ena常用的篩選方法

❶ 檢驗技師考試《免疫檢驗》重要考點

2017年檢驗技師考試《免疫檢驗》重要考點匯總

免疫檢驗是臨床檢驗技師考試的科目之一。你知道臨床檢驗技師考試免疫學檢驗都考哪些知識嗎?下面是我為大家代碼的免疫檢驗科目考試重點匯總，歡迎閱讀。

免疫檢驗科目考試重點匯總

0、免疫學檢測技術的基礎是抗原抗體反應。

1、免疫：是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能

2、免疫防禦(對外);免疫自穩(防自身免疫病);免疫監視(防腫瘤)。

3、中樞免疫器官：骨髓、胸腺;外周免疫器官：淋巴結、脾臟(最大)、黏膜相關淋巴組織

4、B細胞：通過識別膜免疫球蛋白來結合抗原，介導體液免疫;B細胞受體=BCR=mIg

表面標志：膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受體、補體受體、EB病毒受體和小鼠紅細胞受體。

成熟B細胞：CD19、CD20、CD21、CD22 (成熟B細胞的mIg主要為mIgM和mIgD)同時檢測CD5分子，可分為B1細胞和B2細胞。

B細胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗(體液免疫功能)。

5、T細胞：介導細胞免疫。共同表面標志是CD3(多鏈糖蛋白);輔助T細胞的標志是CD4;殺傷T細胞的標志是CD8;T細胞受體=TCR。

T細胞和NK細胞的共同表面標志是CD2(綿羊紅細胞受體);

CD3+CD4+CD8- = 輔助性T細胞(Th)

CD3+CD4-CD8+ = 細胞毒性T細胞(Tc或CTL)(T細胞介導的細胞毒試驗)

CD4+CD25+ = 調節性T細胞(Tr或Treg)

T細胞功能檢測：植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)刺激T細胞增殖。增殖試驗有：形態法、核素法。

T細胞亞群的分離：親和板結合分離法，磁性微球分離法，熒光激活細胞分離儀分離法

*E花環試驗是通過檢測SRBC受體而對T細胞進行計數的一種試驗;

6、NK細胞：具有細胞介導的細胞毒作用。直接殺傷靶細胞(腫瘤細胞和病毒感染的細胞)

表面標志：CD16(ADCC)、CD56。

測定人NK細胞活性的靶細胞多用K562細胞株，而測定小鼠NK細胞活性則常採用YAC-1細胞株。

7、吞噬細胞包括：單核-吞噬細胞系統(MPS，表面標志CD14，包括骨髓內的前單核細胞、外周血中的單核細胞和組織內的巨噬細胞)和中性粒細胞。(表達MHCⅡ類分子)

8、人成熟樹突狀細胞(DC)(專職抗原呈遞功能)：表面標志為CD1a、CD11c和CD83。

9、免疫球蛋白可分為分泌型(sIg，主要存在於體液中，具有抗體功能)及膜型(mIg，作為抗原受體表達於B細胞表面，稱為膜表面免疫球蛋白)

10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五類(按重鏈恆定區抗原性(CH)排序)

免疫球蛋白含量測定：單向環狀免疫擴散法、免疫比濁法。

11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位於恆定區(CH、CL)

12、抗體由漿細胞產生。抗體分子上VH和VL(高變區)是抗原結合部位。

13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高)，血液和細胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應答的主要抗體，是唯一能通過胎盤的抗體，大多數抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG，某些自身抗體及超敏Ⅱ型抗體是IgG，免疫學檢測中第二抗體也以IgG為主。

14、IgA：分血清型(單體存在)及分泌型;分泌型IgA(sIgA)為二聚體，性能穩定，主要存在於胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，局部濃度高，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。

15、IgM：為五聚體，主要存在於血液中，是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個體發育最早合成和分泌的抗體。抗原刺激後體液免疫應答中最先產生的抗體，感染過程中血清IgM水平升高，說明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高，提示有宮內感染。

16、IgE：為單體結構，正常人血清中含量最低。IgE為親細胞抗體，介導Ⅰ型超敏反應。特異性過敏反應和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。

17、補體：具有酶樣活性的球蛋白(肝細胞、巨噬細胞產生);激活途徑主要有三種：經典途徑(以結合抗原後的IgG或IgM類抗體為主要激活劑(雙鏈DNA)，C1～C9全部參與)、替代途徑(病原微生物細胞壁成分(脂多糖)直接激活補體C3，然後完成C5～C9的激活過程)、MBL途徑(由急性炎症期產生的甘露糖結合凝集素(MBL)與病原體結合後啟動激活)。

18、補體系統中C3含量最多，C2含量最少。

19、滅活：加熱56℃30分鍾，補體喪失活性

20、補體清除免疫復合物的方式：吞噬調理;免疫粘附;免疫復合物抑制。

21、完全抗原=反應原性+免疫原性。半抗原=反應原性(無免疫原性)

22、抗原抗體結合力(分子間引力)：靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力(最強)

23、抗原抗體反應的四大特點：特異性、可逆性、比例性、階段性;受反應條件(如溫度、pH、電解質、抗原抗體比例等)的影響。

24、抗體過量——前帶;抗原過量——後帶(鉤狀效應)

25、抗原抗體反應可分為兩個階段：第一階段為抗原與抗體發生特異性結合的階段，此階段反應快，僅需幾秒至幾分鍾，但不出現可見反應;第二階段為可見反應階段，此階段反應慢，往往需要數分鍾至數小時。

26、顆粒性抗原出現凝集反應。可溶性抗原出現沉澱反應。單價抗原與相應抗體結合不出現沉澱現象。

27、木瓜酶水解IgG為2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG為F(ab)2+nFc。

28、最常用於免疫動物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑(弗氏不完全佐劑加卡介苗)和弗氏不完全佐劑兩種。

29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他動物免疫產生的抗體，抗原抗體反應比例合適范圍較寬，適於作診斷試劑。

H(馬)型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療。

30、抗血清常見保存條件：2-8℃保存;冷凍保存(最常用);真空乾燥保存(5-10年)。

31、雜交瘤細胞放入液氮(-196℃)前，需要逐步降溫。復甦細胞時，從液氮罐內取出凍存管，立即浸入37℃水浴。

32、凝集反應分為兩個階段：①抗原抗體的特異性結合;②出現可見的顆粒凝聚。

33、直接凝集反應的原理是細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當的電解質(0.85%氯化鈉)參與下可直接與相應抗體結合出現凝集。抗原=凝集原，抗體=凝集素。

34、玻片凝集試驗：主要用於抗原的定性分析，AB0血型的測定。

試管凝集試驗：肥達氏試驗、外斐試驗、輸血交叉配血試驗;

35、紅細胞包被抗原，用以檢測抗體的血凝反應，稱為正向間接血凝反應(PHA)。

紅細胞包被抗體，用以檢測抗原的血凝反應，稱為反向間接血凝反應(RPHA)。

36、間接血凝抑制試驗：可用於檢測抗體、自身抗體、變態反應性抗體，也可測定抗原。

37、金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)

38、血凝試驗可在微量滴定板或試管中進行，將標本倍比稀釋，一般為1:64，同時設不含標本的稀釋液為對照孔。凡紅細胞沉積於孔底，集中呈一圓點的為不凝集。如紅細胞凝集，則分布於孔底周圍。

39、明膠凝集試驗(間接)：HIV-1抗體和抗精子抗體檢測

40、抗球蛋白試驗，又稱Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗(檢測紅細胞上的不完全抗體)和間接Coombs試驗(游離在血清中的不完全抗體)

41、沉澱反應分兩個階段：第一階段為抗原抗體發生特異性結合，幾秒到幾十秒即可完成，出現可溶性小的復合物，肉眼不可見。第二階段為形成可見的免疫復合物，約需幾十分鍾到數小時才能完成，如沉澱線、沉澱環。

42、免疫比濁：最適pH為6.5～8.5，磷酸鹽緩沖液。

43、對流免疫電泳：抗體流向負極，抗原流向正極

44、免疫固定電泳也用予尿液中本-周蛋白的檢測及κ、λ分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。

45、RIA(放免)核素(125Ⅰ)標記抗原，競爭抑制(標記抗原和非標記抗原競爭限量抗體);IRMA(免疫放射)核素標記抗體，非競爭結合(過量標記抗體，反應速率比RIA快，靈敏度明顯高於RIA。)

RIA可以測定大分子和小分子抗原，但IRMA則只能測定至少有兩個抗原決定簇的抗原。

46、常用的熒光素有：異硫氰酸(FITC)黃綠色，最常用;四乙基羅丹明(RB200)橘紅色;四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)橙紅色;藻紅蛋白(R-RE)橙色。其他：銪(Eu3+)

47、熒游標記蛋白的常用方法：攪拌法和透析法。

熒光抗體效價鑒定：抗原含量為1g/L時，抗體效價>1：16

48、時間分辨熒光免疫測定(TRFIA)以鑭系元素(如：銪)化合物為熒游標記物。

49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm(藍光)。

50、辣根過氧化物酶(HRP)：底物(1)鄰苯二胺(OPD)，(2)四甲基聯苯胺(TMB) ELISA中應用最廣泛的底物。

鹼性磷酸酶(ALP)：底物：對-硝基苯磷酸脂(p-NPP)

β-半乳糖苷酶(β-Gal)：底物：4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)

51、異相法：先分離，後測定;均相法：不分離，直接測。

52、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)：

必要的試劑：①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶反應的底物。

抗原測定：蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg)。只有單個抗原決定簇的小分子，則使用競爭抑製法。

抗體測定：通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法(HBsAb)、競爭法(HBcAb、HBeAb)和捕獲法(IgM)等

*待測孔最後顯示的顏色深淺與標本中的待測抗原或抗體呈正相關的是：雙抗體夾心法、雙位點一步法、間接法測抗體;

53、化學發光底物有：直接化學發光劑：吖啶酯和三聯吡啶釕;酶促反應發光劑：(標記酶HRP)魯米諾及其衍生物、(標記酶為鹼性磷酸酶)AMPPD;

54、免疫印跡實驗中常選用多克隆抗體。

55、外周血單個核細胞的分離的分層液常用：Ficoll(由上到下為血漿，單個核細胞，粒，紅)和Percoll(由上至下：死細胞，單個核細胞，淋，紅，粒)。

56、純淋巴細胞群的採集有：黏附貼壁法，吸附柱過濾法，磁鐵吸引法，Percoll分離液法。

57、T細胞和B細胞的分離：E花環沉降法，尼龍毛柱分離法

58、淋巴細胞活力測定：台盼藍染色法，死細胞為藍色。

59、CD4是HIV受體，HIV感染時CD4/CD8比值明顯降低。

60、CD4/CD8升高常見於自身免疫性疾病;而CD4/CD8降低常見於病毒感染、惡性腫瘤和再生障礙性貧血等。

61、(ELISA)雙抗體夾心法是用於細胞因子測定的最常用方法。

62、流式細胞儀：前向散射光(FS)反映顆粒的大小。側向散射光(SS)反映顆粒內部結構復雜程度、表面的光滑程度。熒光(FL)反映顆粒被染上熒光部分數量的多少。

63、免疫熒游標記最常用的熒光染料：異硫氰酸熒光素(FITC)亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。

64、臨床上常用三色熒光抗體標記將CD3-CD16+CD56+淋巴細胞確定為NK細胞。

65、AIDS患者的一個特徵性免疫診斷指標表現為：T淋巴細胞總數減少，T細胞亞群CD4Th/CD8Tc比例倒置，Th/Tc<1.0，Th細胞數量顯著下降甚至測不出，而Tc細胞數量可正常或增加，NK細胞減少或活力下降，B淋巴細胞群則處於正常范圍。

65、強直性脊柱炎——HLA-B27

66、SLE患者以IgG、IgA升高較多見。類風濕關節炎患者以IgM增高為主。

67、M蛋白(MP)是B淋巴細胞或漿細胞單克隆異常增殖(>30g/L)所產生的一種在氨基酸組成及順序上十分均一的異常單克隆免疫球蛋白。多無免疫活性，故又稱副蛋白。臨床上多見於多發性骨髓瘤、高丙種球蛋白血症、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等

68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白區帶電泳技術

M蛋白-粗篩試驗：血清免疫球蛋白定量(單向瓊脂免疫擴散法和免疫比濁法)

M蛋白-鑒定，首選方法：免疫固定電泳(IFE)技術(區帶電泳技術與特異性抗血清的免疫沉澱反應相結合)是臨床最常用的方法。

69、IgD降低見於原發性無丙種球蛋白血症、矽肺

70、CSF中的濃度：IgG>IgA>IgM。神經系統腫瘤時，以IgA和IgM升高為主。

(感染、血管病變、系統性疾病=IgG升高)

71、本-周蛋白即尿中游離的免疫球蛋白輕鏈。尿中可測得，血中呈陰性(原因是本-周蛋白分子量小，極易迅速自腎臟排出，血中含量並不升高)

72、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白，在-4℃時發生沉澱，於37℃時又復溶解。采血是冷球蛋白檢測的`關鍵，宜在體溫條件下採集和保存靜脈血。

73、補體結合試驗(CFT)，梅毒的診斷，華氏反應。

74、非均相熒光免疫測定：時間分辨熒光免疫測定法。

均相熒光免疫測定：熒光偏振免疫測定法。

75、鏈球菌感染：ASO(膠乳凝集試驗、免疫散射比濁法)

76、傷寒沙門菌有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原。肥達反應，效價≥1:80為陽性

77、卡氏肺孢菌，又稱卡氏肺孢子蟲，為類真菌。

78、Ⅰ型超敏反應：由特異性IgE抗體介導產生，其發生速度最快。(青黴素、支氣管哮喘)

提高Th1細胞活性，減少IL-4的分泌，可降低IgE的產生，阻斷IgE介導的Ⅰ型超敏反應。

參與Ⅰ型超敏反應：肥大細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜酸性粒細胞。

79、Ⅱ型超敏反應：又稱細胞毒型或細胞溶解型超敏反應，它是由靶細胞表面的抗原與相應IgG或IgM類抗體結合後，在補體(細胞溶解)、巨噬細胞(吞噬)和NK細胞(ADCC作用)參與下，引起的以細胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應。(輸血反應、新生兒溶血症、自身免疫性溶血性貧血、葯物過敏性血細胞減少症、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺功能亢進)

80、Ⅲ型超敏反應：由可溶性免疫復合物沉積於局部或全身多處毛細血管基底膜，通過激活補體，並在血小板、嗜鹼性粒細胞、中性粒細胞等的參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細胞浸潤為主要特徵的炎症反應和組織損傷。(Arthus反應、類Arthus反應、血清病、鏈球菌感染後腎小球腎炎、類風濕關節炎、SLE)/81、Ⅳ型超敏反應：又稱遲發型超敏反應(DTH)，是效應T細胞與特異性抗原結合後，引起的以單個核細胞浸潤和組織損傷為主要特徵的炎症反應。(細胞免疫)效應性CD4+Th1細胞識別抗原後活化，可釋放IFN-γ、TNF、淋巴毒素(LT)、IL-3、GM-CSF、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)等多種細胞因子。

常見Ⅳ型超敏反應性疾病：感染性遲發型超敏反應(結核分枝桿菌、病毒、原蟲)、接觸性皮炎、移植排斥反應。(結核菌素皮試、斑貼試驗)

82、變性的IgG可刺激機體產生抗變性IgG抗體(類風濕因子)

83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗體，該抗體可以縮短血小板的壽命。

84、抗乙醯膽鹼受體抗體：對重症肌無力(MG)具有診斷意義。

85、毒性彌漫性甲狀腺腫患者血清中有抗促甲狀腺激素受體(TSHR)的IgG型自身抗體。(甲狀腺功能的亢進)

86、多發性肌炎是以損害肌肉為主要表現的自身免疫性疾病，如果同時有皮膚損害，則稱為皮肌炎。

87、75%的PSS患者有抗核抗體陽性，抗Scl-70抗體是PSS的特異性抗體，80%～95%的局限性硬皮病患者抗著絲點抗體陽性。

88、自身免疫病(AID)的特徵：高滴度自身抗體，病理特點為免疫炎症損傷與抗原分布一致，能建動物模型。

89、抗DNP抗體(抗核蛋白抗體)通常完全被DNA和組蛋白吸收，是形成狼瘡細胞的因子。

90、ANA陽性的熒光現象分：核膜型、均質型、斑點型、核仁型。ANA常為自身免疫病的初篩試驗。

91、ENA是可提取核抗原的總稱，分子中不含DNA。

92、抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性。抗Sm抗體也是SLE的特異性標志之一。此兩項常為SLE確診指標。(對疑為SLE的患者，應先進行ANA和抗dsDNA抗體的檢測，當ANA和(或)抗dsDNA抗體陽性時，再作抗ENA抗體譜的檢測。如有抗Sm抗體和(或)抗RNP抗體陽性，可實驗室診斷為SLE)

93、抗核RNP抗體：為MCTD(混合性結締組織病)的診斷指標。

94、抗SSA/抗SSB抗體：為乾燥綜合征(SS)的診斷指標。(當ANA陽性而抗dsDNA抗體陰性，抗ENA抗體譜中抗SsA抗體和(或)抗ssB抗體陽性，可實驗室診斷為乾燥綜合征。)

95、抗Jo-1抗體：多發性肌炎(PM)患者常為陽性。

96、抗Scl-70抗體：進行性系統性硬皮症(PSS)的診斷指標。

97、NCA：原發性小血管炎的特異性血清標志物

98、內風濕性關節炎(RA)：自身抗體有RF、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)。

99、Farr法測定dsDNA抗體的特異性高，為公認標准法，當抗dsDNA抗體結合率大於20%時對SLE有意義。

100、抗線粒體抗體(AMA)：原發性膽汁性肝硬化

101、巨球蛋白血症：以分泌IgM的漿細胞惡性增殖為病理基礎的疾病。好發於老年男性，主要表現骨髓外浸潤，以肝、脾和淋巴結腫大為主要體征並伴有血黏滯過高綜合征，如表現為視網膜出血。(血清呈膠凍狀難以分離，電泳時血清有時難以泳動，集中於原點是該病的電泳特徵)

102、異常免疫球蛋白檢測的應用原則

初篩實驗：區帶電泳分析、免疫球蛋白定量檢測和尿本-周蛋白定性檢測。

確證實驗：免疫電泳、免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型、血清及尿中輕鏈蛋白的定量檢測。

103、HIV誘導的免疫應答

1.體液免疫應答HIV感染後，機體可產生：中和抗體、抗P24殼蛋白抗體、抗gp120和抗gp41抗體

2.細胞免疫應答：CD8+T細胞應答、CD4+T細胞應答。

104、HIV抗原檢測：核心抗原p24(ELISA)

105、免疫印跡法判斷標准為：①HIV抗體陽性：至少有兩條膜帶(gp41/gp120/gp160)或至少一條膜帶與p24帶同時出現;②HIV抗體陰性：無HIV抗體特異性條帶出現;③HIV抗體可疑：出現HIV特異性條帶，但帶型不足以確認陽性者。

CD4+T細胞計數是反映HIV感染患者免疫系統損害狀態的最明確指標。當CD4+T細胞低於500/μl，則易機會性感染;低於200/μl，則發生AIDS。

106、CEA大於60μg/L時可見於結腸、胃、肺癌。手術6周後CEA水平正常。

107、AFP——原發性肝癌。PSA——前列腺癌

108、糖類抗原有：CA125：上皮性卵巢癌和子宮內膜癌;CA15-3：乳腺癌;CA19-9：胰腺癌、結直腸癌。

109、神經母細胞瘤和小細胞肺癌(基因有P53，RB)的標志物：神經元特異性烯醇化酶(NSE)

110、排斥反應有：宿主抗移植反應(HVGR)和移植物抗宿主反應(GVHR)。

111、移植物存活與HLA配型的關系是：①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位點數越多，移植物存活幾率越高;②供、受者HLA-DR位點相配更重要，因為HLA-DR和HLA-DQ基因有很強的連鎖不平衡，DR位點相配的個體，通常DQ位點也相配;③不同地區HLA匹配程度與移植結果的關系有著不同的預測價值。

;

❷ 風濕病的免疫檢驗

風濕病的免疫檢驗

自身免疫病(AID)是指由於過度而持久的自身免疫反應導致組織器官損傷並引起相應器官病變或臨床症狀的一類疾病。風濕病是一類涉及到關節、軟骨、肌肉等結締組織的慢性疾病。下面是我為大家帶來的風濕病的免疫檢驗的知識，歡迎閱讀。

一、抗核抗體測定

(Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細胞核多種成分的自身抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。

抗核抗體(ANA)的檢查最常用於篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞內可能存在對多種抗原起反應的抗體。只有某種抗體的效價很高時，IFA才能加以鑒別。

1、homogenous(均質型)

又稱彌散型，相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見於SLE，特別是腎臟受累病人。也可見於其它結締組織病，如：風濕性關節炎，MCTD，乾燥綜合征，硬皮病，慢性活動性肝炎及原發性膽汁性肝硬變。

2、Peripheral(周邊型)

相應的抗原為雙鏈DNA，多見於活動性SLE病人。

3、Speckle(斑點型)

主要是針對ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病特有的，實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效價的抗RNP自身抗體見於MCTD，但也見於SLE。抗SSA和抗SSB抗體，見於S.S，也可見於SLE。當病人有抗SSA抗體時，通常以皮膚表現和光過敏為主。，也存在於ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關。

4、Nucleoli(核仁型)

其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見於硬皮病。

5、Centromere(著絲點型)

抗著絲點抗體(ACA)，多見於全身性硬皮病的CREST綜合征。

常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般採用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片，當加入病人血清時，病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒游標記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細胞核內亮綠色熒光。

〖參考值〗 <1:10或陰性

〖臨床意義〗

ANA陽性見於多種疾病，常用於風濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95%以上，且效價常在1：80以上。在其他風濕病如RA、系統性硬化症、皮肌炎、乾燥綜合征 (SS)、混合結締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價陽性。

〖注意事項〗

在大約1%的正常人的體內可測到低效價的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。採用Hep-2細胞檢測ANA，可見到不同的染色模型。

此外，口服避孕葯的婦女也可檢測到ANA。

二、可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen ENA)抗體

ENA是細胞內許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細胞質中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs);分布在細胞核內的稱為小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發現的有20餘種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。

(一)抗Sm抗體

Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬於SnRNP，由5個RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標記抗體。

(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體

u1RNP是u1RNA和蛋白質組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是混合結締組織病(MCTD)的重要血清標志。

(三)抗SSA抗體

SS為乾燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質復合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見於原發性乾燥綜合征患者及SLE。

(四)抗SSB抗體

SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現，又稱抗La抗體，SSB抗原屬於SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質的復合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體並存對診斷SS有特異性。

(五)抗Scl-70抗體

Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓撲異構酶I的降解產物，抗Scl-70抗體幾乎僅見於硬皮病，陽性率30%左右。

(六)抗Jo-1抗體

Jo-1抗體是組氨醯tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發性肌炎和皮肌炎的標記抗體，陽性率25-40%。

(七)抗核糖體抗體

核糖體在核仁合成，然後轉入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖體抗體陽性主要見於SLE，陽性率20-30%。

檢測以上抗體的方法主要有：對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法，免疫印跡試驗(IBT)，免疫斑點技術和ELISA法等。一般採用兔胸腺或牛胸腺提取物或細胞提取物作為抗原。近年來，應用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場。

〖參考值〗陰性

〖臨床意義〗

1. 抗n RNP抗體：見於35-40%的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達95-100%，也可見於其他風濕性疾病。

2. 抗Sm抗體：主要見於SLE及重疊綜合征，急性期病人75%為陽性。一般SLE患者30-40%陽性率。但Sm抗體陽性者90%以上為SLE，故稱之為SLE的標記抗體。

3. 抗SSA和抗SSB抗體：見於40-45%的SS病人。抗SSA抗體也可見於25%的SLE病人及其他風濕性疾病;抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關。抗SSA抗體也可見於病毒感染等非風濕性疾病。抗SSB抗體對原發性乾燥綜合征較特異，但陽性率僅27%左右。

4. 抗Scl-70抗體：一般僅見於系統性硬化症病人，陽性率20-60%。

5.抗Jol-1抗體見於30%的多發性肌炎病人及10%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗體與多發性肌炎病人間質性肺炎的發生率增加有關。

6.抗rRNP 抗體：主要見於SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經系統病變有關，多在疾病活動期出現。

〖注意事項〗

判斷試驗結果時要結合臨床表現作出評價，也應根據試驗方法來作出解釋。對流免疫電泳法和雙相擴散法敏感性低，但特異性較高;免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對減少。

三.抗雙鏈DNA抗體(Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，)

A-dsDNA 對SLE有高度特異性，是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有：①Farr¡®s法：125I-DNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物，加飽和硫酸銨使復合物沉澱，以γ計數器分別測定上清中游離及沉澱物中已結合的125I-DNA含量，可計算出血清中A-dsDNA的結合活性。

②ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清，如有A-dsDNA則結合到微孔板上，加入酶標抗人IgG，加入底物顯色後經酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。

③免疫熒光法：採用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質，加入病人血清。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結合，加入熒游標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發出綠色熒光。

④金標斑點法：雙鏈DNA包被於硝酸纖維膜上，加入病人血清，加入金標記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會顯示紅色斑點。

〖參考值〗依方法不同參考值也有不同。

Farr¡®s法：≤ 0.20 免疫熒光法：<1:10ELISA法：依試劑盒而定，一般<70u

金標法：陰性

〖臨床意義〗

A-dsDNA 陽性對 SLE 有較高的特異性。大約60%的活動性 SLE 病人會出現 A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現，但陽性率非常低，如RA、S.S。

〖注意事項〗

假陽性結果非常少見，但陰性亦不能排除SLE的診斷。

四.抗中性粒細胞胞漿抗體( Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測定

ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3( Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用於診斷Wegener 肉芽腫和系統性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測方法有IFA、ELISA、 IBT等。

〖參考值〗 陰性。

〖臨床意義〗

免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCA。cANCA產生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體 ，一般見於wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產生核周染色，是針對MPO的抗體 ，主要見於系統性血管炎病人。

在WG病人中，cANCA陽性率在活動期可達80%，且有較高的抗體效價。在緩解期抗體陽性率低，且效價下降，或完全消失。

〖注意事項〗

ANCA 陽性也可見於 Good-Pastare¡®s 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結果，還要結合其他臨床表現，試驗室檢查和組織病理學檢查才能確定。ANCA效價不能完全反應疾病的活動以及對治療的反應。pANCA 陽性不是特異性的抗MPO抗體，也可以是抗粒細胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶G等。ANCA檢測應注意排除其他自身抗體的交叉反應，如ANA。因其可產生假陽性應注意鑒別，並進行ANA檢測。

五、抗線粒體抗體(Antimitochondrial antibody,AMA)

AMA是以細胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體，無器官和種屬特異性。一般採用大鼠腎及胃作為抗原基質，採用IFA檢測，陽性可見大鼠腎和胃的細胞漿呈現細顆粒狀熒光。

採用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應分為從M1到M9九種類型，高效價的M2和M9型自身抗原與原發性膽汁性肝硬變相關。目前已有檢測M2的ELISA試劑盒供應。

〖參考值〗 陰性 >1：10 為陽性

〖臨床意義〗

AMA是原發性膽汁性肝硬化的標記抗體，陽性率達90%，並且50%患者抗體效價達1：1280或更高。此外，也可見於慢性活動性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個指標。正常人中陽性率<10%，且效價較低。

六.抗平滑肌抗體(Antismooth muscle antibody，ASMA )

ASMA是抗肝細胞膜上一種肌動球蛋白的自身抗體。這種肌動球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應。一般採用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質，陽性可見胃壁平滑肌呈現亮綠色熒光。

〖參考值〗 陰性，>1：10為陽性

〖臨床意義〗

主要見於明顯活動期的自身免疫性肝炎患者，陽性率在80%以上，效價 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性，且早於 HBsAg出現。其他疾病如傳染性單核細胞增多症、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽性率。正常人中僅有2%陽性。

七. 抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA)

ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ，抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細胞胞漿內的脂蛋白。常用檢測方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。

〖參考值〗

IHA： 血清效價 ≤1：32， >1：32為陽性，ATGA 和ATMA

ELISA：正常為陰性，P/N < 2.1，>2.1 為陽性, ATGA 和 ATMA

RIA：ATGA <30%;ATMA <15%

l〖臨床意義〗

主要見於橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者，也可見於甲狀腺瘤、惡性貧血、重症肌無力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽性率。

正常人也可檢出這兩種抗體 ，並且隨著年齡的增長，陽性率增加，特別是40歲以上婦女，可達18%左右。

應該注意到，有的患者ATGA陰性，但ATMA陽性，因此兩種抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平。

八. HLA-B27測定

HLA-B27 抗原為人類MHC I類 抗原B位點的表達產物，可分為幾種亞型。HLA -B27的檢測方法有多種，補體依賴性微量細胞毒法(CDMA);流式細胞儀法;玫瑰花法;ELISA法;等電聚焦法等。近來應用PCR法檢測HLA-B27，敏感而特異，並且可進行B27亞型的分析。

l〖參考值〗

非洲-美洲人：3-4%;l 高家索人：6-8%;l 亞洲人：1%。

〖臨床意義〗

強直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27陽性率為90-95%。大約42%的青年類風濕關節炎(JRA)存在HLA-B27，Reiter¡®s 綜合征患者陽性率大約79%。此外，腸病性關節炎、銀屑病性關節炎也有一定的陽性率。RA病人陽性率不高。

〖注意事項〗

在評價HLA-B27陽性結果時應結合臨床表現綜合考慮，不能單純依靠此結果作出診斷。

其他免疫指標及檢測

C反應蛋白(C-Reactive Protein，CRP )

CRP是一種急性時相蛋白，由肝細胞合成，可與肺炎球菌細胞壁C多糖發生沉澱反應，故稱CRP。在各種炎症的急性期或組織創傷時，血清CRP濃度急劇升高。CRP不僅可結合多種細菌( bacteria ),真菌(fungi)及原蟲(protozoal)體內的多糖物質，而且在鈣離子存在下，還可以結合磷脂醯膽鹼和核酸。結合後的復合體具有激活補體(complement)的作用。〖參考值〗 <8mg/L

〖臨床意義〗

血清CRP 升高多見於：急性、慢性細菌感染;組織損傷壞死;急性心肌梗死;各種炎症;外科手術;腫瘤浸潤;急性風濕熱和活動性類風濕關節炎，以及其它關節炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高，因此可作為病毒性感染和細菌性感染的'鑒別指標。

〖注意事項〗

CRP測定方法不同，在判定結果時應予考慮。此外，雌激素、口服避孕葯可使CRP增高，皮質激素和抗炎葯可使CRP下降。

類風濕因子(Rheumatoid Factor，RF)

RF是一種自身抗體，可與變性的IgG發生反應，與IgG 的Fc段結合。RF可分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集試驗檢測的主要為IgM型RF。RF主要見於類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis RA)，也可見於其他結締組織病及其他疾病。檢測方法有乳膠凝集試驗、致敏羊紅細胞凝集法、速率散射比濁法、ELISA法等。

〖參考值〗

乳膠法：陰性或<1：20 速率散射比濁法：<30IU/ml

〖臨床意義〗

RF見於90%以上的RA病人，效價常在1：160以上，含量多>80IU/ml。，一般方法所檢測的大部分是IgM-RF。

關於RF分型，臨床應用尚不廣泛。多數作者認為：IgM-RF效價高低可在一定程度上反映RA的活動性，但無明確的密切關系;IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節外症狀密切相關;IgA-RF見於RA、硬皮病、Felty綜合征和系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus， SLE)，也是RA臨床活動性的一個指標;IgE-RF 除RA患者外，也見於Felty綜合征和青年型RA。高水平 IgM-RF陽性病人預後較差。

從早期RA患者的X線片分析，IgM-RF持續陽性的病人更易發生骨侵蝕。IgA-RF在SS病人中陽性率較高;IgE-RF在惡性關節炎病人中陽性率較高。在RA病人，高效價RF存在並伴有嚴重的關節功能受限時，常提示預後不良。

〖注意事項〗

正常人也可有4%左右的陽性率。隨年齡增加，RF的檢出率會增加。RA病人RF也可陰性，不能單純依靠RF陽性來診斷RA。RF還可見於其它多種疾病，其中最常見的是乾燥綜合征(S.S)， 發生率在90%以上，且含量一般較高。其它常見的RF陽性的疾病有： SLE、系統性硬化症、高球蛋白血症、結節病、梅毒、麻風、病毒感染、肝硬化等等。有些效價可在1：160以上，含量在80IU/ml以上，在解釋結果時應予注意。

冷球蛋白(Cryoglobulin CG，)

冷球蛋白是一種球蛋白，4℃時發生沉澱，30 ℃易聚合，37℃又溶解。CG分為三類：

1.I型(單克隆型)：大多為IgM或IgG 型，無抗補體作用。

2.II型(混合型)：兩種或兩種以上單克隆Ig混合，以IgM+IgG最常見，也可見IgA+ IgG;IgG+IgM+IgA等。有抗補體作用。

3. III型(多克隆型)： 沒有單克隆蛋白。

其檢測方法有血球壓積管法(定性)和分光光度計法(定量)。

〖參考值〗 定性法：陰性 定量法：<80μg/ml。

〖臨床意義〗

SLE 病人血清中可出現混合型CG。在血管炎、腎小球腎炎、淋巴細胞增生性疾病也可陽性。在巨球蛋白血症或多發性骨髓瘤病人伴雷諾氏現象時與I型冷球蛋白血症有關。 II型冷球蛋白血症與自身免疫病例如血管炎、腎小球腎炎、SLE、RA 和 SS 有關。在某些感染如肝炎、傳染性單核細胞增多症、巨細胞病毒感染和弓形蟲病也可出現。

小結:

胞漿抗體

Hep-2細胞具有許多胞漿抗原。如有特異性胞漿抗體存在，可出現強陽性胞漿熒光。包括抗線粒體抗體(AMA)、抗核糖體抗體、抗肌動蛋白抗體即抗平滑肌抗體(ASMA)、抗高爾基體抗體、抗絲抗體(如Vimentin)。一般最有意義的是AMA和ASMA，可是熒光染色Hep2細胞卻不能鑒定這兩種抗體，可應用鼠腎和鼠胃切片作進一步分析。

系統性風濕病活動期的評價

自身抗體檢測以診斷全身性疾病比監測該病活動更有意義。但抗dsDNA抗體效價卻與活動性有關。應定期檢測抗dsDNA抗體的效價及C3、C4的含量。以及測定循環免疫復合物(CIC)的含量。ESR和CRP在炎症反應時常常升高。RA病情加重時，CRP明顯增高。SLE活動期，CRP一般正常。

器官特異性自身免疫性疾病

組織抗體

許多自身抗體可採用IFA測定，用鼠腎和胃的切片能測出抗線粒體、平滑肌、肝腎微粒體和胃壁細胞的抗體。甲狀腺組織切片可測定抗甲狀腺自身抗體。

自身免疫性肝病

在肝臟病變中，ANA陽性率可達40-80%。抗線粒體抗體(AMA)與原發性膽汁性肝硬變有關。特別是高效價的M2和M9線粒體抗原。

約一半的自身免疫性肝炎的病人有較高效價的ASMA。此外，肝腎微粒體抗體(LKMAs)，抗可溶性肝抗原(SLA)抗體，抗肝細胞膜抗體等也可用於自身免疫性肝病診斷和監測。

其他

腎臟疾病常測定的抗體有抗dsDNA抗體，抗腎小球基底膜抗體等，還可測定CIC，以及作腎組織活檢進行熒光染色。

韋格納肉芽腫病是一種發生於上下呼吸道的壞死性血管炎，也累及腎臟，病人常死於腎和肺衰竭。檢查抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAs)是診斷指標之一。也可通過ELISA測定抗髓過氧化物酶抗體，抗蛋白酶3抗體，有助於診斷和鑒別診斷。

胃腸道疾病中，惡性貧血與抗胃壁自身抗體有關，與抗內因子抗體的相關性達75%。抗胰島細胞抗體(ICAs)，抗谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)與I型糖尿病有一定關系。重症肌無力病人可出現抗骨骼肌抗體。多發性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗體。抗心肌抗體常見於心肌梗死、心臟手術或心肌損傷後。

;