Ⅰ 粗提取植物DNA的實驗步驟和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉澱核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物，只是不能沉澱核酸。通過有機溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。步驟如下：
1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5 ml Eppendorf管中；
（2）加入800 μl的CTAB提取緩沖液，混勻（CTAB在65℃水浴預熱），每5min輕輕震盪幾次，20min後12000 r/min，離心15 min；
（3）小心吸取上清液，加入等體積的酚：氯仿（各400μl）溶液，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（4）小心吸取上清液，加入等體積的氯仿，混勻，4℃，12000 r/min，離心10 min。
（5）重復步驟（4）1-2次，以蛋白層不出現為止；
（6）取上清，-20℃沉澱1h，4℃，12000 r/min，離心10 min；
（7）棄去上清液，用70%乙醇洗滌沉澱2次；
（8）室溫下乾燥後（一般乾燥5-15 min），溶於30-50 μl DEPC去離子水中，於-20℃或者-70℃下保存備用。
Ⅱ 對植物dna的提取最好的方法是哪種
CTAB快速提DNA法：
取植物材料少量,可用液氮冷凍,沒有的話不凍也可以,材料粉碎後快速加入CTAB 100微升,65度3-5min,加入相同體積的酚氯仿,混勻,12000轉10分鍾,取上清至另一管中(注意,一定不要帶入酚氯仿,否則殘留的酚會使TAQ酶失活而導致PCR結果假陰性),加入十分之一體積的醋酸鈉,再加入兩倍體積的無水乙醇,冰上沉澱10分鍾,離心,去上清,晾乾或DNA乾燥儀乾燥,加入水10-20微升,取1-3微升做PCR.
Ⅲ 植物的基因怎樣提取
植物DNA提取方法
方法一：
1.取兩片幼嫩新鮮葉片，置於預冷的研缽中，倒入適量液氮，迅速研磨成粉末狀，隨後加入3ml預熱的2%CTAB抽提緩沖液和50ul抗氧化劑2-巰基乙醇，繼續研磨成略有流動性的糊狀或粥狀，轉入1.5ml的離心管中，於65℃水浴鍋中保溫約60min。
2.待混合物冷卻至室溫後加入等600ul的CI（氯仿：異戊醇=24：1）溶液混勻，輕輕顛倒離心管幾次使管內混合物成乳濁液，常溫下10000rpm離心10min,取上清液轉入另一干凈的離心管中。
3.重復步驟（2）一次。
4.取步驟（3）上清液加入2.5倍體積無水乙醇，仔細混勻，-20冰箱30min以上，沉澱DNA 4℃，12000rpm離心10min。
5.棄去上層有機溶劑，加500ul75%乙醇洗滌沉澱，4℃下8000rpm離心5min,棄去上清，洗滌沉澱3次。
6.倒置或者37度培養箱烘乾。
7.加50ulTE緩沖液溶解DNA，於-20℃冷藏備用。
方法二：
1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液Ⅰ, 60℃水浴預熱。
2. 植物5-10g, 剪碎, 在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱的離心管中, 劇烈搖動混勻, 60℃水浴保溫30-60分鍾(時間長,DNA產量高), 不時搖動。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 顛倒混勻(需帶手套, 防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鍾, 使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
4. 室溫下5000rpm離心5分鍾。
5. 仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫下放置片刻即出現絮狀DNA沉澱。
6. 在1.5mleppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團,在干凈吸水紙上吸干,轉入含TE的離心管中,DNA很快溶解於TE。
7. 如DNA不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鍾, 再將沉澱移入TE管中。這樣收集的沉澱,往往難溶解於TE,可在60℃水浴放置15分鍾以上，以幫助溶解。
8. 將DNA溶液3000rpm離心5分鍾,上清液倒入干凈的5ml離心管。
9. 加入5μlRNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分鍾, 除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。
10. 加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鍾左右,DNA形成絮狀沉澱。
11. 用玻棒撈出DNA沉澱,70%乙醇漂洗,再在干凈吸水紙上吸干。
12. 將DNA重溶解於1ml TE, -20貯存。
13. 取2μlDNA樣品在0.7% Agarose膠上電泳, 檢測DNA的分子大小。同時取15μl稀釋20倍, 測定OD260/OD280, 檢測DNA含量及質量。
方法三：
植物DNA的SDS提取法：
試驗試劑：
1、研磨緩沖液：稱取59.63gNaCl，13.25g檸檬酸三鈉，37.2gEDTA－Na分別溶解後合並為一，用0.2mol/L的NaOH調至pH7.0，並定容至1000ml。
2、10×SSC溶液：稱取87.66gNaCl和44.12g檸檬酸三鈉，分別溶解，一起定容至1000ml。
3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀釋10倍。
4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀釋10倍。
5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配製成25mg/ml的酶液，用1mol/LHCl，pH至5.0，使用前經80℃水浴處理5min（以破壞可能存在的Dnase）。
6、氯仿－異戊醇：按24ml氯仿和1ml異戊醇混合。
7、5mol/L高氯酸鈉溶液：稱取NaClO4·H2O 70.23g，先加入少量蒸餾水溶解再容至100ml。
8、SDS（十二烷基硫酸鈉）化學試劑的重結晶：將SDS放入無水酒精中達到飽和為止，然後在70～80℃的水浴中溶解，趁熱過濾，冷卻之後即將濾液放入冰箱，待結晶出現再置室溫下涼干待用。
9、1mol/LHCl。
10、0.2mol/LNaOH。
11、二苯胺乙醛試劑：1.5g二苯胺溶於100ml冰醋酸中，添加1.5ml濃硫酸，裝入棕色瓶，貯存暗處，使用時加0.1ml乙醛液〔濃乙醛：H2O＝1：50（V／V）〕。
12、1.0mol/L高酸溶液（HClO4）。
13、0.05mol/LNaOH。
14、DNA標准液：取標准DNA25mg溶於少量0.05mol.L-1NaOH中，再用0.05mol/LNaOH定容至25ml，後用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加5.0ml1mol/LHClO4，混合冷卻後用0.5mol/LHClO4定容至刻度，則得100μg/ml的標准溶液。
Ⅳ 如何從植物組織中提取較純的dna
簡單的講法的話，就是要先將植物細胞的細胞壁用果膠酶和纖維素酶在0.5~0.6mol/L的甘露醇溶液中去除，然後將獲得的原生質體破碎後高速離心，獲得細胞核內的核酸，然後先用CATB方法去除蛋白質，也就是在保證核酸不被破壞的情況下用苯酚除去蛋白質，然後分液，棄掉有機相，然後加1/10體積的3M醋酸鈉（pH5.2）和2.5倍體積的無水乙醇，輕輕倒置混勻，待絮狀物出現後，離心。棄上清液。 沉澱用75%乙醇洗滌，離心，棄上清液。 室溫下揮發乙醇，待沉澱將近透明後加50-100mlTE溶解過夜。
Ⅳ 植物dna提取的原理和方法其中乙醇和氯仿一異成醇各起什麼作用
植物DNA提取方法是採用CTAB法。
CTAB，是一種陽離子去污劑,能與核酸形成復合物,此復合物在高鹽(>0.7mol/L) 濃度下可溶,並穩定存在,但在低鹽濃度(0.1～0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸復合物就因溶解度降低而沉澱,而大部分的蛋白質及多糖等仍溶解於溶液中。通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質後加入乙醇沉澱即可使核酸分離出來。經離心棄上清後,CTAB-核酸復合物再用70%酒精浸泡可洗脫掉CTAB。
無水乙醇：沉澱DNA。乙醇的優點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學反應，對DNA很安全，因此是理想的沉澱劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在，當加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易於聚合。
氯仿：克服酚的缺點；加速有機相與液相分層。
異戊醇：減少蛋白質變性操作過程中產生的氣泡。異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊醇有助於分相，使離心後的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。