1. 色譜分離技術中，薄層色譜的基本操作過程及注意事項
薄層色譜操作注意事項
影響薄層色譜分析的因素有很多，比如樣品處理方法、薄層板制備技巧、點樣方法、展開劑的遴選、溫濕度的掌控等等很多方面，在這里對其操作要點作一下簡單介紹:
1鋪制薄層板：鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發後，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據經驗來定，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板塗層的厚度，進一步影響上樣量。塗層薄，點樣易過載；塗層厚，顯色不那麼明顯。通常，板的質量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配製和展開系統的飽和。
2點樣：盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹乾或放入乾燥器里晾乾。
薄層色譜用於定量時，點樣是最主要的誤差來源。
供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點樣的同時，樣品在原點就可是成環形展開，原點直徑的擴散促進了這種展開，Kaiser稱之為「上樣環形色譜效應」。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環。這種效應對隨後的先行展開造成很不利的影響。
供試液的溶劑在原點的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點吸收大氣中的水分（特別在高濕度環境）對色譜的影響也不可低估。因此點樣時的同步乾燥或繼後乾燥以除去原點殘存的溶劑是需要的。但應盡可能避免高溫加熱，如用吹風筒加熱，樣品變為固態後，部分或全部強烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進了硅膠的有催化作用的活性表面故態化學反應，導致樣品的變性（尤其熱不穩定物質），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點拖尾的原因之一）。
2. 薄層色譜法到底包括哪些啊
2010版《中國葯典》把薄層色譜法分為五點：一儀器和材料，二操作方法（包括層析板鋪制、點樣、展開、顯色檢視和記錄），三系統適用性試驗（包括檢測靈敏度、分離度和重復性），四測定法（包括鑒別、限度檢查、含測），五薄層色譜掃描法。回答完畢，採納哦～
3. 儀器分析——薄層色譜法
薄層色譜法，系將供試品溶液點樣於薄層板上，經展開、檢視後所得的色譜圖，與適宜的塌亮對照物按同法所得的色譜對比，用於葯品的鑒別或雜質檢查的方法。
1.儀器與材料
（1）薄層板
自製薄層板玻板要求光滑、平整，洗凈後不附水珠，晾乾。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF254、硅膠H和硅膠HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求直徑為5～40μm.
薄層塗布，一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種；前者系將固定相直接塗布於玻板上，後者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用10%～15％煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加熱4小時），混勻後加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%～0.5％）適量調成糊狀，均勻塗布於玻板上。使用塗布器塗布應能使固定相在玻板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
市售薄層板分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚醯胺薄膜和鋁基片薄層板等。
（2）點樣器同紙色譜法項下。
（3）展開容器應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，並有嚴密的蓋子，底部應平整光滑，或有雙槽。
（4）顯色劑見各品種項下規定。可採用噴霧顯色、浸漬顯色或置碘蒸氣中顯色，檢出斑點。
（5）顯色裝置噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的玻璃缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的乾燥器代替。
（6）檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光（254nm）、長波紫外光（365nm）光源及相應濾片的暗箱，可附加攝像設備供拍攝圖像用，暗箱內光源應有足夠的光照度。
2.操作方法
（1）薄層板制備
自製薄層板除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡後，倒入塗布器中，在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布（厚度為0.2～0.3mm），取下塗好薄層的玻板，置水平台上於室溫下晾乾後，在110℃活化30分鍾，即置有乾燥劑的乾燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。
市售薄層板臨用前一般應在110℃活化30分鍾。聚醯胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據需要剪裁，但須注意剪裁後的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質污染，使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預洗，110℃活化後，放乾燥器中備用。
（2）點樣除另有規定外，用點樣器點樣於薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑為2～4mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，一般為1.0～2.0cm。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。
（3）展開展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼兩條與缸團戚寬一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統平衡或按各品種正文規定操作。［醫學教育 網搜集整理］
將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾乾，按各品種項下的規定檢測。
展開可以向一個方向進行，即單向展開；也可以進行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，待展開劑完全揮發後，將薄層板轉動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開；亦可多次展開。
（4）顯色與檢視熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，如有色物質可直接檢視；無色物質可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度；化學方法一般用化學試劑顯色後，立即覆蓋同樣大小的玻板，檢視。
3.系統適用仔輪性試驗來源：www.examda.com
按各品種項下要求對檢測方法進行系統適用性試驗，檢測斑點的檢測靈敏度、比移值（Rf）和分離效能應符合規定。
（1）檢測靈敏度系指雜質檢查時，採用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，前者應顯示清晰的斑點。
（2）比移值（Rf）系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比率。
可用計算供試品溶液主斑點與對照品溶液主斑點的比移值進行比較，或用比移值來說明主斑點或雜質斑點的位置。
（3）分離效能鑒別時，對照品與結構相似的葯物對照品製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質檢查時，雜質對照品用供試品自身稀釋對照溶液或同品種對照品溶液溶解製成的混合對照溶液應顯示兩個清晰分離的斑點，或待測成分與相鄰的雜質斑點應清晰分離。
4．測定法來源：考試大
（1）鑒別可採用與同濃度的對照品溶液，在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置（Rf）應與對照品溶液的主斑點一致，而且主斑點的大小與顏色的深淺也應大致相同。或採用供試品溶液與對照品溶液等體積混合，醫學 教育 網搜集整理 應顯示單一、緊密的斑點；或選用與供試品化學結構相似的葯物對照品與供試品溶液的主斑點比較，兩者Rf應不同；或將上述兩種溶液等體積混合，應顯示兩個清晰分離的斑點。
（2）雜質檢查可採用雜質對照品法、供試品溶液的自身稀釋對照法或雜質對照品法與供試品溶液自身稀釋對照法並用。供試品溶液除主斑點外的其他斑點應與相應的對照品溶液或系列對照品溶液的主斑點比較，或與供試品溶液的自身稀釋對照溶液或系列自身稀釋對照溶液的主斑點比較，不得更深。
通常應規定雜質的斑點數和單一雜質量，當採用系列自身稀釋對照溶液時，也可規定估計的雜質總量。