食用菌菌種的保藏方法

Ⅰ 食用菌的菌種有哪些保藏方法各有什麼特點

（1）斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養基上，在適宜的溫度條下培養，當菌絲健壯地長滿斜面時，即將此試管菌種取出，放置於4 ℃的冰箱中保藏。特點：

①簡單易行，適用於各類菇類菌種保藏，是目前生產及科研普遍採用的一種方法；②保藏時間短，需6個月轉接一次，轉管次數多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞並用石蠟扣，可保藏1年～3年。

（2）液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無色、透明、黏稠、性質穩定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養基水分蒸發，抑制微生物的代謝活動，推遲細胞老化，從而達到長期保藏菌種的目的。特點：

①方法簡便易行，保藏條件不嚴格，保藏時間長，可作為長期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。

（3）濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長期保藏菌種的方法，又稱濾紙孢子保藏法。特點：技術要求高，設備費用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時間長很少變異。

（4）自然基質保藏。自然基質保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營養的自然生長的基質作培養基來保藏菌種的方法。自然基質很多，食用菌常用的自然基質有發酵的糞草、木屑及枝條基質等，取材方便，製作方法簡便，保藏時間也較長。使用時，只需取一塊、一粒或一條培養物放在新鮮的培養基上，並在適溫下培養即可。特點：方法簡便易行，保藏時間長。

Ⅱ 食用菌制種技術的菌種保藏

一個優良菌株被選育出來以後，必須保
持其優良性狀，防止雜菌污染，才不致降低生產性能。因此保藏好菌種，對研究和生產食用菌都具有十分重要的意義。菌種保藏的方法有斜面低溫、沙土管、液體石蠟封藏、冷凍真空及液氮超低溫等。
斜面低溫保藏法
這是最簡單最普通的保藏方法，即將菌種在適宜的斜面培養基上培養成熟後，置於4—5'C的低溫下保藏，以後每隔2～3個月轉管一次。此法適用於除草菇外的所有食用菌菌種。草菇對低溫忍耐力差，它的菌絲體在5 0C下即易死亡，因此草菇菌種應保藏在lo～13'(2的環境中。若需置於4～5℃的低溫下保藏，應在草菇菌苔上灌注3～4mL的防凍劑。一般生產上，草菇多採用室內常溫保藏。
低溫保藏菌種的培養基一般用營養豐富的天然培養基，如馬鈴薯—葡萄糖—瓊脂培養基等。為防止菌種在保藏過程中產生酸過多，在配製保藏用培養基時需添加少許緩沖鹽，如磷酸二氫鉀(KH2P04)或碳酸鈣等。
斜面低溫保藏菌種雖然簡便，但保藏時間較短，需經常轉管，故容易發生退化現象。為了彌補這一缺點，在生產上，最好把斜面低溫保藏法與其他保藏法結合起來，以減少轉管次數。母種在第一次轉管時，盡量多移斜面試管，部分用第一次生產，取幾管作礦油保藏(或冷凍乾燥、液氮低溫保藏)，其餘則作為以後幾批生產用的母種，暫存於4～6'C低溫處，待低溫保存的菌種用完後(或超過儲存期後)，再從第一代礦油保存的菌種移出殖。這樣做能使每批生產使用的菌種都保持在前幾代的水平上，有利於菌種優良性狀的保持(圖3—1)。
液體石蠟保藏法
食用菌菌絲均可用石蠟保藏，一般可保存3年以上，但最好1—2年移接一次，即使不移接，室溫下可保藏6～8個月。用此法保藏的菌種不必置於冰箱內，室內比冰箱內保藏效果更好。
液體石蠟又名礦油，是一種導瀉劑，在醫葯商店有售。分裝於三角瓶中加棉塞封口，高壓蒸汽滅菌2～3次(每次30min)，然後經無菌檢查合格後方可使用。由於高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入，需在4'C溫箱或烘箱中烘烤8～10h，使水分蒸發。用無菌吸管將滅菌石蠟加入要保藏菌種斜面試管內，用量要高出斜面尖端約lcm。將棉塞齊口剪平，再用蠟密封管口。
使用礦油保藏菌種時，不必倒去礦油，用接種工具從斜面上取一小塊菌絲先在無菌水
中洗滌，然後移接於斜面培養基上即可。原母種可重新封口繼續保藏。
沙土保藏法
此法是將食用菌孢子保藏於乾燥的無菌沙土中，保藏期為2一10年。具體方法如下：
1．取河沙過篩(60～80目篩子)，除去大沙粒，用10%的鹽酸浸泡以除去有機物。鹽
酸用量以淹沒沙面為宜。浸泡2～4h後，倒去鹽酸，用水洗幾次，直到接近中性，烘乾或曬
干。
2．沙與土比例以2 ：l～4 ：1為宜，沙過多影響菌種保藏質量，土過多時易結塊，接
種後抽干困難。
3．把干沙、土按比例混合壓裝於安瓿管或小試管，裝入量以0.5～lcm為宜，加棉塞，
高壓蒸汽滅菌(壓力在0．15MPa)滅菌3次，每次30min，乾熱滅菌(160℃，2h)。待無菌檢
查合格後(取少許干沙土放入牛肉湯培養液中，無菌生長)方可使用。
4．用接種環將孢子接於沙土管中拌勻即可。或將孢於接於5mL無菌水的試管中，
充分播勻成孢於懸液，然後用lmL無菌吸管吸取孢子懸液加入沙土管中(每管加0.2mL)
即可。
5．將接種後的沙土管置於盛有乾燥劑(生石灰、氯化鈣或硅膠)的容器內，接上
0．5KW的真空泵抽氣約8h，使沙土基本乾燥。
6．經抽樣檢查，證明無雜菌生長，即可封口進行保藏。
四，真空冷凍乾燥保藏法
此法是採用真空、乾燥和低溫三種手段來保藏菌種，因此菌種保藏期長達10～20年 後仍不降低其原有性能。
冷凍乾燥保藏的基本方法是將需要保藏的孢子懸液裝在特製的安瓿管中，然後驟然 冰凍，並立即抽成真空，使培養物以固體形態升華脫水，熔封後在低溫或室溫下保藏。
試驗證明，用此法保藏蘑菇、香菇、側耳和金針菇等食用菌的孢子和銀耳的芽孢子3 年，全部存活，直至8年後仍有90%存活。可見用此法保藏食用菌孢子至少可存活8年。 但此法不能用來保藏不長孢子的菌類。
其他保藏方法
（一）液體超低溫保藏法
試驗證明，用一130～一196℃液體氮超低溫冰箱能保藏所有食用茵菌種，包括一些不 能用冷凍乾燥保藏的菌種，甚至「怕冷」的草菇以10%甘油和5%～10%二甲基碸做保護 劑，居然也能在超低溫冰箱中保藏。由於超低溫能使代謝水平降到最低限度，因此菌種基 本上不發生變異。
在啟用液氮超低溫保藏的菌種時，應先將安瓿管置於35～40℃的溫水中，使管中的 冰塊迅速溶解，然後再啟安瓿管，取懸浮的菌絲塊移植在培養基上活化培養。
（二）菌絲球生理鹽水法
先將食用菌菌種用液體振盪培養3～7天，然後將形成的菌絲球吸入裝有5mL無菌 生理鹽水的試管中，每管約移人4—5個菌絲球。試管用無菌橡皮塞塞上，並用蠟封口，置 室溫或4℃下保藏。一般可保藏1～2年。
（三）麥粒菌種保藏法
麥粒菌種保藏法是利用麥粒作培養料。用於保藏菌種的麥粒，含水量在25%左右， 這樣的麥粒，在滅菌後種皮不破裂。製作方法；先將小麥浸水5h，濾去水後晾乾麥粒表面 的水分，裝入小試管，裝入量為試管高的l/3；高壓蒸汽滅菌(壓力0.15MPa)滅30min；冷卻後接人孢於液或菌絲懸浮液，搖勻後置於適溫培養。當試管中的麥粒發滿菌絲後，放人 裝有氯化鈣的乾燥器內，進行抽氣乾燥，乾燥後，將乾燥器放於低溫(20℃以下)處保藏。 此法保藏菌絲，經1～2午後，再接到培養基上，菌絲生長仍然良好。

Ⅲ 常用的菌種保存方法有哪些

菌種保藏是食用菌產業的一項基礎工作，是確保野生種質資源基因留存和現有生產用種遺傳性能相對穩定的必要手段。菌種保藏的方法多種多樣，有的雖然保藏效果好，但投資高或操作繁雜。在生產實踐中，更需要設備投入少，能保障菌種不死亡、不污染、最大限度地保持優良種性的簡便方法，如斜面低溫短期保藏和自然基質較長期保藏相結合的方法。

一般而言，對母種進行長期保存，對原種進行短期保存。須保證優良菌種的性狀和活力不發生變異，不死亡，不被污染，確保其純度。因此，保存方法應具備取材容易、操作方便、菌種不易退化、長期保存不污染雜菌等優點。常用的菌種保存方法如下：

（一）斜面低溫保藏 該法的優點是保藏方便且所佔空間較小。具體做法是：菌絲長滿斜面後，放在0～5℃保存。以後每隔一定時間（2～3個月）轉管一次。轉管保存不能長期用PDA培養基，否則種性易退化，灰樹花降解木質纖維素的能力減弱。因此隔一定時間（1年左右）須把菌種轉接到木屑培養基上復壯，之後挑選健壯無污染的菌絲再轉回PDA培養基保存。在長期保存過程中，要防棉塞受潮滋生雜菌。菌種試管口最好用蠟燙封，以防培養基內水分過快蒸發。增加瓊脂用量（2.5%～3%）可減緩水分蒸發。還要防止菌種管上的標簽脫落而造成種系混雜。

斜面低溫保藏方法簡便易行，能隨時觀察保藏菌株的活力和純度，一旦染雜，肉眼能及時發現。

（二）自然基質保藏 此法是根據灰樹花的特性，利用自然基質保藏其菌種的方法。灰樹花是木腐菌，可以採用以木屑為主料的培養基。自然基質營養全面，且大部為緩釋養分，不易產生營養過剩或飢餓；其次，培養基理化性狀好，可吸收或緩沖菌絲代謝出的有害物質，水分與通氣協調平衡，部分菌絲扎入基質內生長，不裸露於空氣中，菌絲呼吸強度低，生命力強。

1.原料與配方 粗、細木屑比例適當，採用板栗樹木屑最佳，粗木屑粒徑為2毫米左右，細木屑為一般圓盤鋸屑，粗、細的比例為1∶2，添加干木屑重量20%的麩皮和1%的糖，含水率為60%左右。這樣的基質通氣性好，營養豐富且供菌絲分解利用的時間長，長到基質內部的菌絲比包裹在基質外部暴露於空氣中的菌絲耐受性強。不同粒徑的基質比例適當，還能協調氣與水的矛盾。粗粒過多，架空菌絲多；細粒過多，透氣性差，菌絲生長慢。應用配方如下：

栗木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%，水65%配料，裝入較粗大的試管中，裝料量為試管的1/3～1/2，1.5千克/厘米2滅菌1.5小時。冷卻後，接入需保藏的菌種，在28℃下培養，待菌絲長滿木屑培養基時取出換上無菌橡皮塞，在0～5℃冰箱內保藏1～2年轉管一次。

2.容器與裝量 採用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶，清洗潔凈，裝量一般不超過玻璃瓶容量的3/5，填料不能過滿，瓶壁所殘留的顆粒須擦拭乾凈，否則保藏的菌種易引起污染。

3.滅菌和冷藏 滅菌時若採用棉塞封口，基質表層易失水，接種成活率低，即使菌絲復活，生長也很緩慢，所以最好採用聚丙烯膜封口，接種後換用無菌棉塞培養，待菌絲長滿後再換成有孔滅菌膠塞冰箱保藏。

用上述方法保藏的菌種經3年貯放後，接出成活率均達90%以上，出菇驗證產量及子實體形態特徵均無明顯變化。因此，自然基質保藏法具有保存期長，菌種遺傳性能相對穩定的特點。

（三）木粒PDA斜面保藏 灰樹花在自然狀態下易發生於栗樹根部，這說明其營養需求較為特殊。根據灰樹花這種習性，在PDA基礎上添加適量的栗樹木粒製成母種培養基。在多年的使用中發現，用該培養基培養的母種生長勢好，在轉接原種時，適應能力強，萌發定植快；用作菌種保藏基質時，保藏時間長，並能很好保持菌種的優良性狀。

1.木粒PDA的製作 選取栗樹邊材，加工成0.3～0.5厘米的顆粒，及時烘乾或曬干備用。稱取葡萄糖10克，KH2PO41克，1溶解於1升清水中配製成營養液。將營養液倒入盛有木粒的小鋁鍋中，營養液以完全浸沒木粒為准。煮沸10分鍾，以加快木粒對營養液的吸收速度，起鍋靜置30分鍾讓木粒吸足營養液。撈出木粒，瀝掉表面的水，裝入試管，裝量為試管長的1/6，最多不得超過試管長的1/5，否則在擺制斜面時，不易使木粒均勻分散於斜面的表面上。

選取新鮮的馬鈴薯，去皮並切成薄片，稱取200克放入小鋁鍋中，加入1升清水，文火煮沸30分，趁熱過濾取汁，並補足1升的體積。稱取瓊脂20克，葡萄糖20克，KH2PO4 2克，MgSO47H2O 2克。先將瓊脂剪碎，加入到馬鈴薯濾液中，繼續用文火加熱，使瓊脂溶化。待瓊脂完全溶化後，加入稱好的其他3種營養成分，攪拌使這些物質溶解均勻，趁熱裝入已裝有木粒的試管中，裝至試管長的1/3處，塞上棉塞。

在0.8～1千克/厘米2蒸氣壓下滅菌40分，待氣壓降至0時，開蓋取出，趁熱輕輕抖拍試管，使木粒分散後即可擺制斜面，並使木粒呈半裸狀分布於斜面上，待凝固後便製成了木粒PDA培養基。

2.生長及保藏效果 木粒PDA斜面上培養的灰樹花母種，菌絲生長迅速、良好，12天即可長滿試管，但菌絲的後期生長勢更為粗壯、濃密，後勁足。轉接原種時，菌種適應力強，定植快。這表明，灰樹花菌絲的生長速度、生長勢不僅取決於本身的遺傳性，而且很大程度上取決於培養基的營養。常規PDA的營養成分，主要是可溶性的速效性營養，前期營養豐富，營養利用直接，因而前期菌絲生長迅速、良好，後期營養則不足，菌絲生長不良，長勢欠佳。木粒PDA由於在增添了木粒這一緩效性營養，就木腐性的灰樹花而言，營養配伍合理，補充了菌絲生長後期所需的營養，因此後勁足。

菌絲體對基質的分解利用是通過菌絲細胞分泌的胞外酶，將基質中的大分子營養分解成小分子營養後才被吸收利用的，而這些胞外酶大多為誘導酶，其合成與分泌受基質的誘導和分解產物阻遏機制調節。就纖維素酶而論，許多易代謝碳源（如葡萄糖等）具有引起酶合成阻遏作用，同時伴隨著菌絲體的旺盛生長，酶的大量合成則出現在易代謝碳源基本耗盡之後，且受到基質纖維素的誘導，常規PDA基質，到葡萄糖等易代謝碳源基本耗盡的後期，由於營養的缺乏，菌絲生理機能下降，酶的合成量減少。而木粒PDA不僅含有易代謝碳源——葡萄糖，又含有木粒這一緩效性營養，前期葡萄糖促進了菌絲體旺盛生長，獲取了大量的菌絲體，表現為菌絲粗壯、濃密。到了易代謝碳源耗盡的後期，木粒一方面補充了後期所需的營養，使菌絲的生埋機能維持在一定的水平；另一方面木粒的纖維素激活菌絲細胞纖維素酶的誘導機制，合成了大量的酶，保持了木腐生性灰樹花較強的分解木材的能力，因此，用該培養基培養的母種在轉接原種時適應力強，萌發定植快。因部分菌絲長入木粒內部，抵抗不良環境的生存能力增強，種質不易退化。木粒PDA灰樹花菌種，在0～5℃保藏2～3年再轉管活化，成活率仍達到90%左右。此外，木粒PDA應用於木腐性灰樹花種的提純復壯，效果也較理想。

（四）石蠟隔氧封藏 具體做法是將液態石蠟分裝入三角瓶內，裝量達瓶空間的1/3，塞好棉塞，於121℃滅菌2小時，然後置40℃溫箱中，使其水分蒸發，或置於乾燥器內數日以除去水分，石蠟呈透明狀為宜。在無菌條件下，用無菌吸管裝入已長好菌絲的斜面試管，使液面高出斜面頂部1厘米左右。塞上無菌橡皮塞，豎直保存。此法可使菌種存活3年以上，但以1～2年移植一次為好。移植時不必倒出石蠟，用接種鉤取一塊菌絲即可。因轉移時帶有石蠟，菌絲生長弱，需要再轉管1～2次，方能復壯。

Ⅳ 如何保藏草菇菌種

草菇是食用菌中需求溫度最高的品種。草菇菌種不耐低溫，較長時間保藏在10℃以下環境會失去活力，甚至死亡。所以，不能像其他品種的菌種一樣利用冰箱在0～4℃條件下保藏，很多菌種生產者還未掌握這項技術。草菇菌種的保藏方法有：傳代培養保藏法、液體石蠟覆蓋保藏法、栽培保藏法、冷凍乾燥液態氮超低溫保藏法、懸液保藏法、自然基質簡易保藏法等。生產上最常用的保藏方法是傳代培養保藏法。根據培養基成分的不同，傳代培養保藏有兩種方式：

（1）試管斜面接種培養保藏

將需要保藏的草菇菌種接到PDA試管斜面，在30℃下培養，菌絲長滿培養基後，在20℃左右溫度下存放，最低不要低於15℃。為減少保藏過程中基內水分的散失，通常將菌種放在塑料袋中，亦可用橡膠塞封緊管口，並每隔2～3個月轉管1次。

（2）稻草斜面接種培養保藏

稻草粉95%，石膏2%，麩皮或米糠3%，用石灰調節pH 8～9，含水量55%～60%。將配好的培養基裝入直徑25毫米、長250毫米的試管中，裝料量為試管長度的2／3，用棉塞封管口。滅菌後，接上草菇菌種，33℃下培養，待菌絲長滿試管時，用橡膠塞代替棉塞封緊管口。置15～20℃下保藏，每隔3～6個月轉管1次。