『壹』 求食品添加劑化學檢測方法過程
防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質。目前，我國允許使用的品種主要有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。1苯甲酸及苯甲酸鈉的測定 苯甲酸及苯甲酸鈉是目前我國使用的主要防腐劑之一。它屬於酸型防腐劑，在酸性條件下防腐效果較好，特別適用於偏酸性食品(pH4.5～5)。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：苯甲酸及苯甲酸鈉在碳酸飲料中的最大使用量為0.2g/kg，低鹽醬菜、醬菜、蜜餞、食醋、果醬(不包括罐頭)、果汁飲料、塑料裝濃縮果蔬汁中最大使用量為2g/kg(以苯甲酸計)。1.1 酸鹼滴定法1.1.1原理 於試樣中加入飽和氯化鈉溶液，在鹼性條件下進行萃取，分離出蛋白質、脂肪等，然後酸化，用乙醚提取試樣中的苯甲酸，再將乙醚蒸去，溶於中性醚醇混合液中，最後以標准鹼液滴定。1.1.2儀器和試劑(1)儀器①鹼式滴定管。 ②300ml燒杯。③250ml容量瓶。④500ml分液漏斗。⑤水浴箱。⑥吹風機。⑦分析天平。⑧錐形瓶。(2)試劑 ①純乙醚：置乙醚於蒸餾瓶中，在水浴上蒸餾，收取35℃部分的餾液。②鹽酸(6mol/L)。 ③氫氧化鈉溶液(100g/L)：准確稱取氫氧化鈉100g於小燒杯中，先用少量蒸餾水溶解，再轉移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。④氯化鈉飽和溶液。⑤純氯化鈉。⑥95％中性乙醇：於95％乙醇中加人數滴酚酞指示劑，以氫氧化鈉溶液中和至微紅色。⑦中性醇醚混合液：將乙醚與乙醇按1：1體積等量混合，以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉中和至微紅色。⑧酚酞指示劑(1％乙醇溶液)：溶解1g酚酞於100ml中性乙醇中。⑨氫氧化鈉標准溶液(0.05 mol/L)：稱取純氫氧化鈉約3g，加入少量蒸餾水溶去表面部分，棄去這部分溶液，隨即將剩餘的氫氧化鈉(約2g)用經過煮沸後冷卻的蒸餾水溶解並稀釋至1000 ml，按下法標定其濃度。1.1.3操作步驟(1)樣品的處理 ①固體或半固體樣品：稱取經粉碎的樣品100g置250ml容量瓶中，加入300ml蒸餾水，加入分析純氯化鈉至不溶解為止(使其飽和)，然後用100g／L氫氧化鈉溶液使其成鹼性(石蕊試紙試驗)，搖勻，再加飽和氯化鈉溶液至刻度，放置2h(要不斷振搖)，過濾，棄去最初l0ml濾液，收集濾液供測定用。 ②含酒精的樣品：吸取250ml樣品，加入100g/L氫氧化鈉溶液使其成鹼性，置水浴上蒸發至約100ml時，移入250ml容量瓶中，加入氯化鈉30g，振搖使其溶解，再加氯化鈉飽和溶液至刻度，搖勻，放置2h(要不斷振搖)，過濾，取濾液供測定用。 ③含脂肪較多的樣品：經上述方法制備後，於濾液中加入氫氧化鈉溶液使成鹼性，加入20～50ml乙醚提取，振搖3min，靜置分層，溶液供測定用。(2)提取吸取以上制備的樣品濾液100ml，移入250 ml分液漏斗中，加6mol/L鹽酸至酸性(石蕊試紙試驗)。再加3ml鹽酸(6mol/L)，然後依次用40、30、30ml純乙醚，用旋轉方法小心提取。每次搖動不少於5min。待靜置分層後，將提取液移至另一個250ml分液漏斗中(3次提取的乙醚層均放大這一分液漏斗中)。用蒸餾水洗滌乙醚提取液，每次10ml，直至最後的洗液不呈酸性(石蕊試紙試驗)為止。 將此乙醚提取液置於錐形瓶中，於40～45℃水浴上回收乙醚。待乙醚只剩下少量時，停止回收，以風扇吹乾剩餘的乙醚。(3)滴定於提取液中加入30ml中性醇醚混合液，10ml蒸餾水，酚酞指示劑3滴，以0.05mol/L氫氧化鈉標准溶液滴至微紅色為止。 4)結果計算1.2高效液相色譜法本法可同時用於苯甲酸及山梨酸的測定。1.2.1原理 樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調pH至近中性，過濾後進高效液相色譜儀，經反相色譜分離後，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。1.2.2儀器和試劑(1)儀器 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①甲醇：優級純，經濾膜(0.5μm)過濾。②稀氨水溶液(1+1)：氨水加水等體積混合。 ③乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g乙酸銨，加水至1 000ml，溶解，經濾膜(0.45μm)過濾。④碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱取2g碳酸氫鈉(優級純)，加水至100ml，振搖溶解。⑤苯甲酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含苯甲酸1mg。⑥山梨酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含山梨酸為1mg。⑦苯甲酸、山梨酸標准混合使用溶液：吸取苯甲酸、山梨酸標准儲備溶液各10.0ml，放人100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/ml經濾膜(0.45μm)過濾。1.2.3操作步驟(1)樣品處理 ①汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)調pH約7。加水定容至10～20ml，經濾膜(0.45μm)過濾。 ②果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，離心沉澱，上清液經濾膜(0.45μm)過濾。 ③配製酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，經濾膜(0.45μm)過濾。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：YWG—C18 4.6mm×150mm 5μm，或其他型號C18柱。 ②流動相：甲醇+乙酸銨溶液(0.02mol／L)(5+95)。 ③流速：1.0ml/min。 ④進樣量：10μL。 ⑤檢測器：紫外檢測器，波長230nm，靈敏度0.2AUFS。 根據保留時間定性，外標峰面積法定量。 1.2.4結果計算 式中： X—樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m1—進樣體積中苯甲酸或山梨酸的質量，mg； V2—進樣體積，ml； V1—樣品稀釋液總體積，ml； m—樣品質量，g。2山梨酸及山梨酸鉀的測定山梨酸與山梨酸鉀是目前國際上公認的安全防腐劑,已被很多國家和地區廣泛使用。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：山梨酸及山梨酸鉀用於肉、魚、禽類製品時的最大使用限量為0.075g/kg；水果、蔬菜及碳酸飲料為0.2g/kg,膠原蛋白腸衣、低鹽醬菜類、蜜餞、果汁飲料、果凍等為0.5g/kg；果酒為0.6g/kg；塑料桶裝濃縮果蔬汁、軟糖、魚干製品、即食豆製品、糕點、麵包、乳酸菌飲料等為1.0g/kg。當山梨酸與山梨酸鉀同時使用時，以山梨酸計，不得超過最大使用量。2.1.硫代巴比妥酸比色法2.1.1原理利用自樣品中提取出來的山梨酸及其鹽類，在硫酸及重鉻酸鉀的氧化作用下產生丙二醛，丙二醛與硫代巴比妥酸作用產生紅色化合物，其紅色深淺與丙二醛濃度成正比，並於波長530nm處有最大吸收，符合比爾定律，故可用比色法測定。2.1.2儀器和試劑(1)儀器① 721型分光光度計。②組織搗碎機。③10ml比色管。(2)試劑①硫代巴比妥酸溶液：准確稱取0.5g硫代巴比妥酸於100ml容量瓶中，加20ml蒸餾水，然後再加入10ml氫氧化鈉溶液(1mol/L)，充分搖勻。使之完全溶解後再加入11ml鹽酸(1mol/L)，用水稀釋至刻度。此溶液要在使用時新配製，最好在配製後不超過6h內使用。 ②重鉻酸鉀-硫酸混合液：以0.1mol/L重鉻酸鉀和0.15mol/L硫酸以1：1的比例混合均勻配製備用。③山梨酸鉀標准溶液：准確稱取250mg山梨酸鉀於250ml容量瓶中，用蒸餾水溶解並稀釋至刻度，使之成為1mg/ml的山梨酸鉀標准溶液。④山梨酸鉀標准使用溶液：准確移取山梨酸鉀標准溶液25ml於250ml容量瓶中，稀釋至刻度，充分搖勻，使之成為0.1mg/ml的山梨酸鉀標准使用溶液。2.1.3操作步驟(1)樣品的處理 稱取100g樣品，加蒸餾水200ml，於組織搗碎機中搗成勻漿。稱取此勻漿100g，加蒸餾水200ml繼續搗碎1min，稱取10g於250ml容量並中定容搖勻，過濾備用。（2）山梨酸鉀標准曲線的繪制 分別吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml山梨酸鉀標准使用溶液於200ml容量瓶中，以蒸餾水定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸鉀)。再分別吸取2.0ml於相應的10ml比色管中，加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液，於100℃水浴中加熱7min，立即加人2.0ml硫代巴比妥酸溶液，繼續加熱l0min，立即取出迅速用冷水冷卻，在分光光度計上以530nm測定吸光度，並繪制標准曲線。(3)樣品的測定 吸取樣品處理液2ml於10ml比色管中，按標准曲線繪制的操作程序，自「加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液」開始依次操作，在分光光計530nm處測定吸光度，從標准曲線中查出相應濃度。 2.1.4結果計算式中： X1—樣品中山梨酸鉀的含量，g/kg； X2—樣品中山梨酸的含量，g/kg； c—試樣液中含山梨酸鉀的濃度，mg/ml； m—稱取勻漿相當於試樣的質量，g； 2—用於比色時試樣溶液的體積，ml； 250—樣品處理液總體積，ml 1.34—山梨酸鉀換算為山梨酸的系數。2.2.紫外分光光度法2.2.1原理樣品經氯仿(三氯甲烷)提取後，再加人碳酸氫鈉，使山梨酸形成山梨酸鈉而溶於水溶液中。純凈的山梨酸鈉水溶液在254nm處有最大吸收，經紫外分光光度計測定其吸光度後即可測得其含量。2.2.2儀器和試劑(1)儀器 ①紫外分光光度計。②組織搗碎機。(2)試劑 ①三氯甲烷：以三氯甲烷體積50％的碳酸氫鈉(0.5mol/L)提取2次，而後以無水硫酸鈉乾燥，過濾備用。②0.5mol/L碳酸氫鈉：稱取21g碳酸氫鈉於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解，移至500ml容量瓶中加水定容至刻度。③0.3mol/L碳酸氫鈉。④山梨酸標准溶液：准確稱取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml⑤山梨酸標准使用液：准確吸取山梨酸標准溶液25.00ml，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml，即為100μg/ml的標准使用液。2.2.3 操作步驟(1)樣品的處理：稱取50.0g樣品，加450ml蒸餾水於組織搗碎機中，粉碎5min，使成勻漿。稱取10.0g此勻漿於50ml容量瓶中，並以水定容。移取l0ml此溶液於250ml分液漏斗中，用100ml氯仿提取1min。靜置分層。將氯仿層分至125ml錐形瓶中，加人5g無水硫酸鈉，振盪後靜置。(2)標准曲線的繪制：分別吸取山梨酸標准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml於100ml容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氫鈉定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸)。於紫外分光光計中254nm處測定吸光度，以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標准曲線。(3)樣品的測定：移取樣品氯仿提取液50ml於125ml分液漏斗中，用25ml碳酸氫鈉(0.3mol/L)提取1min。靜置分層後，小心棄去氯仿層。將碳酸氫鈉提取液於紫外分光光計中254nm處測定吸光度。從標准曲線上查出相應的山梨酸含量。2.2.4結果計算式中：X—山梨酸的含量。g/kg；m1—試液中山梨酸的含量，mg/ml； V1—試樣碳酸氫鈉提取液總量，ml； V2—吸取試樣氯仿提取液體積，ml； V3—試樣氯仿提取液總體積，ml； m—用於測定的試樣水提取液相當於樣品的質量，g。2.3.氣相色譜法2.3.1原理 樣品經酸化後，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用帶氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，然後與標准系列進行比較定量。2.3.2儀器和試劑(1)儀器 氣相色譜儀(具有氫火焰離子化檢測器)。(2)試劑 ①乙醚：不含過量氧化物。②石油醚：沸程30～60℃。③鹽酸。④無水硫酸鈉。⑤鹽酸(1：1)：取100ml鹽酸，加入稀釋至200ml。⑥氯化鈉的酸性溶液(40g/L)：於氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1：1)，使之酸化。⑦山梨酸和苯甲酸標准儲備液：准確稱取山梨酸和苯甲酸各0.2000g，置於100ml容量瓶中，用石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解後，稀釋至刻度，1ml此溶液相當於200mg山梨酸或苯甲酸。⑧山梨酸和苯甲酸的標准使用液：吸取適量的山梨酸和苯甲酸的標准溶液，以石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑稀釋至每毫升相當於50、100、150、200、250mg山梨酸或苯甲酸。2.3.3操作步驟 (1)樣品的處理 稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置於25ml帶塞量筒中，加0.5ml鹽酸(1：1)酸化，依次用15ml和10ml乙醚提取，每次振搖1min後，將上層乙醚提取液吸人另一個25ml帶塞量筒中，合並乙醚提取液。用3ml氯化鈉的酸性溶液(40g/L)洗滌2次，靜置15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾人25ml容量瓶中，加乙醚至刻度，混勻。准確吸取5ml乙醚提取液於5ml帶塞刻度試管中，置於40℃水浴上揮干，加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解殘渣，備用。 (2)色譜參考條件 ①色譜柱：玻璃柱，內徑為3mm，長為2m，內裝塗以5％(質量分數) DEGS+l％(質量分數)H3 PO4固體液的60～80目ChromosoybWAW。②載氣：載氣為氮氣，氣流速度為50ml/min(氮氣、空氣及氫氣按各儀器型號不同，選擇各自的最佳比例條件)。③溫度：進樣品溫度為230℃，檢測器溫度為230℃，柱溫為170℃。 (3)測定 ①進樣2μL標准系列中各濃度的標准使用液於氣相色譜儀中，測得不同濃度的山梨酸和苯甲酸的峰高。以濃度為橫坐標，以峰高值為縱坐標，繪制標准曲線。山梨酸和苯甲酸的標准色譜圖如圖8—1所示，山梨酸的保留時間為173s，苯甲酸的保留時間為368s。圖8—1山梨酸和苯甲酸標准色譜圖②進樣2μL樣品溶液，測得峰高，然後與標准曲線比較定量。2.3.4結果計算 式中：X—樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg； m1—測定用樣品溶液中山梨酸或苯甲酸的質量，μg； V1—加入石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑的體積，ml： V2—測定時進樣的體積，μL； m2—樣品的質量，g； 由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。3過氧乙酸的測定 過氧乙酸又叫過醋酸，是過氧化氫、醋酸與微量硫酸的混合水溶液。過氧乙酸對細菌繁殖體、芽孢、真菌、病毒都具有高度殺滅效果，是一種廣譜、高效、速效的殺菌劑。3.1原理 在酸性條件下，過氧乙酸中含有的過氧化氫(H2O2)用高錳酸鉀標准滴定溶液滴定，然後用間接碘量法測定過氧乙酸的含量。 3.2儀器和試劑 3.2.1儀器 ①250ml碘量瓶。 ②50ml棕色滴定管。 ③分析天平。3.2.2試劑 ①硫酸溶液(1+9)：量取1ml硫酸與9ml水混合。 ②碘化鉀溶液(100g/L)。 ③硫酸錳溶液(100g/L)。 ④鉬酸銨溶液(30g/L)。 ⑤高錳酸鉀標准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]。 ⑥硫代硫酸鈉標准滴定溶液[c(Na2S2O3)－0.1mol/L]。 ⑦澱粉指示液(10g/L)。3.3操作步驟 稱取約0.5g試樣(或稱取相當於含過氧乙酸約0.07g的試樣)，精確至0.000 1g，置於預先盛有50ml水，5ml硫酸溶液和3滴硫酸錳溶液並已冷卻至4℃的碘量瓶中，搖勻，用高錳酸鉀標准溶液滴定至溶液呈穩定的淺粉色。隨即加入10ml碘化鉀溶液和3滴鉬酸銨溶液，輕輕搖勻，於暗處放置5～10min，用硫代硫酸鈉標准滴定溶液滴定，接近終點時(溶液呈淡黃色)加入1ml澱粉指示液，繼續滴定至藍色消失，並保持30s不變為終點。記錄消耗硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積數。3.4結果計算 式中：X—過氧乙酸的質量分數，％； V—消耗的硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積，ml； c—硫代硫酸鈉標准滴定溶液濃度，mol/L； m—試樣的質量，g； M—與1.00ml硫代硫酸鈉標准滴定溶液(c=1.000mol/L)相當的過氧乙酸的摩爾質量(M=0.03803g/mol)； 取2次平行測定結果的算術平均值為測定結果，兩次平行測定結果之差不得大於0.3%。4對羥基苯甲酸酯類的測定 對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯和對羥基苯甲丁酯，又名尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯。三者均為苯甲酸的衍生物。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：對羥基苯甲酸乙酯、丙酯和丁酯用於果蔬保鮮時的最大使用量(以對羥基苯甲酸計)為0.012g/kg；食醋0.10g/kg；碳酸飲料、蛋糕、蛋黃餡0.20g/kg；果汁飲料、果醬(不包括罐頭)、醬油等為0.25g/kg；糕點餡為0.5g/kg。4.1.高效液相色譜法4.1.1原理 樣品中對羥基苯甲酸酯類，用乙腈提取，經過濾後進高效液相色譜儀進行測定，與標准比較，以保留時間定性，以峰高定量。4.1.2儀器和試劑(1)儀器 ①組織搗碎機。 ②離心機。 ③高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①乙腈。全玻蒸餾。 ②對羥基苯甲酸酯類的標准溶液：稱取50mg相應的對羥基苯甲酸酯，溶於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，混勻。分別吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml上述溶液，置於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。該系列標准溶液中每毫升分別含5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的對羥基苯甲酸酯。4.1.3操作步驟(1)樣品提取 稱取約20g樣品，粉碎。准確稱取2g樣品於10ml具塞離心管中，加入5.0ml乙腈，塞上塞子。振搖30s後，於500r/min離心5min，將上清液轉移至25.0ml容量瓶中，重復操作3次，用乙腈稀釋至刻度。用0.45μm濾膜過濾，供色譜測定用。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：μBondapak C18 30cm×4.6mm。 ②流速：1.4ml/min。 ③檢測波長：254nm。 (3)測定分別進樣10μL對羥基苯甲酸酯標准系列中各濃度的標准溶液，以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。同時進樣10μL樣品溶液，與標准曲線比較定性、定量。 對羥基苯甲酸甲酯、丙酯的保留時間分別約為4.2min和7.6min，其標准色譜圖如圖8-2所示。4.1.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，mg/g; m1—被測樣品液中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg/ml; m—樣品的質量，g； 25—樣品溶液的體積，ml。4.2.氣相色譜法4.2.1原理 樣品經酸化後，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮後，用具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標准系列比較定量。4.2.2儀器和試劑 (1)儀器 ①K-D濃縮器。 ②氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測器。(2)試劑 ①乙醚，重蒸。 ②無水乙醇。 ③無水硫酸鈉。 ④飽和氯化鈉溶液。 ⑤碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)。 ⑥鹽酸(1+1)：量取50ml鹽酸，用水稀釋至100ml。 ⑦對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的標准溶液：准確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙酯各0.050g，溶於50ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，該溶液每毫升相當於lmg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。 ⑧對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的使用溶液：吸取適量的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准溶液，用無水乙醇分別稀釋至每毫升相當於50、100、200、400、600、800μg的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。4.2.3操作步驟(1)樣品的提取與凈化。 ①醬油、醋、果汁等：吸取5g預先均勻化的樣品於125ml分液漏斗中，加入1ml鹽酸(1+1)酸化，l0ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，分別以75、50、50ml，乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，棄去水層，合並乙醚層於250ml分液漏斗中，加10ml飽和氯化鈉溶液洗滌一次，再分別以碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)30、30、30ml洗滌3次，棄去水層。用濾紙吸去漏斗頸部水分，塞上脫脂棉，加10g無水硫酸鈉於室溫放置30min，在K—D濃縮器上濃縮近干，用吹氮除去殘留溶劑。用無水乙醇定容至每毫升含1mg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯供氣相色譜用。 ②果醬：稱取5g預先均勻化的樣品於100ml具塞試管中，加入1ml鹽酸(1+1)，10ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，用50、30、30ml乙醚提取3次，每次2min，用吸管轉移乙醚至250ml分液漏斗中，以下按上法操作。(2)氣相色譜分析參考條件。 ①色譜柱：內徑3mm，長2.6m，內塗以3%SE-30/Chromoserb W AWI)-MCS，60～80目。 ②檢測溫度：柱溫170℃，進樣口和檢測器溫度220℃。 ③氣體流速：氮氣，40ml/min；氫氣，50ml/min；空氣，500ml/min。(3)測定 進樣1μL對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准系列中各濃度標准使用液於氣相色譜儀中，測定不同濃度對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的峰高。以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。 同時進樣1μL樣品溶液，測定峰高並與標准曲線比較定量。4.2.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，g/kg； A—測定樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg； V1—樣品制備液體積，ml； V2—樣品進樣體積，μL；m—樣品質量，g。
『貳』 怎樣測定果實中的澱粉
答：澱粉是光合作用形成的單糖縮合而成的一種產物，在果實發育中，葉子所製造的碳水化合物運入果實，以澱粉的形式貯藏起來。澱粉在果實中還可通過澱粉酶水解成糖，這個作用是一個可逆反應。在果實發育的初期，果實中的積累大於消耗，因此澱粉含量不斷增長，直至呼吸躍變期後澱粉加速糖化，分解大於積累，澱粉含量逐漸減少。因此果實澱粉含量在一定程度上與果實的成熟度有關。
（1）方法原理
澱粉遇碘可生成藍色絡合物，在一定濃度范圍內，藍色的深淺與澱粉的含量成正比。用高氯酸作提取劑，顯色後在分光光度計上測定其吸光度，同時用蘋果純澱粉作為標准進行比較。
（2）試劑配製
①0.01摩爾/升碘酸鉀溶液：稱取在105℃下烘過2小時的碘酸鉀（KIO3）3.567克溶於水，洗入1000毫升容量瓶中加水至刻度，此為0.1摩爾/升碘酸鉀溶液。吸取10毫升放入100毫升的容量瓶中，加水至刻度即為0.01摩爾/升碘酸鉀溶液。
②9.2摩爾/升高氯酸溶液：即60%的HClO4。
③5%碘化鉀溶液：5克 KI溶於100毫升水中。
④硫代硫酸鈉溶液：4克 Na2S2O3·5H2O溶於100毫升水中。
⑤蘋果純澱粉：將未成熟的元帥蘋果洗凈擦乾，在菜擦子上擦碎加去離子水少許，用紗布過慮，再用水洗殘渣一次，將濾液合並，放在大燒杯中靜置過夜。次日澱粉即沉於杯底，小心棄去上層混濁液，再加水攪勻，如此傾洗多次，直至可溶性糖及其他雜物均被洗出。澄清後傾出上層水液。為除去其中的蛋白質，加入10%的氯化鈉溶液，放置2小時，傾去上層清夜，用去離子水洗沉澱直至無氯離子。用82%乙醇洗滌數次，最後用乙醚抽洗幾次，此時，澱粉為純白色，干後可作為標准澱粉用。
（3）儀器設備
高速組織搗碎機、萬分之一天平、百分之一天平等。
（4）測定步驟
將蘋果去皮，從萼凹到果頂方向，對角線取兩個碶形小塊，粗粗切碎。稱取100克加水100毫升，立即放在高速組織搗碎機上搗碎3分鍾。再取漿狀物10.00克（相當於樣品5克）邊搖邊用吸管加入9.2摩爾/升高氯酸20毫升，放置10分鍾。然後洗入100毫升容量瓶中，加水定容搖勻。用漏斗通過玻璃棉過慮，吸出一定量（視澱粉多少而定，一般為1～4毫升）放入另一100毫升容量瓶中加水至4毫升，加碘化鉀1毫升，搖勻，再加0.01摩爾/升碘化鉀液，搖勻，放置5分鍾。在分光光度計上620毫微米波長下比色。
因為藍色溶液中含有澱粉的膠體顆粒，所以每個有色溶液都要用它自己的褪色溶液作為空白。作法是將藍色溶液加兩滴硫代硫酸鈉溶液使藍色褪去，倒入另一比色杯中作為空白。
標准曲線的繪制：稱取蘋果純澱粉0.1000克，加水9毫升，搖勻，再加9.2摩爾/升高氯酸20毫升，邊加邊搖，放置10分鍾，洗入100毫升容量瓶中，加水至刻度搖勻。吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0毫升分別放入100毫升容量瓶中，相應加水至4毫升，各加5%碘化鉀溶液1毫升，搖勻，再加0.01摩爾/升碘酸鉀溶液1毫升，再搖勻，放置5分鍾，用水稀釋至100毫升。這時100毫升中含澱粉0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0毫克，照上法在分光光度計上測定其吸光度，將濃度作橫坐標，吸光度作縱坐標，做標准曲線。
（5）結果計算
澱粉（%）（以鮮重為基礎）＝查表毫克數×V×100/W×V1×10 000
式中：V——樣品稀釋體積（毫升）；
V1——吸取濾液體積（毫升）；
W——樣品鮮重（克）。
（6）注意事項
①澱粉有直鏈澱粉和支鏈澱粉兩種。不同樹種、品種，這兩種澱粉的比例不同，因此，據實踐證明，用蘋果提純的澱粉作為測定果實中澱粉的標准效果較好。
②加高氯酸溶液時，邊加邊搖，以免局部酸度過大。最後應將沿邊的果汁沖下去，這時酸的濃度約為6.2摩爾/升，並嚴格控制浸出時間。
③加碘化鉀和碘酸鉀液時體積要准確，否則會影響顯色的深淺。
④如果沒有高速組織搗碎機，可用菜擦子擦碎果肉，迅速用研缽磨成糊狀，稱取5克樣品，加入9.2摩爾/升高氯酸液20毫升，放置10分鍾，用水洗入100毫升容量瓶中，加水定容，過濾後按上法進行。
標准澱粉0.1000克，加水4毫升，加9.2摩爾/升高氯酸液20毫升，放置10分鍾，然後按上法進行，畫出標准曲線。