方法;RNA印跡和反轉錄PCR分別通過雜交、逆轉錄和PCR檢測mRNA的方法;Weasten印跡,是通過雜交蛋白質的方法。
所以常用的基因表達分子生物學技術有:RNA印跡和反轉錄PCR,Weasten印跡。
❸ 列舉兩種研究基因表達模式的方法並簡述其原理
1、經典的半定量RT-PCR和實時熒光定量RT-PCR。提取總RNA,通過光度計和電泳法檢測質量並定量,採用反轉錄試劑盒進行反轉錄。對於半定量RT-PCR,採用內標基因(如25SRNA)引物對各樣品進行普通PCR擴增和電泳,證明反轉錄成功,並通過調整加入的總cDNA第一鏈的量,使各樣品間內標擴增條帶亮度達到一致。然後以此總cDNA第一鏈的模板量進行目標基因的普通PCR擴增,電泳後通過條帶有無和亮度強弱來比較各樣品間(器官組織間、發育階段間、誘導時間間等)目標基因表達的水平的差異性或變化動態。對於實時熒光定量RT-PCR,反轉錄完成後,通過內標基因或其它基因的擴增證明反轉錄成功,然後直接對內標基因和目標基因進行實時熒光定量PCR擴增,通過儀器自動檢測Ct值來比較各樣品間目標基因表達水平的差異性或動態變化。
2、晶元雜交法和SAGE法。將各樣品的總RNA反轉錄得到的總cDNA進一步合成為雙鏈總cDNA,用適當的酶切處理,得到小片段,然後與晶元雜交,電腦對不同樣品間相同基因的雜交信號強度進行疊加處理,自動分析出各樣品間各基因表達水平的表達差異性或變化動態。SAGE (serial analysis of gene expression)是基因表達系列分析,將各樣品總cDNA採用適當酶切,得到短片段,然後互相連接成800bp左右的串聯體,然後測序,然後採用電腦自動統計各基因被測序到的次數,以此表示各樣品內各基因表達的豐度,然後比較各樣品間各基因表達水平的差異性或動態變化。
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