半自動血凝儀使用方法

A. 凝血酶時間測定和凝血酶原時間測定的區別

凝血酶原時間（PT）測定和膽鹼酯酶（ChE）活力檢測各有什麼臨床意義？

凝血酶原是由肝臟合成的一種蛋白質。凝血酶原試驗是一種了解血液凝固情況的試驗，它可以反映肝臟的凝血功能。凝血酶原時間（PT）和凝血因子Ⅰ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ有關，而這些因子也均在肝臟合成。凝血酶原時間的正常值為11～15秒（奎氏法）。當肝臟出現病變、肝功能不良、上述凝血因子因合成障礙而含量降低時，即可引起凝血酶原時間延長而發生凝血障礙。如重型肝炎時，凝血酶原時間明顯延長，患者容易出血，預後較差；慢性活動性肝炎與肝硬變時，凝血酶原時間可輕度延長；肝外阻塞而無明顯肝細胞損害時，凝血酶原時間可正常。長期肝外阻塞、膽汁淤積、影響維生素K的吸收時，也可導致凝血酶原時間延長；若給患者注射維生素K時，則凝血酶原時間可恢復正常。

此外, 由於凝血酶原半衰期短，在急性重型肝炎發病後的短時間內即有凝血酶原時間的改變，故測定凝血酶原時間，對重型肝炎的診斷，病情和預後的判定，具有重要的臨床意義。

血清膽鹼酯酶，又稱「假性」或「非特異性」膽鹼酯酶，是由肝臟合成的一種特異性較差的，既可作用於乙醯膽鹼，又能作用於其他膽鹼酯類的酶。其正常值為0.80～1.00或40單位以上。

由於血清膽鹼酯酶的半衰期短，所以它是肝內損害時的一種極為敏感的、反映肝臟酶合成障礙的試驗。其活性降低的程度往往與肝病的嚴重程度相一致。如重型肝炎患者膽鹼酯酶活性值一般都較正常降低，且降低程度與病情輕重密切相關；約80％的病人，其血清膽鹼酯酶活性可降至正常值的60％，重危病人甚至下降至10％以下，此類患者多很快死亡。因此，血清膽鹼酯酶活性的測定，有助於對重型肝炎的診斷及對病情和預後的判定。此外，重度慢性肝炎和晚期肝硬變患者，血清膽鹼酯酶亦有不同程度的降低。

血栓與止血實驗室檢查的臨床重要性與日俱增，檢驗內容不斷擴大，工作量也日益增多；不斷出現的方法更新和試劑商品化、操作自動化，改變了以往靠手工操作、自配試劑、工作效率低的局面。與此同時，方法標准化和質量控制也顯得格外重要。然而，由於血栓與止血試驗的特殊性 ......

有關（凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原(FIB)測定等三項實驗）

摘要：對ICSH、ICTH或美國國家臨床生物化學委員會（NCCLS）等國際以文件形式公布的有關凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和纖維蛋白原測定等三項實驗的標准化及其重要性作了簡單敘述。

關鍵詞： 凝血酶原時間 活化的部分凝血活酶時間 纖維蛋白原 標准化

由於血栓與止血實驗的特殊性，因此迄今僅有凝血酶原時間（prothrombin time,PT）、活化的部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time,APTT）和纖維蛋白原（fibrinogen,Fg）等三項實驗有了標准化的試劑（如PT）、標准品（如Fg）、質控品和統一的報告形式等；其他，如血小板功能、抗凝因子和纖溶成分等檢測尚缺乏成熟的標准化方案。本文僅就經國際血液學標准化委員會（ICSH）國際血栓與止血委員會（ICTH）或美國國家臨床生物化學標准委員會（NCCLS）等國際組織以文件形式公布的有關PT、APTT和Fg三項實驗的標准化問題作一簡介。

一、標准化和質量控制的重要性
所謂血栓與止血檢測方法的標准化和質量控制，是指採用統計學原理，運用規范的物理、化學、生物學的方法，對血栓與止血實驗的技術、操作、儀器、試劑和標本等項的質量水平，進行合理的管理、檢測和評價，以標准化和質量控制來堵絕誤差，提高實驗的精密度、准確性和可靠性。標准化和質量控制的重要性在於：

1、為臨床診治提供可靠的依據：實驗結果的可靠性是臨床診治疾病的重要依據和條件。實驗結果若為假陽性就會造成誤診、誤治；若為假陰性就會造成漏診、漏治；實驗結果偏高或偏低都會影響患者的診斷、鑒別診斷以及影響醫師對病情和療效的判斷。

2、提高血栓與止血基礎研究的效率和價值：血栓與止血基礎研究的形式就是進行各種實驗。實驗可靠性好，就能揭示血栓與止血的客觀規律，甚至可帶來重大理論突破及（或）社會、經濟效益；若實驗可靠性差或有錯誤，則會造成假象或錯誤理論。

3、有助於人群健康調查和建立血液學參數的正常范圍：為了解一定人群的健康水平，建立具有廣泛意義的血液學參考值的范圍須進行較大規模人群的健康調查，健康調查必須要有實驗結果的可靠性作保障，不然會導致不準確或錯誤的結果，故質量控制對群體醫學也有重要意義。

總之，血栓與止血實驗室的質量控制，從一定程度上反映一個國家，一個地區，一個單位血栓與止血醫療水平和研究水平的高低。因此，應倍加重視。

二、 凝血酶原時間（PT）的標准化
自1935年Quick創建凝血酶原時間（prothrombin time,PT）測定方法以來，迄今仍然 是檢查外源凝血系統諸因子及相關抑制物的重要篩選試驗，PT也是目前口服抗凝劑治療的主要手段。但是，PT測定受多種因素影響，必須對它進行標准化和質量控制，以提高PT檢測的精密度、准確度和可靠性。

（一）凝血酶原時間（PT）的標准化問題

1、組織凝血活酶標准化：應用的國際參考品（international reference preparation IRP），有下列幾種：
（1）單一組織凝血活酶國際參考品：是一種組織提取物的生理鹽水懸液制劑。WHO在英國使用的統一標準的"英國比較凝血活酶"（British comparative thromboplastin,BCT）為基礎，制備WHO的原級凝血活酶參考品（primary reference preparation），如人腦組織凝血活酶，編號67/40。同時又以BCT67/40為基礎標化了次級參考品（secondary reference preparation）。如牛腦組織凝血活酶，編號為68/434；兔腦為70/178。後來WHO還公布了一些次級組織凝血活酶參考品，如人腦或胎盤制劑，如BCT/253；兔或兔、猴組織混合制劑，如RBT/79等。

（2）復合組織凝血活酶國際參考品：它是組織提取物的生理鹽水懸液中加入適量的纖維蛋白原、因子V 和氯化鈣組成的制劑，如牛組織凝血活酶OBT/79等。

目前世界各國都廣泛應用WHO的這些參考品來校正本國或本地區制備或生產的組織凝血活酶參考物。這樣使世界范圍內有了多種組織凝血活酶參考品。

2、組織凝血活酶工作制劑（working preparation,WP）的國際敏感度指數（international sensitivity index,ISI）
由於不同組織凝血活酶對凝血因子的敏感性不同。為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結果，必須要制定一個共同的敏感性指標。這就需要通過自製的試劑與國際參考品（IRP）進行比較，然後得出一個校正值。具體的方法如下：

（1）用國際參考品（IRP）標定國家、地區或本實驗室的參考制劑（reference preparation,RP）。
（2）用實驗室參考制劑（RP）標定工作制劑（WP）。

1）標本：2份正常人血漿和6份口服抗凝劑達6周的患者血漿，連收10天，共60份標本。

2）測定：按一定順序進行測定，每份標本重復測定2次。將PT測定的結果（秒）點在雙 對數坐標紙上，橫坐標代表WP的PT測定結果，縱坐標代表RP的PT測定結果，畫出最佳的各點擬合直線，得出定標曲線，通過WP/RP比值，或回歸方程求出斜率b。

3）計算WP的ISI值：ISI值愈接近於1.0，表明組織凝血活酶試劑愈敏感，因此，生產和出售組織凝血活酶試劑的廠商，必須在產品上標有ISI。

3、PT測定結果的報告方式：理論上，無論何種組織凝血活酶，只要標有ISI，就可與國際參考製品進行對比校正，並可用同一種計量單位報告。1985年ICSH和ICTH推薦以PT監測口服抗凝劑的報告方式是國際正常化比率（international normalizde ratio,INR）。

INR的計算公式如下： 在用INR後，各種敏感性不同的組織凝血活酶均可得到相同的INR值。

4、儀器特有有ISI：上述PT根據報告方式適用於手工法（試管傾斜法）測定PT。但是手工法與儀器法以及儀器法與儀器法測定PT的INR之間，仍有差異。研究表明，在ACL、Cobas Fibro和Coaga-Pet三台自動化儀器上，使用同一種ISI為1.12的Thromborel S試劑，測定PT的均值分別為10.7秒、12.1秒和11.1秒。但若以同一ISI值計算INR，得出的數值也存在著不同程度的差異。為此，專家們提出建議：同一組織凝血活酶試劑用於不同儀器時，可用所謂的"儀器特有的ISI"（instrument specific ISIs）或稱區域性ISI（Local ISI）來計算INR。每台儀器所使用的凝血活酶試劑都應該有特定的ISI值，重新標定ISI值的做法是購買標有INR的凍干血漿，然後在自己的儀器上再標定所使用凝血活酶試劑的ISI值，這樣才可使病人的INR具有可比性。

（二）凝血酶原時間（PT）的推薦方法

[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。

[標本來集和處理]
1、標本採集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中，輕輕混合均勻。
2、標本處理：以2000～2500g，離心15分鍾，分離乏血小板血漿，並在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕葯的婦女，採取的血漿冰凍乾燥保存或-80℃保存。

[試劑]
1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2、凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、質控物：正常及異常對照血漿
5、配製試劑用水必須符合1級純水的標准。

[儀器]
1、手工法：秒錶，保持37℃±1℃的恆溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒錶。
2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。

[操作步驟]
1、手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鍾，血漿預溫一般不宜超過10分鍾。

（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。

（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻並開動秒錶：試管仍浸於水浴中，至約10秒鍾時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配製。

（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。

[報告方式]
1、以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3、在口服華法令類抗凝葯物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：

Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值後，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。

[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服葯，在平靜休息狀態采血、以減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理，計算標准差：以兩個標准差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對於三個標准差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標准，病人（PT異常）則很少會遺漏。

三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
（一）活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如，檢測APTT的試劑中，所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標准化或試劑標准化的可行方案問世，僅NCCLS於1992年，提出一個編號為H29-T的暫行方案。

（二）活化的部分凝血活酶時間（APTT）的推薦方法

[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中，經過孵育後，加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計），即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。

[儀器]
本實驗所用儀器、設備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。

[試劑]
1、部分凝血活酶試劑：由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配製）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑，由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合，應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL（或＜30%）的血漿，出現異常延長的結果。
2、氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同。

[操作步驟]
1、樣品的採取、貯存、輸送與PT測定相同。注意，應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2、標本（去血小板的血漿）的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃，要經常檢查是否正確。
4、接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣，應嚴格按說明書要求進行。手工操作時，應用秒錶或類似的定時裝置計時。
5、操作：預溫（不超過30分鍾）APTT試劑一份與預溫（不超過10分鍾）的侍測血漿一份混合，立即開動秒錶計時；至規定的接觸活化時間終點時，加人預溫37℃的CaCl2液一份，混勻，同時開動秒錶。至出現血漿凝固時，停表，記錄血漿凝固時間（以秒計）。手工測定時應同時測定兩管，按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀，如果有適當的質控標准也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。

[參考值]參照PT

[特殊解釋]
1、對肝素的敏感性：APTT常用於肝素治療的監測，通常以患者APTT與正常血漿APTT的比率在1.5～2.5作為治療控制范圍：但不同的試劑/儀器系統對肝素的敏感性不同。其試劑/儀器系統對肝素的敏感性可進行測定。體外的敏感性（in vitro sensitlvity）是指將臨床在使用的同類型釣肝素按其治療濃度，加到正常血漿中，測定APTT。體外敏感性與體內敏感性（in vivo sensitivity）不等同，但可作參考。
2、浪瘡抗凝因子：狼瘡抗凝因子是一種抗磷脂的自身抗體，由於它抗凝血的重要成分磷脂，故能幹擾凝血。血中如存在狼瘡抗凝因子，APTT將延長。但APTT試劑對狼瘡抗疑因子的敏感性有很大差別，試劑製造廠家應提供足夠的說明，有關的國家機構也可提供對狼瘡抗凝因子的資抖。但要知道，病人個體之間也有很大差異，沒有一種試劑能測出所有狼瘡抗凝因子。

四、纖維蛋白原測定（Fg）的標准化
（一）纖維蛋白原測定（Fg）的標准化問題
纖維蛋白原（死）由肝合成，存在於血漿和體液中，其結構和功能基本已搞清，但迄今仍無理想的臨床檢測方法；文獻報道的測定方法多至10餘種，有的精密度、准確信較好，但過於復雜、煩瑣；有的雖然簡便、快速，但精密度、准確性較差。
1992年，英國國家生物標准及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一個纖維蛋白原標准品，編號為89/644，向WHO的生物標准專家委員會（ECBS）推薦，[15]並被ECBC批准為國際參考品（IRP）。從此，各國均引進這一標准品來標化本國或廠家生產的次極標准品（我國衛生部臨床檢驗中心亦已在引進）。使纖維蛋白原測定的標准化工作，走出了關鍵的一步。因此根據調查，各家標准品纖維蛋白原含量差別很大。

（二）纖維蛋白原（Fg）測定的推薦方法
各家用IRP來標化自己的標准時，推薦採用Jacobsson的改良法，現將該法介紹如下。

[試劑]
1、緩沖液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升，此為貯存緩沖液；將貯存緩沖液l份，加生理鹽水2份即為應用緩沖液，pH為6.35。
2、生理鹽水：0.15mol/L
3、人或牛凝血酶：500IU/mL，生理鹽水溶液。
4、凝塊溶解劑：尿素400g溶於少量蒸溜水中，200mL 1.Omol/L NaOH，再加水至l升。

[操作步驟]
將纖維蛋白原凍干（標准）品（源於89/644）加lmL蒸餾水復溶，加到含有2mL應用緩沖液的有機玻璃淺盤或其他容器中，再加入凝血酶液50μL，迅速混勻，在室溫中靜制置2小時。將容器倒扣於吸水的布上（其下可墊吸水紙），再用適當物質（加濾紙）將凝塊吸干。將凝塊取下，置於5OmL生理鹽水中洗滌2次，每次洗滌後均應將凝塊吸干（可用玻璃擠壓凝塊），盡量除去含於凝塊中的液體，以免液體中的其它血漿蛋白殘留。必要時可在清潔棉布上擠壓。
小心將凝塊加人含凝塊溶解劑7.5mL的容器中，搖勻，直至凝塊完全溶解。倒人光徑為1cm的比色杯中，以凝塊溶解劑為空白，在280nm和315nm波長讀取吸光度（A）。

（三）適用的纖維蛋白原（Fg）測定（Clauss法）

[原理]
將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，血漿便出現凝固。在有足量的凝血酶時，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現血漿凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負相關。

[試劑]
1、牛凝血酶l00NIHU/mL
2、纖維蛋白原標准品（IRP次級標准）
3、緩沖液（下列兩種任選一種）：
（1）巴比妥緩沖液（PH7.5）；巴比妥2.5g，巴比妥鈉2.75g，璐氯化鈉7.3g溶於750mL去離子水中，校正至PH7.5，加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole，或Glyoxaline）緩沖液：咪唑3.4g（0.05mol/L），氯化鈉5.85g，加於約500mL水中；加O.1mol/L鹽酸186mL，調PH至7.3-7.4，最後加蒸餾水至1升。

[操作步驟]
1、手工法
（1）用上述緩沖液先將標准品稀釋成0.8，1.6，2.4，和4.0g/L纖維蛋白原濃度，各濃度再用緩沖液作1:10稀釋。
（2）患者血漿及質控物用緩沖液作1:10稀釋。
（3）將含100NIHU/mL，牛凝血酶，混勻後室溫保存。如用儀器法測定，則用100NIHU/mL，牛凝血酶，不必稀釋。
（4）在一試管中，加稀釋血漿0.2mL，置37℃水浴中4分鍾。
（5）加入預溫37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL，搖勻並立即開動秒錶，不斷觀察凝固時間。至出現凝固時停表。
（6）每份標本測定兩次，求平均數。同時測定各標准管和對照（質控）管，方法相同，准確記錄時間。
（7）計算：用雙對數紙作圖，以凝固時間為縱坐際、纖維蛋白原濃度為橫坐標，將各相應濃度的標准管對凝固時間，在圖上標出相應的點並連成直線，製成標准曲線。然後根據患者和質控血漿所測得的凝固時間。在圖上查到纖維蛋白原含量。
如血漿纖維蛋白原含量大於4g/L，應稀釋血漿後重測，結果乘以稀釋倍數。如血漿纖維蛋白原含量低於O.8g/L，需將原血漿改為1:2或1:5稀釋，在標准曲線上查得結果後除以5或除以2。
2.儀器法：本法可用自動或半自動凝血儀按凝血酶時間（TT）測定法測定。可自動列印出結果。一般儀器法比手工法精密度高。

B. 血凝儀的測定方法

光學法血凝儀是根據血漿凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。根據儀器不同的光學測量原理，又可分為散射比濁法和透射比濁法兩類。
散射比濁法是根據待驗樣品在凝固過程中散射光的變化來確定檢測終點的。在該方法中檢測通道的單色光源與光探測器呈90°直角，當向樣品中加入凝血激活劑後，隨樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程，樣品的散射光強度逐步增加。當樣品完全凝固以後，散射光的強度不再變化，通常是把凝固的起始點作為0%，凝固終點作為100%，把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光學的變化，將其轉化為電信號，經過放大再被傳送到監測器上進行處理，描出凝固曲線。
透射比濁法，是根據待測樣品在凝固過程中吸光度變化來確定凝固終點的、與散射比濁法不同的是該方法的光路同一般的比色法一樣呈直線安排：來自光源的光線經過處理後變成平行光，透過待測樣品後照射到光電管變成電信號，經過放大後監測處理。當向樣品中加入凝血激活劑後，開始的吸光度非常弱，隨著反應管中纖維蛋白凝塊的形成，標本吸光度也逐漸增強，當凝塊完全形成後，吸光度趨於恆定。血凝儀可以自動描繪吸光度的變化曲線並設定其中某一點對應的時間為凝固時間。 磁珠法是根據血漿凝固過程中粘度的變化來測量凝血功能的。根據儀器對磁珠運動測量原理的不同，又可分為光電探測法和電磁珠探測法。
光電探測法，在磁珠法中光電探測器的作用與光學法中不同，它只測量血漿凝固過程中磁珠的運動規律，與血漿的濁度無關。在磁珠法中的一對電磁鐵安放在測試杯的兩端，它們產生恆定的交替磁場使磁珠在測試杯中擺動，在與磁珠擺動的垂直方向安放一對光電接收裝置，當磁珠擺幅衰減到50%時確定凝固終點。
光電探測法中還有一種利用紅外光反射監測器監測磁珠運動的，下面介紹BE系列半自動血凝儀中將另加介紹。
電磁探測法又可稱為雙磁路磁珠法，其中一對磁路用於吸引磁珠擺動，另一對磁路利用磁珠擺動過程中對磁力線的切割所產生的電信號，對磁珠擺動幅讀度進行監控，當磁珠擺動幅度衰減到50%確定凝固終點。 目前市售的半自動血凝儀主要由樣品、試劑預溫槽、加樣器、檢測系統（光學、磁場）及微機組成。有的半自動儀器還配備了發色檢測通道，使該類儀器同時具備了檢測抗凝及纖維蛋白溶解系統活性的功能。針對光學式半自動血凝儀受人為的因素影響多、重復性較差等缺陷，儀器中應有自動計時裝置，以告知預溫時間和最佳試劑添加時間；在測試位添加了試劑感應器，後者感應從移液器針頭滴下的試劑後自動振動，使反應過程中血漿與試劑得以很好地混合；此外，該類儀器在測試杯頂部安裝了移液器導板，在添加試劑時由導板來固定移液器針頭，從而保證了每次均可以在固定的最佳的角度添加試劑並可以防止氣泡產生。這一系列改進，提高了光學式半自動血凝儀檢測的准確性。
一般半自動血凝儀都可進行凝固法測試，而需要用其它測試方法實現的凝血項目則可用生化分析儀、酶標儀等進行。 該類儀器的基本構成包括：樣品傳送及處理裝置、試劑冷藏位、樣品及試劑分配系統、檢測系統、電子計算機、輸出設備及附件等。
1. 樣品傳送及處理裝置：一般血漿樣品由傳送裝置依此向吸樣針位置移動，多數儀器還設置了急診位置，可以使常規標本檢測必要時暫停以服從免疫比濁法將被檢物與其相應抗體混合形成復合物，而產生足夠大的沉澱顆粒，通過透射比法或散射比濁進行測定。此法操作簡便，准確性好，便於自動化。
2. 試劑冷藏位：為避免試劑的變質，儀器往往有試劑冷藏功能，一般同時可以放置幾十種試劑進行冷藏。
3. 樣品及試劑分配系統：樣品臂會自動提起標本盤中的測試杯，將其置於樣品預溫槽中進行預溫。然後試劑臂將試劑注入測試杯中（性能優越的全自動血凝儀為避免凝血酶對其他檢測試劑的污染，有獨立的凝血酶吸樣針），帶有旋渦混合器的裝置將試劑與樣品進行充分混合後將送至測試位，經檢測的測試杯被該裝置自動丟棄於特設的廢物箱中。
4．檢測系統：這是涉及儀器測量原理的關鍵部分。檢測血漿的凝固可以通過凝固反應檢測法檢測，即當纖維蛋白凝塊形成時，檢測散射光在660nm處渾濁液吸光度的變化；或通過凝固點檢測法檢測，即計算達到預先設定好的吸光度值時的凝固時間；而磁珠法則是通過測定在一定磁場強度下小鋼珠的擺動幅度變化來測定血漿凝固點。發色底物法及免疫法是檢測反應液在405nm、575nm及800nm時的吸光度變化來反映被檢測物質的活性。
5. 電子計算機：根據設定的程序計算機指揮血凝儀進行工作並將檢測得到的數據進行分析處理，最終得到測試結果。計算機尚可對患者的檢驗結果進行儲存，記憶操作過程中的各種失誤，及進行質量有關的工作。
6. 輸出設備：通過計算機屏幕或列印機輸出測試結果。
7. 附件：主要有系統附件、穿蓋系統、條碼掃描儀、陽性樣品分析掃描儀等。

C. 醫學檢驗，APTT、T T、PT、分別是用什麼檢測的

凝血功能套餐不止PT、TT、APTT還有FIB有些大醫院還要加一項國際敏感度指數（international sensitivity index,ISI）,以確保PT的標准化。測定方法有很多：手工法，半自動，全自動，所需方法還要和當下條件相符才行，有專賣試劑的廠家，像亞中啊，金域啊，多得很，有官方網址，網路上可以查到的~以下所說，僅供參考： 凝血酶原時間（PT）的推薦方法

[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT主要用於篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。

[標本來集和處理]
1、標本採集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中，輕輕混合均勻。
2、標本處理：以2000～2500g，離心15分鍾，分離乏血小板血漿，並在24小時內完成試驗。
3、正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕葯的婦女，採取的血漿冰凍乾燥保存或-80℃保存。

[試劑]
1、抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當於含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2、凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3、氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4、質控物：正常及異常對照血漿
5、配製試劑用水必須符合1級純水的標准。

[儀器]
1、手工法：秒錶，保持37℃±1℃的恆溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒錶。
2、儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。

[操作步驟]
1、手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鍾，血漿預溫一般不宜超過10分鍾。

（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。

（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻後置37℃水浴中。再加入25mmol/L CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻並開動秒錶：試管仍浸於水浴中，至約10秒鍾時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最後混合液其pH應為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配製。

（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。

[報告方式]
1、以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2、以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3、在口服華法令類抗凝葯物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：

Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值後，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。

[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此後至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服葯，在平靜休息狀態采血、以減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理，計算標准差：以兩個標准差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對於三個標准差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標准，病人（PT異常）則很少會遺漏。

三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
（一）活化部分凝血活酶時間(APTT)的標准化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用於凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如，檢測APTT的試劑中，所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。

迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標准化或試劑標准化的可行方案問世，僅NCCLS於1992年，提出一個編號為H29-T的暫行方案。

（二）活化的部分凝血活酶時間（APTT）的推薦方法

[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中，經過孵育後，加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計），即為APTT。本法主要用於過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等。同時也用於上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。

[儀器]
本實驗所用儀器、設備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適於本實驗。

[試劑]
1、部分凝血活酶試劑：由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配製）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑，由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合，應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低於0.3μ/mL（或＜30%）的血漿，出現異常延長的結果。
2、氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同。

[操作步驟]
1、樣品的採取、貯存、輸送與PT測定相同。注意，應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2、標本（去血小板的血漿）的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3、水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃，要經常檢查是否正確。
4、接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣，應嚴格按說明書要求進行。手工操作時，應用秒錶或類似的定時裝置計時。
5、操作：預溫（不超過30分鍾）APTT試劑一份與預溫（不超過10分鍾）的侍測血漿一份混合，立即開動秒錶計時；至規定的接觸活化時間終點時，加人預溫37℃的CaCl2液一份，混勻，同時開動秒錶。至出現血漿凝固時，停表，記錄血漿凝固時間（以秒計）。手工測定時應同時測定兩管，按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀，如果有適當的質控標准也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。 不好意思TT著實沒找到，不過聯繫到權威廠家，應該就不用自己去找了~

D. 凝血酶原時間(PT) 檢測方法及使用的設備和試劑盒名稱

這個試劑盒有國產的也有進口的，國產的建議用南京建成生物公司的，很便宜，技術支持也比較到位。
貨號：F007 凝血酶原時間(PT)測試盒(2ml*10瓶) 360.00元
也有進口的。比如Human Prothrombin,PT ELISA Kit，RB的，Abnova的。這些都要在生物技術公司代購。
還有一種解決方法是找生物公司幫你們做，也是可以的。
【產品名稱】 凝血酶原時間檢測試劑盒（凝固法）
【包裝規格】 PT試劑：2.0ml×10； PT試劑溶解液：5.0ml×4
【預期用途】 本試劑盒用於體外檢測人血漿凝血酶原時間（PT）,以定性篩查外源凝血系統情況。
【主要組成成分】 PT試劑：兔腦粉鹽水抽提物（凍干品）； PT試劑溶解液：氯化鈣溶液。 【儲存條件及有效期】 1.本試劑盒2℃～8℃保存有效期為12個月； 2.復溶試劑2℃～8℃保存有效期為7天； 3.復溶試劑37℃保溫穩定8小時。
【適用儀器】 手工法或半自動血凝分析儀。
【樣本要求】 靜脈采血，1份抗凝劑（0.109mol/L枸櫞酸三鈉）採集9份全血 ，輕輕顛倒混勻，以2700g（離心半徑18cm約3500轉/分）離心10分鍾，分離血漿待測。如該血漿不能立即分析，應將其密封後於2℃～8℃保存，最長不超過4小時；或立即置－20℃以下凍存不超過一個月；-70℃以下凍存，不超過半年，用時37℃融化，避免反復凍融。
【檢驗方法】 試劑准備： 1.每瓶PT試劑准確加入2.0ml PT試劑溶解液，輕搖溶解； 2.取適量復溶後PT試劑，置37℃保溫。 實驗步驟： 1.取待測血漿或正常凝血質控血漿※0.1ml，37℃保溫3分鍾； 2.迅速加入0.2ml已預溫至37℃的PT試劑，混勻，立即計時，記錄其凝固時間，即為凝血酶原時間（PT）。） 如採用血凝分析儀測定，請參考儀器使用說明書。 ※ 該正常凝血質控血漿不包含在此試劑盒內。 結果計算： 1.凝血酶原時間秒值（PTs）：即測得的凝固時間（正常或異常血漿樣本PTs） 被檢血漿PTs 2. PT比值（PTR）= ────────── 正常凝血質控血漿PTs 3. 國際標准化比值（INR）= PTRISI
【參考范圍】 1.以PTs值表示：10～15秒。 2.以PTR表示：0.95～1.24。 3 監測口服抗凝劑，以INR表示。 註：上值僅供參考，建議各實驗室建立自己的參考值范圍。試劑、儀器操作、血樣收集技術或抗凝劑改變時，都應重新建立新的參考值范圍。
【檢驗結果的解釋】 1.與正常凝血質控血漿PTs值比較，超過3秒以上為異常。 2.PTR值超出0.95～1.24的范圍為異常。 3.監測口服抗凝劑，以INR表示。
【注意事項】 1.本品僅用於體外診斷。 2.抽血要順利，抗凝要充分，不能有血凝塊；分離血漿時，務必去除血小板。 3.保溫溫度控制在37±0.5℃，過高或過低均會影響測定結果。 4.樣品收集時不宜用EDTA、肝素或草酸鹽作抗凝劑。 5.手工測定時，觀察凝固的光線要充足。 6.抗凝劑的比例應准確，如果血球壓積小於20%或大於55%，則需調整血樣與抗凝劑的比例，方法是：0.00185×全血毫升數×（100－壓積）= 抗凝劑毫升數。 7.防止試劑被任何痕跡量的血漿污染。 8.不要測試質量可疑的樣品血漿。因為很小的血漿凝固會使凝固時間顯著縮短（所有凝血因子已被激活），而廣泛凝固又會因凝血因子和纖維蛋白原的消耗延長凝固時間。 9.凝血酶抑制劑出現在樣品中可能導致該樣品凝血酶原時間延長。 10.使用者若不慎將試劑濺在皮膚或眼睛上，應立即用水沖洗。