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圖片中陽性細胞計數方法

發布時間:2023-08-22 08:56:17

1. 微生物計數方法有哪些

微生物計數方法有:血細胞計數法、稀釋塗布平板法、濾膜法、比濁法、顯微鏡直接計數法等等。
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數。
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數。
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化。
2.稀釋塗布平板法
原理:每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌。
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞。

2. 到底怎樣計數細胞呢稀釋倍數怎麼

一般來說,細胞的計數方法是:細胞數/mL=4個大格細胞總數/4×10000×稀釋倍

操作步驟:
1.取10ul細胞懸液與10ul台盼蘭混合均勻於1.5ml離心管中。
2.蓋上蓋玻片,取10ul混合液自血球計數盤上方加入,於10倍生物顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞被染成藍色。
3.分別計數四個大方格,得到細胞總數,再除以4,乘以稀釋倍數(本實驗為2),最後乘以104,即為每ml細胞懸液中細胞數。若細胞位於線上,只計上線與左線(計上不計下,計左不計右)。

註:
1.細胞數/ml=4大格細胞總數×稀釋倍數×104/4;每一大格的體積為=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
2.計數板計數時,最適細胞濃度為5~10×105個/ml,此范圍外計數誤差偏大。
3.高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。

活細胞數/方格:55,62,49,59;死細胞數/方格:5,3,4,6;細胞總數=243
平均細胞數/方格=60.75;稀釋倍數=2;
細胞數/ml:60.75×104×2=1.22×106;
細胞數/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106
存活率:225/243﹦92.6%

3. 微生物計數方法有哪些我想知道詳細的操作步驟

微生物的顯微直接計數法

一、實驗目的
了解血球計數板的構造、計數原理和計數方法,掌握顯微鏡下直接計數的技能。
二、實驗原理
測定微生物細胞數量的方法很多,通常採用的有顯微直接計數法和平板計數法。
顯微計數法適用於各種含單細胞菌體的純培養懸浮液,如有雜菌或雜質,常不易分辨。菌體較大的酵母菌或黴菌孢子可採用血球計數板,一般細菌則採用彼得羅夫·霍澤(Petrof Hausser)細菌計數板。兩種計數板的原理和部件相同,只是細菌計數板較薄,可以使用油鏡觀察。而血球計數板較厚,不能使用油鏡,計數板下部的細菌不易看清。
血球計數板是一塊特製的厚型載玻片,載玻片上有4條槽而構成3個平台。中間的平台較寬,其中間又被一短橫槽分隔成兩半,每個半邊上面各有一個計數區(圖21-1),計數區的刻度有兩種:一種是計數區分為16個大方格(大方格用三線隔開),而每個大方格又分成25個小方格;另一種是一個計數區分成25個大方格(大方格之間用雙線分開),而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數區是哪一種構造,它們都有一個共同特點,即計數區都由400個小方格組成。
計數區邊長為1mm,則計數區的面積為l mm2,每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片後,計數區的高度為0.1mm,所以每個計數區的體積為0.1mm3,每個小方格的體積為1/4000mm3。
使用血球計數板計數時,先要測定每個小方格中微生物的數量,再換算成每毫升菌液(或每克樣品)中微生物細胞的數量。
已知:1mm3體積=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3
所以:1mm3體積應含有小方格數為1000mm3/1/4000mm3=4×106個小方格,即系數K=4×106 。
因此:每ml菌懸液中含有細胞數= 每個小格中細胞平均數(N)×系數(K)×菌液稀釋倍數(d)
三、實驗器材
1.活材料:釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面或培養液。
2.器材:顯微鏡、血球計數板、蓋玻片(22mm×22mm)、吸水紙、計數器、滴管、擦鏡紙。
四、實驗方法
1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當稀釋(斜面一般稀釋到10-2),以每小格的菌數可數為度。
2.取潔凈的血球計數板一塊,在計數區上蓋上一塊蓋玻片。
3.將酵母菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數板中間平台兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區,勿使氣泡產生,並用吸水紙吸去溝槽中流出的多餘菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上,不要使計數區兩邊平台沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片後,造成計數區深度的升高。然後加蓋蓋玻片(勿使產生氣泡)。4.靜置片刻,將血球計數板置載物台上夾穩,先在低倍鏡下找到計數區後,再轉換高倍鏡觀察並計數。由於生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應減弱光照的強度。
5.計數時若計數區是由16個大方格組成,按對角線方位,數左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數。如果是25個大方格組成的計數區,除數上述四個大方格外,還需數中央l個大方格的菌數(即80個小格)。如菌體位於大方格的雙線上,計數時則數上線不數下線,數左線不數右線,以減少誤差。
6.對於出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2—3次(每次數值不應相差過大,否則應重新操作),求出每一個小格中細胞平均數(N),按公式計算出每ml(g)菌懸液所含酵母菌細胞數量。
7.測數完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網格刻度。洗凈後自行晾乾或用吹風機吹乾,放入盒內保存。
五、實驗作業:
將實驗結果填入下表中:
計數次數 每個大方格菌數 稀 釋
倍 數 試管斜面中的總菌數 平均值
1 2 3 4 5
第一次
第二次

4. 如何對活細胞進行計數

用台盼藍拒染法計數活細胞:
1. 徹底混合細胞懸液,取100礚樣本至一支試管中.
2. 台盼藍染色有兩種方法.一是首先用細胞培養液稀釋細胞樣本,然後用台盼藍溶液(產品號 #07050) 1/2稀釋樣本(細胞和台盼藍的稀釋比為1:1).或者直接用台盼藍溶液稀釋樣本.
例如:1/40稀釋樣本
加入50礚 細胞懸液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀釋),混合,然後取100礚稀釋的細胞懸液加入100礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).或取20礚細胞懸液加入780礚台盼藍溶液中(終稀釋度為1/40).
3. 渦懸振盪,混合稀釋的細胞樣本.
4. 血細胞計數器的准備:首先用酒精清潔其小室和蓋玻片,然後用脫脂綿擦乾.
5. 仔細的將蓋玻片覆蓋兩個小室.
6. 用微量移液器或毛細管吸取稀釋的樣本.
7. 用微量移液器或毛細管將樣本充滿兩個小室.不要過滿或不足.
8. 計數4個大方格中細胞核的總數(1x1x0.1mm)或>100個細胞.分別死細胞和活細胞.死細胞染成藍色的死細胞(因為細胞完整性破壞,細胞吸收台盼藍),活細胞透明有折光(未染色).
9. 活細胞計數按以下方法計算:
每個方格中活細胞總數平均值x稀釋倍數x104= 活細胞數/mL

5. 細胞計數的方法

你好,很高興為你解答:
顯微鏡直接計數法:
顯微鏡直接計數法是將小量待測樣品的懸浮液置於一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器),於顯微鏡下直接計數的一種簡便、快速、直觀的方法。細胞(英文名:cell)並沒有統一的定義,比較普遍的提法是:細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成,但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。

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