㈠ 基因工程技術中如何把重組基因導入受體細胞
基因工程中常用的受體細胞有大腸桿菌,枯草桿菌,土壤農桿菌,酵母菌和動植物細胞等。
用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞,主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。例如,如果運載體是質粒,受體細胞是細菌,一般是將細菌用氯化鈣處理,以增大細菌細胞壁的通透性,使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目的基因導入受體細胞後,就可以隨著受體細胞的繁殖而復制,由於細菌的繁殖速度非常快,在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。
㈡ DNA重組體是怎樣引入受體細胞的
重組體DNA分子只有導入合適的受體細胞,才能進行大量地復制、擴增和表達。
受體細胞有多種,如原核生物的大腸桿菌細胞、低等真核細胞生物如酵母、高等真核生物(如植物細胞、哺乳動物細胞)等都可用於轉化的受體。胰島素基因工程就是將外源DNA導入原核細胞大腸桿菌中進行表達實現的。選定的受體細胞必須具備使外源DNA進行復制的能力,而且還應該能夠表達由導入的重組體分子所提供的某種表型特徵,這樣才有利於轉化子細胞的選擇與鑒定。把重組載體DNA分子引入受體細胞的方法很多,如常用的重組質粒大腸桿菌熱激轉化法、病毒DNA感染法、生物介導法等。
在理想情況下,上述重組載體進入受體細胞後,能通過自主復制而得到大量擴增,從而使受體細胞表達出供體基因所提供的部分遺傳性狀,受體細胞就成了「工程菌」。
物理方法:DNA直接注射法、顆粒轟擊技術;
化學方襲虧法:即用化學方法構建非病毒載體系統,借之完成基因轉導.主要包括:脂質體載體、受體介導法.
生拍告神物方法:主要通過構建病毒載體來完成.包括:逆轉友李錄病毒、腺病毒、 單純皰疹病毒、 腺相關病毒、 其他病毒等.
具體介紹和優缺點等可以參考網路詞條基因導入.
㈣ 將重組DNA導入細胞內有哪些方法它們的原理是什麼
(1)將重組質粒導入原核細胞稱轉化,通常用氯化鈣法使大腸桿菌細胞處於感受態,從而將外源DNA導入細胞。另一個常用方法是用脈沖高壓電瞬間處理,使外源DNA高效導入細胞,稱為電穿孔法。
(2)將重組體DNA包裝成噬菌體,使外源基因導入宿主細胞稱轉導,在適宜條件下使轉化率提高。
(3)將外源基因導入動物細胞常用方法有磷酸鈣轉染技術,電穿孔轉染技術,脂質體載體法,DEAE-葡聚糖轉染技術,顯微注射法等。將外源基因導入植物細胞常用方法是用Ti質粒將外源基因導入植物的外植體,也可將植物細胞的細胞壁消化,再用將外源基因導入動物細胞常用方法將外源基因導入原生質體,再誘導產生細胞壁。還有一個方法,是用基因槍將外源DNA射入植物組織或細胞。
㈤ 將目的基因導入受體細胞常用方法
可通過物汪轉染的方法將目的基因導入受體細胞;包括化學轉染罩猜仔法:1.DEAE-葡聚糖法,兆嫌2.磷酸鈣法,3.人工脂質體和物理方法:①顯微注射②電穿孔③基因槍等;此外還可通過輔助載體(如病毒)將目的基因導入到宿主細胞。