光鏡標本常用染色方法

① 細菌染色方法有哪些

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革蘭氏染色法
是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加於已固定好的標本上使之著色，其後加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最後用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養基成分、培養條件及操作技術等有密切關系。如塗片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時若酒精作用時間太長,
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,革蘭氏陽性菌又會染成革蘭氏陰性菌。在缺乏鎂鹽的培養基中，革蘭氏陽性菌可變成革蘭氏陰性菌。菌齡也能影響染色的結果，這與生長過程中核酸含量的改變有關。革蘭氏染色法的原理還不十分清楚，有化學學說、等電點學說、滲透性學法，目前最通常的解釋是革蘭氏陽性菌在95%酒精中因含粘肽多而導致細胞壁脫水，通透性減低，使在細菌細胞內著色的染料─碘復合物不易透出細胞壁，所以保留了紫色；革蘭氏陰性菌含粘肽少，其細胞壁在95%酒精作用下通透性變化不大，酒精容易進入菌體內溶解染料─碘復合物而透出，失去紫色後被復染成為紅色。
2
抗酸染色法
有些細菌，如結核桿菌，不般不易著色，一旦染上色後又不易被鹽酸酒精脫色，稱為抗酸菌。主要步驟是將細菌塗片、乾燥、固定後，以石炭酸復紅染液加溫進行染色，然後用含酸的酒精脫色，最後用美藍復染。一般細菌以及標本中的物質都被脫色，抗酸菌則不能，仍為紅色。在藍色背景上呈紅色的細菌即為抗酸菌。
3
細菌特殊結構的染色法
細菌的特殊結構，如鞭毛、莢膜、細胞壁、芽孢及異染顆粒等，用普通染色法不易著色，故需用特殊染色法。
4
負染色法
是指背景著色而細菌本身不著色。常用墨汁負染色法配合單染色法（如美藍）檢查細菌的莢膜，背景呈黑色，菌體染成藍色,
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,莢膜不著色，包繞在菌體周圍，成為一層透明的空圈。
5
熒光染色法
用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進行染色。細菌用熒光染料著色後在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細菌發出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細菌，有加快檢查速度和提高陽性率等優點。
求採納

② 單染色法的基本步驟有哪些有何注意事項

一、單染色法的基本步驟：

1．塗片取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水於載玻片中央，用無菌操作，分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌於二載玻片的水滴中，調勻並塗成薄膜。注意滴生理鹽水時不宜過多，塗片必須均勻。

2．乾燥於室溫中自然乾燥。

3．固定塗片面向上，於火焰上通過2—3次，使細胞質凝固，以固定細菌的形態，並使其不易脫落。但不能在火焰上敗爛侍烤，否則細菌形態將毀壞。

4．染察吵色放標本於水平位置，滴加染色液於塗片歷春薄膜上，染色時間長短隨不同染色液而定。呂氏鹼性美蘭染色液約染2-3分鍾，石炭酸復紅染色液約染1-2分鍾。

5．水洗染色時間到後，用自來水沖洗，直至沖下之水無色時為止。注意沖洗水流不宜過急，過大，水由玻片上端流下，避免直接沖在塗片處。沖洗後，將標本晾乾或用吹風機吹乾，待完全乾燥後才可置油鏡下觀察。

6．鏡檢按實驗程序進行顯微鏡觀察。

二、注意事項：

(1)載玻片要清潔無油污，否則菌液不易塗開。塗片時取培養物宜少，培養物塗層宜薄，塗層過厚則不易觀察細菌形態。

(2)乾燥和固定時，玻片不能直接在離火焰很近的位置上烘烤，否則會破壞細菌形態並使之變形，影響觀察結果。

(3)觀察時如需用到油鏡，油鏡檢查前玻片應完全乾燥，觀察後要將油鏡用擦鏡紙等徹底擦拭乾凈。

單染色法原理：

簡單染色法即只用一種染料對塗片進行染色，該法簡便易行，適用於菌體的一般形態觀察。通常情況下由於細菌菌體多帶負電荷，易和帶正電荷的鹼性染料結合而被染色，因此常用鹼性染料進行簡單染色，如美藍、鹼性復紅、結晶紫、孔雀綠、番紅等。

所有的苯胺染料，均可用來做簡單染色法的染色劑。在進行染色之前的製片過程是影響染色結果好壞的關鍵性步驟。

③ 實驗室常用的染色方法有哪幾種

印染行業的化驗室一般的都是浸染法，就是拿染液通過染色工藝把布浸染到上色，還有扎染，卷染，

④ 研究活細胞或組織最好的方法是

1(常用光鏡標本制備技術

切片標本的制備。這是最常用的方法。應用光學顯微鏡觀察機體各部的微細結構時，首先應把所有要觀察的材料製成薄片，最基本的就是切片方法，其中石蠟切片更為常用。其制備程序大致如下:

(1)取材與固定。將所要觀察的人體或動物的新鮮材料切成適當的小塊，立即浸入固定液(如甲醛溶液等)中進行固定，防止離體後結構發生變化，使其盡可能保持活體時的結構狀態。

(2)脫水與包埋。為了使石蠟能浸入組織內，把固定好的材料用乙醇等脫水，經二甲苯透明後，再浸入加溫溶化的石蠟中浸透包埋使組織塊變硬。

(3)切片與染色。將包埋的組織蠟塊，用切片機切成5-10μm左右的薄片，貼在載玻片上，脫蠟後進行染色。最常用的染色法是蘇木精和伊紅染色，簡稱HE染色。

(4)封固。在切片上滴加中性樹膠，用蓋玻片進行封固，保存備用。

在製作較硬組織(如骨組織等)或較大組織器官(如眼球)等切片，可用火棉膠代替石蠟進行浸透包埋，再進行染色。為了較好地保存細胞內酶的活性 ，可選用冰凍切片，將組織在低溫條件下快速凍結，直接切片，進行染色。

2(塗片、鋪片、磨片標本的制備

血液等液體材料，可直接在玻片上塗片，乾燥後再進行固定和染色。疏鬆結締組織和腸系膜等薄層組織，可在玻片撕開展平，製成鋪片，待乾燥後進行固定和染色。骨和牙等堅硬組織除用酸(稀硝酸等)脫鈣後再按常規製成切片外，還可直接研磨成薄的磨片進行染色觀察。

3(組織化學和免疫組織化學方法

組織化學與細胞化學是應用物理、化學和免疫學方法，對組織、細胞內某些化學成分的定性、定位和定量進行研究，從而探討與其相關的機能活動。

(1)組織化學。其原理是在組織切片上或被取材料上，加某種試劑，使它與組織或細胞內某些物質起化學反應，形成最終反應產物。光鏡組織化學要求其最終產物是有色的沉著物;電鏡細胞化學要求其最終產物是重金屬沉著物。觀察其沉著物的顏色、深淺或電子密度，可對某種物質進行定性、定位和定量。

(2)免疫細胞化學。是將免疫學基本理論與細胞化學技術相結合而建立起來的新技術。主要是應用抗原與抗體特異性結合的特點，檢測細胞內某些肽類和蛋白質等大分子物質的分布。肽類和蛋白質種類繁多，均具抗原性。提取動物的某些肽類和蛋白質，作為抗原注入另一種動物體內，則產生與抗原相應的特異性抗體(免疫球蛋白)，從血清中制備該抗體。如使抗體與熒光素結合，則形成熒游標記抗體。常用的熒光素為異硫氰酸熒光素(FITC)，當用該熒光素標記抗體處理組織切片時，則與組織內相應抗原發生特異結合，在熒光顯微鏡下呈黃綠色熒光部分，即為抗原抗體復合物，稱此為熒游標記抗體法。如抗體與辣根過氧化物酶(HRP)等酶標記，與抗原結合後呈棕紅色，可在光鏡或電鏡下觀察，此即酶標抗體法。

4(組織培養

組織培養或細胞培養是在體外研究活組織或活細胞的形態結構和生理功能動態變化的一種很有價值的研究手段，已廣泛應用於生物醫學的各個領域。組織培養是在無菌條件下進行，從機體取得的活組織或活細胞，或者長期傳代培養的細胞株，放入盛有營養液的培養基