A. 膽汁酸的提取工藝
本發明涉及動物提取工程領域，具體是一種提取家畜膽汁制備膽汁酸產品的方法。
背景技術：
膽汁酸是膽汁的重要成分，在脂肪代謝中起著重要作用。 膽汁酸主要存在於腸肝循環系統並通過再循環起一定的保護作用。只有一少部分膽汁酸進入外圍循環。促進膽汁酸腸肝循環的動力是肝細胞的轉運系統---吸收膽汁酸並將其分泌入膽汁、縮膽囊素誘導的膽囊收縮、小腸的推進蠕動，回腸黏膜的主動運輸及血液向門靜脈的流入。
目前，制備膽汁酸主要有化學合成法和天然膽汁提取法兩類。目前公開的從天然膽汁中提取膽汁酸的方法存在操作復雜，純度較低，收率較低，試劑消耗量大，成本較高，難以應用於工業化等缺點；化學合成法操作復雜，甲醇用量大，以氯仿和甲醇抽提膽固醇時分層不清晰，很難掌握，易出現誤差，很難達到分離膽固醇和脂質的目的，成本太高。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種提取家畜膽汁制備膽汁酸產品的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：
一種提取家畜膽汁制備膽汁酸產品的方法，工藝步驟如下：
1）取新鮮家畜膽，用65%的酒精浸泡清洗20～30min，剪碎家畜膽，取出家畜膽汁；
2）在所取膽汁中加入1～3倍體積的氫氧化鈉溶液，攪拌加熱30～50min，加熱溫度為50～60℃，靜置冷卻至40℃時，用體積濃度為30～35%的鹽酸調節pH值為2.2～4.6，靜置後，沉澱轉化完全；
3）過濾收集沉澱，加入2～5倍質量的水中，加入雙氧水溶液使得濃度達到混合懸浮液體積的2.2～4.5%，然後按膽汁質量的15～20%加入碳酸鈉固體粉末，使得沉澱轉化，過濾收集濾液，用體積濃度為30～35%的鹽酸調節濾液pH值為2.2～4.6，靜置後，過濾得沉澱，用水清洗至pH為6.5～7.5，乾燥後即可得到總膽汁酸粗品；
4）粗品中加入95%酒精溶液，調整溶液濃度至50～60%，攪拌30～50min，過濾收集濾液，按體積1:1加入苯乙烯-二乙烯苯萃取脫脂，取酒精層用氨水調節pH值為7.5～8.5，回收酒精溶液，加水至原體積，加入質量體積比濃度為12～15%氯化鈣水溶液，攪拌30～50min至沉澱完全，過濾收集沉澱物；
5）將沉澱物用水洗至淡黃色，加熱溶解，趁熱過濾，濾液用鹽酸溶液調節pH值為3～5，過濾收集沉澱，沉澱物用水清洗至pH為6.5～7.5，用65%酒精洗脫，期間不斷用薄層層析檢測，待沉澱外觀純一時，收集洗脫液直至完畢；
6）向洗脫液中加入質量比為1.2～1.5%的活性炭脫色後，於真空下蒸發回收酒精，得到膽汁酸產品結晶，置於50～60℃水浴中加熱12h，取出產品結晶在-10～-5℃真空乾燥3～5h，即得膽汁酸精品。
作為本發明進一步的方案：所述步驟2）中的靜置時間為1.5～3h。
作為本發明進一步的方案：所述步驟3）中的靜置時間為3～5h。
作為本發明進一步的方案：所述步驟1）中的氫氧化鈉溶液的質量體積比為50～90%。
與現有技術相比，本發明的有益效果是：在制備前，用酒精浸泡清洗，有效保證家畜膽品質；利用家畜膽汁提取物制備保健葯物，原料豐富價格低廉；制備方法安全無毒，簡單高效，成本低；整個制備過程條件溫和，試劑消耗量少，易於應用到工業化生產。
具體實施方式
下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的范圍。
本發明實施例中，一種提取家畜膽汁制備膽汁酸產品的方法，一種提取家畜膽汁制備膽汁酸產品的方法，工藝步驟如下：
1）取新鮮家畜膽，用65%的酒精浸泡清洗20～30min，剪碎家畜膽，取出家畜膽汁；
2）在所取膽汁中加入1～3倍體積的氫氧化鈉溶液，攪拌加熱30～50min，加熱溫度為50～60℃，其中，氫氧化鈉溶液的質量體積比為50～90%，靜置冷卻至40℃時，用體積濃度為30～35%的鹽酸調節pH值為2.2～4.6，靜置1.5～3h，沉澱轉化完全；
3）過濾收集沉澱，加入2～5倍質量的水中，加入雙氧水溶液使得濃度達到混合懸浮液體積的2.2～4.5%，然後按膽汁質量的15～20%加入碳酸鈉固體粉末，使得沉澱轉化，過濾收集濾液，用體積濃度為30～35%的鹽酸調節濾液pH值為2.2～4.6，靜置3～5h，過濾得沉澱，用水清洗至pH為6.5～7.5，乾燥後即可得到總膽汁酸粗品；
4）粗品中加入95%酒精溶液，調整溶液濃度至50～60%，攪拌30～50min，過濾收集濾液，按體積1:1加入苯乙烯-二乙烯苯萃取脫脂，取酒精層用氨水調節pH值為7.5～8.5，回收酒精溶液，加水至原體積，加入質量體積比濃度為12～15%氯化鈣水溶液，攪拌30～50min至沉澱完全，過濾收集沉澱物；
5）將沉澱物用水洗至淡黃色，加熱溶解，趁熱過濾，濾液用鹽酸溶液調節pH值為3～5，過濾收集沉澱，沉澱物用水清洗至pH為6.5～7.5，用65%酒精洗脫，期間不斷用薄層層析檢測，待沉澱外觀純一時，收集洗脫液直至完畢；
6）向洗脫液中加入質量比為1.2～1.5%的活性炭脫色後，於真空下蒸發回收酒精，得到膽汁酸產品結晶，置於50～60℃水浴中加熱12h，取出產品結晶在-10～-5℃真空乾燥3～5h，即得膽汁酸精品。
利用家畜膽汁提取物制備保健葯物，原料豐富價格低廉；制備方法安全無毒，簡單高效，成本低；整個制備過程條件溫和，試劑消耗量少，易於應用到工業化生產。