鑒定單克隆技術常用的方法

⑴ 單克隆抗體的鑒定實驗

1．雜交瘤細胞染色體的檢查採用秋水仙素裂解法進行。2．單克隆抗體的類型、亞型的測定：購買兔抗小鼠Ig類型和亞型的標准抗血清，採用瓊脂擴散法或ELISA夾心法測定單抗的Ig類型和亞型。
ELISA夾心法測定單抗的Ig類型和亞型的試劑盒說明書 1、首先將試劑盒恢復室溫（大約30分），然後用純水把清洗液配成工作濃度（一份濃縮清洗液加19份純水）。
2、取出酶標板。每個標本需要6孔，陽性對照6孔。多餘的用自封袋保存，記得放入乾燥劑。
3、將細胞培養上清（或特異親和純化的抗體）50μl加入酶標微孔板，每個標本加6孔，陽性對照也是加6孔每孔50μl。然後每孔再加入50μl標本稀釋液。貼上封板膜37℃溫育30分鍾。
4、棄去板內液體，洗板5遍後在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標本的6孔中分別加入6種酶標二抗各100μl，通用陽性對照的6孔也一樣。在加樣圖上或酶標板上做好標記。貼上封板膜37℃溫育30分鍾。
5、吸棄板內液體，洗板5遍後在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入顯色劑A和顯色劑B各50μl，換一張新的封板膜貼板避光37℃顯色20分鍾。
6、本試劑盒特異性好一般肉眼即可觀察出結果，看顯色藍的那個孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。更可將反應終止液（每孔50μl）終止反應後用酶標儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結果，參看高值孔所對應的酶標二抗就知道此標本的Ig類或亞類。陽性對照0D小於0.5實驗無效，需要重做。 1、雖然本試劑盒過期後很久還有使用價值但還是請您在有效期內使用。
2、在檢測腹水類單抗時要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但並不建議您這樣做。此類樣品成分十分復雜，有干擾結果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結果。
3、手洗板子時一定要把孔加滿，停留10秒然後棄盡，最後要拍干凈。特別是在酶標二抗溫育後洗板時一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個在手工洗板時對結果很重要。
4、一次沒用完的板子要帶乾燥劑放自封袋封好，隨盒存放。
5、拿放板子時不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現錯誤結果。
6、出現異常結果請隨時咨詢我們。
3．單抗的特異性鑒定可以採用各種方法，如免疫熒光法、ELISA法、間接血凝和免疫印跡技術等，同時還需做免疫阻斷試驗等。
4．單抗的效價測定可採用凝集反應、ELISA或放射免疫測定。不同的測定方法效價不同。培養上清液的效價遠不如腹水的效價。採用凝集反應，腹水效價可達5×104。而採用ELISA檢查，腹水效價可達1.0×106。單抗的效價以培養上清和腹水的稀釋度表示。
5．必要時還可以測定單抗的親和力和識別抗原表位的能力測定。

⑵ 如何篩選動物單克隆抗體

單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.
第一次篩選的原理與方法：細胞融合後,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍採用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）.其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（「D途徑」）,即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料.在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養液中氨基喋呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的「D途徑」.另一條途徑是應急途徑或補救途徑（「S途徑」）,它是利用次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應的核苷酸,兩種酶缺一不可.因此,在HAT培養液中,未融合的效應B細胞和兩個效應B細胞融合的「D途徑」被氨基喋呤阻斷,雖「S途徑」正常,但因缺乏在體外培養液中增殖的能力,一般10d左右會死亡.對於骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由於通常採用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型（HGPRT）細胞,因此自身沒有「S途徑」,且「D途徑」又被氨基喋呤阻斷,所以在HAT培養液中也不能增殖而很快死亡.惟有骨髓瘤細胞與效應B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應B細胞的「S途徑」,又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性,因此能在HAT培養液中選擇性存活下來,並不斷增殖.
第二次篩選的原理和方法：在實際免疫過程中,由於採用連續注射抗原的方法,且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞,因此,從小鼠脾臟中取出的效應B淋巴細胞的特異性是不同的,經HAT培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異,所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞.通常採用有限稀釋克隆細胞的方法,將雜交瘤細胞多倍稀釋,接種在多孔的細胞培養板上,使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數為0時,才能保證有些孔中是單個細胞）,再由這些單細胞克隆生長,最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養.

⑶ 高中生物單克隆抗體實驗總結

考試是檢測學生學習效果的重要手段和方法，考前需要做好各方面的知識儲備。下面是我為大家整理的高中生物單克隆抗體實驗總結，希望對大家有所幫助!

高中生物單克隆抗體實驗總結

(一)動物的選擇

目前應用最廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應用最廣，由於所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘導出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。

大白鼠也可，能產生較多量的單抗體。現在已經在小鼠雜交瘤的基礎上，發展了小鼠-大鼠，小鼠-人以及人-人雜交瘤技術。

(二)免疫

一般而言，抗原的純度不很重要，特別是免疫原性較強的抗原。

免疫程序、劑量和方法是關繫到是否能得到所需要的單抗體的關鍵之一。

正常小鼠脾臟含有能產生各種不同抗體的B淋巴細胞，一隻純種小白鼠估計能產生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一隻正常的小白鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤融合，只能有千萬分之一的機會獲得某一種特定抗體。所以為了進步得到某種雜交瘤的機會，必須加強免疫，使產生特異性抗體的B淋巴細胞大量增加。

B淋巴細胞的不同發育階段對獲得陽性雜交瘤也有很大影響。有人以為處在轉化時期的B淋巴細胞可能更易於融合，而免疫以後7~8天，固然是抗體產生的高峰時期，但形成有活力的雜交瘤細胞的可能反而減少。故一般以為加強免疫後的第三天應殺鼠取脾做細胞融合。

1.可溶性抗原(蛋白質) 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏完全佐劑乳化，分多點小鼠皮下注射，總量為0.3ml～0.6ml，間隔3～5周再同樣注射一次，10天後，斷尾取血一滴，測抗體效價，選滴度高的小鼠做融合試驗。一個月後可以經靜脈(尾靜脈)給予無佐劑抗原0.2ml～0.4ml，3～4天後，殺死小鼠取脾做融適用。

2.顆粒性抗原 如抗原來源方便，可以不加佐劑而增加免疫次數，縮短間隔時間。例如用羊紅血球免疫小白鼠，以1%濃度每隻皮下注射0.2ml，每周2次，共免疫5～8次，取脾前3天，再免疫一次即可。有人以為最後一次免疫劑量要大，大到近於免疫耐受的程度更好。

單抗技術是主要由抗原制備，免疫動物，細胞融合，篩選雜交瘤細胞，克隆化培養，單克隆抗體的大量制備與鑒定等一系列實驗組成的實驗系統，其核心部分是細胞融合。細胞融合是單克隆抗體技術的中心環節，基本步驟是將脾細胞和骨髓瘤細胞混合後加入PEG使細胞彼此融合。

實驗原理:B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂;而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合後，用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產生抗體，又能無限增殖，並以此生產抗體的技術。

實驗方法

材料：Balb/c小鼠，SP2/0骨髓瘤細胞，50%PEG，不完全培養液，HAT培養液，75%酒精，剪刀，鑷子，紗布，離心管，網篩，大小瓶 皿，直頭滴管，彎頭滴管，瓶塞，培養瓶蓋，離心管蓋，燒杯(加入37℃水)，泡沫板，大頭針，96孔培養板，計時器，顯微鏡，計數板等。

單克隆抗體技術方法：

顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。

(1)飼養細胞的制備

1.常用Balb/c小鼠，拉頸處死，浸泡於75%酒精內，3～5min。

2.用無菌剪刀剪開皮膚，暴露腹膜，剪一小口，用滴管注入5～6ml不完全培養液(嚴禁刺破腸管)。

3.反復沖洗，將沖洗液吸入15ml離心管，1000rpm5min離心，用完全培養液混懸，調整細胞密度。

(2)SP2/0骨髓瘤細胞的制備

1.選取狀態良好、處於對數生長期的SP2/0骨髓瘤細胞。

2.棄去原瓶中培養上清，用不完全培養液沖洗三遍。

3.再以不完全培養液對細胞進行充分吹打，得到的細胞懸液移入15ml離心管。

4.細胞計數。

(3)脾細胞的制備

1.3天前加強免疫的小鼠，摘眼球取血後，拉頸處死，75%酒精浸泡3～5min。

2.將小鼠固定於泡沫板上，打開腹腔，取出脾臟，用不完全培養液反復沖洗。

3.在平皿中的網篩中，用鑷子夾取脾臟進行反復研磨，邊磨邊滴加不完全培養液，直到脾細胞單個化，將細胞懸液轉入15ml離心管中。

4.細胞計數。根據兩種細胞計數結果，調整懸液用量，配平之後(SP2/0細胞與脾細胞數量比值在1：5～1：10之間)，以1000rpm5min離心。

5.棄上清，每管加入5ml不完全培養液，吹打混勻後合並於同一15ml離心管中，再次以1000rpm5min。

6.離心，棄上清，用滴管吸凈殘留液體。

(4)細胞融合

1.前面步驟所得到的細胞沉澱，輕彈離心管管底，使其呈糊狀。

2.在37℃水浴中，輕輕振盪，一邊緩緩加入1mlPEG，邊加邊搖，PEG於1min內加完。

3.加完PEG之後，將懸液在37℃水浴中靜置1min。

4.繼續在37℃水浴中，邊搖邊加入不完全培養液2ml，於2min內加完。

5.慢慢加入不完全培養液，800rpm，8min。

6.棄上清，加入含1%HAT、20%FCS的培養液，輕輕混勻。

(5)在96孔細胞培養板中加入飼養細胞上清，1滴/孔;之後加入融合細胞懸液，1滴/孔。

(6)鏡下觀察96孔板中細胞情況，CO2孵箱中培養。

⑷ 免疫學技術知識總結 第二章

第二章 抗體制備技術

抗體的基本概念：多克隆抗體（多個淋巴細胞克隆所分泌的抗體）和單克隆抗體（單個B淋巴細胞克隆所分泌的抗體）

單克隆抗體的特點：

高度均質（同一亞類），化學組成均一，不含或很少含Ig

特異性強，只針對某一種抗原表位

親和力強

抗原用量少，無須純化

無批間差異

來源穩定，可達批生產，容易標准化

不易形成沉澱線

操作比較麻煩

什麼條件下需要制備單抗：

目的蛋白有類似的結構

抗原不純，無法分開

多抗的效果不好（已經排除非特異性反應）

希望將抗體用於治療，研製成葯物

希望將抗體用於診斷，研製成診斷試劑。

第一節   多克隆抗體的之別

一、多克隆抗體制備的原理

抗體制備、動物免疫、抗體純化

二、多抗的基本條件

1.   免疫原的制備

顆粒性抗原：細胞、病毒、細菌等，一般具有較強的免疫原性，可以不加佐劑，直接進行腹腔注射。

可溶性抗原：可溶性抗原的來源主要是天然純化，或者用目的基因在原核細胞或者真核細胞中表達，可溶性抗原需要與弗氏佐劑完全或不完全混勻，才可以進行免疫。

（1） 完全抗原的提取：細胞破碎法、抗原提取、抗原的純化

（2）半抗原與載體的交聯：載體的選擇、半抗原與載體偶聯的方法、偶聯復合物的鑒定

（3）合成肽抗原：免疫原性肽的選擇、肽的合成和純化

2. 免疫動物的選擇：

3.   佐劑的准備：

佐劑的種類：無機佐劑、有機佐劑、合成佐劑、油劑

三、多克隆抗體制備的基本方法

1.  抗原計量、免疫途徑與免疫日程

免疫動物的方法：

免疫原值被：

無佐劑免疫法：適用於顆粒性抗原

弗氏佐劑免疫法：適用於可溶性抗原

鋁佐劑免疫法：適用於人的免疫

免疫動物（一般選擇雌性動物，溫順並且可以生產）

皮內免疫法

皮下或肌肉免疫法

淋巴結免疫法

混合法

抗體效價滿意後靜脈注射加強免疫

常見的注射方法；皮下注射、皮內注射、尾靜脈注射、靜脈注射

2.   小樣試血與采血

抗血清的獲得：眼眶取血、頸動脈放血、心臟采血

免疫效果評價：取血（兔耳動脈、鼠尾靜脈）、檢測（雙向免疫擴散、ELISA）

3.   抗體的分離和純化技術

鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析、親和層析法、電泳分離法

親和層析法原理：利用蛋白質之間的特異性結合（抗原-抗體、受體-配體）將一種配基與凝膠顆粒結合，捕捉與他相配的物質，洗脫另外一種物質，並且洗脫一般用改變pH的方法。

主要步驟：將蛋白質與活化柱子結合，將腹水或者血清處理後過柱子，用結合緩沖液洗柱子（知道A280為零），永安氨酸緩沖液洗脫抗體，等量收集洗脫液，測定洗脫液的A280值，保留A280值明顯升高的樣品。

4.   抗體的鑒定

蛋白質濃度的測定：紫外分光比色法、雙縮脲法、福林酚法、

免疫效果評價：雙向免疫擴散、ELISA

純度分析：免疫印跡（WB）

抗體類別分析：免疫金試條

親和力分析：ELISA、熒光偏振

5.  抗體的保存

抗體的濃縮：吸收、蒸發、超濾

抗體的保存：濃縮抗議+甘油+防腐劑

免疫效果不佳的原因可能是：抗原純度不夠、免疫原性低、免疫途徑乳化不合格、免疫劑量不合適、動物疾病或者種屬差異小。

第二節  單克隆抗體制備技術

一、單克隆抗體制備的原理

1個B細胞只能產生1個抗體。方法是細胞工程雜交技術和B細胞雜交瘤技術

需要將單克隆B細胞和腫瘤細胞相結合才可以永久產生單抗

Barski等發現細胞額自然融合現象，但是頻率很低

岡田等發現滅火的仙台稟賦和聚乙二醇能顯著提高細胞融合的效率。

二、單抗制備的基本條件

需要培養正常的B細胞以及B細胞融合的腫瘤細胞

1.   動物的免疫抗原與載體、動物的選擇、免疫途徑

舉例：小鼠免疫

第一次免疫：可溶性抗原加弗氏完全佐劑——小鼠背部皮下注射（4周後）

第二次免疫：可溶性抗原加弗氏不完全佐劑——小鼠背部皮下注射（3周後）

第三次免疫：可溶性抗原加生理鹽水——小鼠腹腔注射（10天後檢測血清效價）

加強免疫：可溶性抗原加生理鹽水——小鼠腹腔注射（3天後）

細胞融合

2.  酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養

細胞DNA合成途徑：

次黃嘌呤（H）通過嘌呤合成跑路途經合成HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶）進一步合成鳥嘌呤核苷酸

胸腺嘧啶核苷（T）通過嘧啶合成旁路途經合成TK（胸腺嘧啶核苷激酶），進一步合成胸腺嘧啶脫氧核苷酸

氨基酸、谷氨醯胺、鳥核苷單磷酸通過核酸生物合成主要途徑結合上面兩步合成的鳥嘌呤核苷酸以及胸腺嘧啶脫氧核苷酸形成DNA

將第三步當中氨基端變為氨基碟呤（A），則無法形成DNA。

因此酶缺陷型細胞的篩選就是HAT篩選

3.   單抗檢測方法的建立

免疫酶技術

免疫熒光技術

免疫擴散技術

三、單抗制備的基本方法

1.   酶缺陷型骨髓瘤細胞的培養

組織培養的基本條件：

儀器：包括CO2培養箱、倒置顯微鏡、超凈台、液氮罐、低速低溫離心機

試劑：培養液、HAT選擇培養液、HT培養液、血清、抗生素

耗材：培養板、培養品、吸管、移液管

骨髓瘤細胞系的選擇要點：

（1）  所選的骨髓瘤細胞應與提供免疫脾細胞的動物品系相同

（2）  自身不產生免疫球蛋白的重鏈和輕鏈

（3）  對氨基碟呤敏感

（4）  與免疫脾細胞融合後產生穩定分泌的Ig雜交細胞

2.   飼養細胞的制備

飼養細胞的作用：

（1） 增加細胞濃度，滿足新生雜交瘤細胞對細胞密度的要求

（2）  吞噬清楚死亡的細胞

（3）  分泌生長刺激因子促進雜交瘤細胞的生長

飼養細胞的種類和制備方法

（1）  小鼠腹腔巨噬細胞

（2）  小鼠脾細胞

（3）  成纖維細胞

3.     脾細胞的分離

（1）  拉頸椎處死小鼠

（2）  無菌操作取出脾臟

（3）  清洗、研磨

（4）  收集細胞

（5）  離心洗滌

（6）  細胞計數

4.     細胞融合：骨髓瘤細胞和脾細胞按照1:10或1:5的比例混合並加入促融劑PEG

細胞融合的方法：PEG融合、仙台病毒、電融合

5.    HAT選擇性培養

       HAT選擇性培養的原理：細胞的DNA生物合成右主要途徑和補償途徑。當A存在是，能夠阻斷DNA合成的主要途徑，須通過補償途徑合成DNA，這時就需要HGPRT利用H合成DNA，或者TK利用T合成DNA。

       由於選用西黃嘌呤鳥嘌呤荷塘轉移酶缺陷型（HPRR-）骨髓瘤在細胞或者胸腺嘧啶割肝激酶缺陷型（TK-）細胞作為親本，該校只能通過群全條件的DNA培養基才可合成，因此雜種細胞通過互補作用獲得HGPPT或者TK基因。只有雜種細胞可以活，酶缺乏性細胞完全無法存活，單克隆B細胞一般不能長期生長，就起到了分離雜交細胞的作用。

       細胞生長情況：融合3-4天之後，可以看到刑訴骨髓瘤細胞，混元透亮的克隆。融合後第7-9天去培養上清，檢測特異性抗體。

       篩選後存活的細胞就是脾細胞和骨髓瘤細胞融合細胞。

6.     陽性克隆的篩選

分泌單克隆抗體雜交瘤細胞的檢測方法

免疫酶技術：簡介ELISA法

免疫熒光技術：間接免疫熒光測定法、流式細胞分析技術（陰性對照：骨髓瘤細胞培養上清，陽性對照：免疫鼠血清）

7.     克隆化培養：陽性細胞的單克隆化

克隆是指由單個細胞繁殖、擴增而形成的性狀均一的細胞集落的過程。

常見方法有：有限稀釋法和軟瓊脂克隆技術

有限稀釋法：從陽性分泌孔收集雜交瘤細胞。

軟瓊脂克隆技術：從陽性分泌孔中收集雜交瘤細胞，一適當濃度雜交瘤細胞加入到軟瓊脂培養基中，形成有一個細胞增殖來的細胞集群。

單克隆抗體的鑒定：

（1）  抗體敏感性檢測：對腹水和培養基上清進行效價測定

（2）  抗體特異性鑒定：是否與其他抗原右交互反應。

（3） 抗體效價測定

（4）  抗體亞類鑒定：IgG（IgG1、IgG2、IgG3）、IgM

（5）  抗體親和力鑒定

（6）  識別表位分析

8.    單克隆抗體的擴大生產：細胞培養法、小鼠體內誘生法、生物反應器

細胞培養法：雜交瘤細胞、培養瓶或罐中培養、收集上清液、純化抗體

動物體內誘生法：Balb/c小鼠、腹腔注射0.5ml液體是啦或降植烷、腹腔內接種雜交瘤細胞、收集腹水

生物反應器：發酵罐培養

單抗培養常見的問題：

（1）  污染：培養環境、操作

（2）  融合細胞不生長：PEG、血清、HAT培養基

（3）  抗體分泌不足：支原體污染、細胞突變、培養體系有問題

（4）  雜交瘤細胞難以克隆化：血清質量、細胞活性

第三節  基因工程抗體制備技術

基因工程抗體：通過基因工程的手段，按照個人意願進行細胞人工改造的技術。

優點主要有：特異性高、質量穩定、成本低廉、工藝簡單、異源性滴低、穿透性好、功能豐富。

一、鼠源抗體人源化

鼠源抗體應用中的障礙：免疫原性、半衰期短、抗體功能片段失活。

1.     嵌合抗體：可變區基因克隆、表達載體的構建、嵌合抗體的表達

2.     改型抗體

二、小分子抗體：Fab抗體、Fv抗體和單鏈抗體、單域抗體、最小識別單位

小分子抗體的優點：

（1）可在原核體系中表達，降低生產成本。

（2）因為其分子量小，穿透能力強，易進入病灶部位，有利於對腫瘤等疾病的治療。

（3）不含Fc片段，不與Fc受體結合，可減少因廣泛分布的Fc受體而帶來的不利影響。

（4）在體內半衰期短，有利於體內毒性物質的消除

（5）易於進一步基因工程分改造。

三、]基於抗體的應用

1.     CAR-T免疫治療：

       CAR-T免疫療法：即嵌合抗原受體T細胞免疫療法，是一種新型的過繼性細胞療法，即利用病人自身的免疫細胞來清除癌細胞的細胞療法，並非葯物。

       CAR-T技術：通過整個嵌合抗原受體的經過基因修飾的T細胞抵抗腫瘤細胞的療法。嵌合抗原受體可以特異性識別腫瘤相關抗原或者腫瘤特異性抗原，識別結合後將激活及增值信號傳遞到T細胞內，引起T細胞激活，增殖釋放細胞因子，從而殺傷腫瘤細胞。

2. 免疫檢查點

3.  免疫毒素

4.  ADC

5.  雙特異性抗體

第四節  [endif]抗體庫技術

抗體庫技術：即用基因克隆技術將全套抗體輕重鏈可變區基因克隆出來，重組到原核表達載體上，通過原核系統直接表達有功能的抗體分子片段，並篩選出特異性的抗體分子和可變區基因。

一、噬菌體展示技術原理：噬菌體展示技術是將外源蛋白質或者DNA序列查到噬菌體外殼上的適當位置，使外源基因隨著外殼蛋白的表達而表達，同時，外源蛋白隨著噬菌體的重新組裝而展現倒是菌體表面的生物技術。到目前為止，人們已經靠發出單鏈絲狀噬菌體展示系統、T4噬菌體展示系統、λ噬菌體展示系統等。

二、噬菌體抗體制備的基本程序

1.     收集淋巴細胞提取mRNA並轉錄到cDNA或直接提取斯堡基因組的DNA

2.     擴增DNA的抗體可變區基因

3.     [構建重組噬菌體庫

4.     篩選所需特徵的重組噬菌體

5.     採用突變或鏈置換使親和力成熟

三、噬菌體抗體技術的特點

1.     篩選步驟簡單、快速、有效

2.     擴大了篩選流量，一次就可以篩選多於1010個的克隆

3.     抗體基因型與表現性聯系密切，基因穩定且容易改造

4.    模擬天然免疫系統親和力成熟過程

5.     無需人工接種

6.     可替代動物多克隆抗體

7.     構建康體苦時。輕重鏈可變區基因在體外隨機組合，可產生體內部存在的輕重鏈組合，得到新的特異性抗體。

8.     可以在預案和系統中表達，大規模生產方便，且成本低。

四、抗體庫技術的應用

1.     制備全人源抗體

2.     改良基因工程抗體

⑸ 單克隆抗體技術怎樣鑒別植物病毒

運用細胞融合技術，將小鼠骨髓瘤細胞和小鼠脾細胞雜交，產生雜交瘤細胞。其增殖能力很強，可在體外連續培養產生抗體。選擇其中能產生某單一抗體的細胞株，所產抗體稱「單克隆抗體」。單克隆抗體靈敏度和專一性比多克隆抗體高，而且可以穩定地再繁殖，無需再用免疫動物，因此被廣泛應用於植物病毒等病原的檢測和鑒定。目前已有多種園藝花卉植物病毒的單克隆抗體應用於病毒的鑒定和檢測。