❶ 血清總蛋白測定,臨床上常用的方法是( )
正確答案:C
解析:血清總蛋白測定一般採用雙縮脲比色法,它是目前首先推薦的蛋白質定量方法,優點是清蛋白、球蛋白反應性相近,操作簡單,重復性好,干擾物質少,為首選的常規方法,缺點是靈敏度較低
。
❷ 人血清總蛋白測定的推薦方法是()。
【答案】:A
A項,雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,故可用來測定蛋白質含量。是目前首先推薦的蛋白質定量方法。B項,酚試劑法的顯色原理與雙縮脲法是相同的,只是加入了第二種試劑以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。C項,染料結合法污慶前染比色杯,不易洗凈。D項,凱氏定氮法是測定化合物或混合譽鄭清物中總氮量的一種方法。蛋白質含氮量比較恆定,可由叢猛其氮量計算蛋白質含量,故此法是經典的蛋白質定量方法。E項,紫外分光光度法是以溶液中物質分子對光的選擇性吸收為基礎而建立起來的一類分析方法。
❸ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些
①凱氏定氮法
原理:蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱,蛋白氮轉化為銨鹽,在強鹼性條件下將氨蒸出,用加有指示劑的硼酸吸收,最後用標准酸滴定硼酸,通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理:尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲,在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵,故多肽、蛋白質等都有雙縮脲(biuret)反應,產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點:靈敏度低,樣品必須可溶,在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg),且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾,但 准確度 較高,不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸,所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑(鹼性銅試劑),試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下,蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+, Cu+能定量地與Folin-酚試劑反應生成藍色物質,600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg),但較麻煩,也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合,要特別注意均勻澈底,否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法:利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法:若樣品液中有少量核酸共存按下式計算:
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260為角標)
⑤色素結合法(Bradford 法)
直接測定法:利用蛋白質與色素分子(Coomassie Brilliant Blue G-250)結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭(CBG)染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑,會在不同的酸鹼度下變色;在酸性下是茶色,在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候,因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境,因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多,吸到蛋白質上的CBG也多,藍色也會增強。因此,藍色的呈色強度,是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法:蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素,以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA(Bicinchoninc acid procere,4,4』-二羧-2,2』-二喹啉)法與Lowry法相似,主要差別在鹼性溶液中,蛋白質使Cu2+轉變Cu+後,進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色,在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定,因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度,較不受干擾,但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠,呈洋紅色,具有高電子密度,並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色,顏色的改變與蛋白質有定量關系,可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團,如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團,可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘),則可追蹤該金屬。
❹ 測定血清總蛋白的參考方法是
、總蛋白檢測方法:凱氏定氮法
將血清與強酸一起加熱消化,使血清中的含氮化合物轉化為銨鹽,再加鹼使銨鹽成為氨進經蒸餾分離出來,最後用酸滴定測定氮量,按每克氨相當於6.25g蛋白質計算蛋白質的濃度。
2、總蛋白檢測方法:雙縮脲法
蛋白質中的肽鍵(-CONH-)在鹼性條件下與Cu2+絡合成紫紅色復合物,產生的顏色強度在一定范圍內與蛋白質含量成正比。
3、總蛋白檢測方法:酚試劑法
蛋白質分子中的酪氨酸殘基和色氨酸殘基能夠和酚試劑中的磷鎢酸-磷鉬酸反應生成藍色化合物。Lowry改良法在酚試劑中加入Cu2+,提高了呈色的靈敏度,其中75%呈色靠銅離子產生。Lowry改良法的靈敏度為雙縮脲法的100倍左右。
總蛋白檢測方法
4、總蛋白檢測方法:UV法
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然後直接測試蛋白質。從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。
5、總蛋白檢測方法:BCA法
原理 BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑混合一起即成為蘋果綠,即BCA工作試劑。在鹼性條件下,BCA與蛋白質結合時,蛋白質將Cu2+還原為Cu+,工作試劑由原來的蘋果綠色變為紫色復合物。562nm下其光吸收強度與蛋白質濃度成正比。
BCA蛋白濃度測定試劑盒,Abbkine的蛋白質定量試劑盒(BCA法)提供一個簡單,快捷,兼容去污劑的方法,准確定量總蛋白。
❺ 血清白蛋白的測定方法
血清清蛋白測定一般採用溴甲酚綠比色法,目前首選推薦的清蛋白定量方法