最常用細菌染色方法

『壹』 細菌常見的幾種染色方法

常用的是革蘭氏染色法，這個方法復雜一點，還有一個簡單染色法是用石炭酸復紅等等染色，還有一個特殊結構染色法和負染色法熒光染色法。

『貳』 細菌染色主要有哪些方法

細菌染色主要有革蘭染色法，抗酸性染色法，莢膜、鞭毛、芽孢 染色法和異染顆粒染色法等。

『叄』 給細菌染色的方法都有幾種，怎麼操作，都用復紅染色嗎麻煩一一講來，詳細點，本人初學者.

細菌染色分為活菌染色跟死菌染色兩種。其中死菌染色分為正染色跟負染色。正染色又包括普通染色與特殊染色兩種。普通染色有簡單染色法、革蘭氏染色法和抗酸染色法；特殊染色分為芽孢染色法、莢膜染色法和細胞壁染色法。一般都只用革蘭氏染色法跟抗酸染色法。

革蘭氏染色法(Gram's stain)是最常用的細菌染色法。細菌經結晶紫初染染成藍色。革蘭氏染色陽性菌（G+）細胞壁肽聚糖層數多，且肽聚糖為空間網狀結構，再經乙醇脫水，網狀結構更為緻密，染料復合物不易從細胞內漏出，仍為藍色。而革蘭氏染色陰性菌（G-）細胞壁脂類含量多，肽聚糖層數少，且肽聚糖為平面片層結構，易被乙醇溶解，使細胞壁通透性增高，結合的染料復合物容易泄漏，細菌被脫色為無色，再經石炭酸復紅稀釋液復染成紅色。
①將結晶紫染液加於塗膜上，染色（初染）1min。②水洗後加蘆戈氏碘液處理(媒染)1min。③水洗後用95％酒精脫色，脫色時頻頻搖動玻片，直至流下的液體無色為止(約需0.5min)。④水洗後加石炭酸復紅稀釋液染色(復染)0.5min。⑤水洗，用濾紙輕輕吸干，待標本充分乾燥後進行鏡檢。染色過程中，水洗要用自來水的細流徐徐沖洗，沖洗塗膜的背面，勿使強水流直接沖到塗膜上。

抗酸染色法（acid-fast stain）對分枝桿菌屬等一般染色法不易著色的抗酸性細菌染色。要注意：1）塗片要略厚；2）加溫染色或延長染色時間，加溫時隨時補加染色液；3）分枝桿菌呈紅色（+），其他細菌和背景為藍色。
①石碳酸復紅加溫染色8~10分鍾。②3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鍾，脫色是輕搖玻片，直到塗片顏色脫去為止。③水洗後，用鹼性美藍復染1分鍾。④再次水洗，印干。

芽孢染色法是專門給細菌芽孢染色的。要注意：1）芽孢染色用的菌種應控制菌齡，使大部分芽孢仍保留在菌體上為宜；2）染色加熱過程要及時補充染液，切勿讓塗片乾涸。
①孔雀綠加熱染色5分鍾。②水洗。③番紅染色2~3分鍾。④水洗，乾燥。

莢膜染色法是專門給與染料親和性弱的細菌莢膜染色。由於莢膜很薄，且含水量高（90%以上），易變形，所以製片和染色時一般不用熱固定。這個包括黑素負染色法、Leifson染色法跟Tyler染色法。
黑素負染色法：
1.制菌液：在潔凈載破片一端加一滴蒸餾水，按無菌操作要求，用接種環取少量斜面試管培養物於蒸餾水中，輕輕混勻。
2.塗片（推片法）：取另一塊邊緣光滑的載玻片，使之一端與菌液接觸，然後迅速均勻地將菌液推向玻片的另一端，使菌液塗成一薄層。置空氣中自然乾燥。注意：勿熱固定。
3.復紅染色：滴加石炭酸復紅染色液覆蓋塗布面，染色4~5分鍾後，除去多餘染液（勿用水洗）。乾燥時間不要太長，防莢膜脫水。
4.黑素染色：在玻片一端加一滴1%黑素液，再取一塊邊緣光滑的裁玻片，當邊緣與黑素液接觸後，迅速均勻地推向玻片另一端，使成一薄層。置空氣中自然乾燥。
5. 鏡檢（油鏡）：菌體呈紅色，背景呈黑色，莢膜無色。
注意事項：滴黑色素要量少；取菌要適量。
Leifson染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加Leifson』s染色液覆蓋塗布面，染色10分鍾，傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.滴加硼酸鈉美藍染色液，染色5分鍾，輕輕用水沖洗，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下鏡檢，菌體呈藍色，莢膜呈紅色。
Tyler染色法
1.制備塗片同前，自然乾燥。
2.滴加結晶紫冰醋酸染色液覆蓋塗布面，染色5~7分鍾。傾去多餘染料（勿用水洗）。
3.用20%CuS04水溶液輕輕沖去染料，用吸水紙印干後，置空氣中自然乾燥。
4.油鏡下檢查，菌體呈紫色，莢膜呈淺紫色或淺藍色。

細胞壁染色法是觀察細菌細胞壁時採用的染色法。細菌細胞壁很薄，它與染料結合的能力差，不易著色，在細菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞，細胞壁本身並未染色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設法使細胞壁能著色，而細胞質則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的復合物，而使細胞質不易被著色，經結晶紫或甲基綠染色後，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。
根據細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理後，會產生質壁分離這一現象，經染色後也可在普通光學顯微鏡下區分細胞壁和細胞質膜。
1．單寧酸法
(1)將培養16—18小時的巨大芽孢桿菌按常法製成塗片。
(2)用5％單寧酸染5分鍾後，水洗。
(3)用0．2％結晶紫染3—5分鍾，水洗，吹乾。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質呈淡紫色。
2．磷鉬酸法
(1)制備濃厚的塗片，在未乾時浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鍾。
(2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鍾。
(3)水洗後，吹乾，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質無色。
3．區分細胞壁與細胞質膜
(1)乙醚蒸氣法
(a)將巨大芽孢桿菌塗布於蓋玻片上，翻轉蓋玻片使其放在乙醚蒸氣瓶的瓶口上蒸3分鍾。
(b)取下蓋玻片置Bouin氏固定液中30分鍾後取出，水洗。
(c)用硫堇染色30秒鍾。
(d)水洗，水封，置油鏡下觀察。
(2)NaCl法
(a)取一滴25％NaCl溶液於潔凈的載玻片上。
(b)挑一小環培養6小時的枯草芽孢桿菌，在25％NaCl水滴中塗布均勻，待自然乾燥。
(c)滴加0．01％結晶紫於其上，使蓋滿有菌部分，30秒鍾後水洗，乾燥，用油鏡觀察結果。

『肆』 一般在什麼情況下進行細菌簡單染色

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。
常用【鹼性】染料進行簡單染色，這是因為：在中性、鹼性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而鹼性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷(酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷)，因此鹼性染料的染色部分很容易與細菌結合使細菌著。染色後的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易於識別。
常用作簡單染色的染料有：美藍、結晶紫、鹼性復紅等。

『伍』 細菌細胞染色的方式有哪幾種各有什麼作用

簡單染色法：利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.例如番紅.
1．塗片：用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜.
2．乾燥：可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤.
3．固定：手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸塗片反面,以不燙手為宜）.
4．染色：加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l～2min.
5．水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.
6．乾燥
7．鏡檢
復染色：利用用兩種以上染料對細菌進行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,需要鹼性染料（basic dye）初染液；媒染劑（mordant）；脫色劑（decolorising agent）和復染液（counterstain）.
鹼性染料初染液的象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫（crystal violet）.媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘（iodine ）是常用的媒染劑.脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同類型的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95%的酒精（ethanol）.復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,而且將細胞區分成G+和G-兩大類群,常用的復染液為番紅.
1.載玻片固定.在無菌操作條件下,用接種環挑取少量細菌於干凈的載玻片上塗布均勻,在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鍾.
3.自來水沖洗,去掉浮色.
4.用碘-碘化鉀溶液媒染1分鍾,傾去多餘溶液.
5.用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒,革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色,革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色.
6.用番紅染液或者沙黃復染30秒,革蘭氏陽性菌仍呈紫色,革蘭氏陰性菌則呈現紅色.

『陸』 細菌染色的基本步驟有哪些

質粒是細菌染色體外的遺傳物質，多為環狀雙螺旋DNA分子。質粒可以自身復制，質粒是自行復制單位，有的需與核質染色體的復制同步，稱為嚴緊型復制(stringentreplication)。質粒編碼細菌各種重要的生物學性狀。編碼性菌毛的質粒稱致育質粒或F質粒(fertilityplasmid)，具有F質粒的細菌有性菌毛。編碼細菌各種毒力因子的質粒統稱毒力質粒或Ⅵ質粒(virulenceplasmid)，如致病性大腸桿菌在黏膜上定居及產生毒素的能力可由不同質粒編碼，其中K質粒編碼對黏膜具有黏附活性的菌毛，ST質粒與LT質粒分別編碼耐熱腸毒素和不耐熱腸毒素。細菌對抗菌葯物或重金屬鹽類的抗性則由R質粒(resistanceplasmid)所決定。一個質粒可同時具有幾種編碼功能。有的質粒還可以結合到染色體上，如F質粒在變形桿菌內是獨立存在的，但在大腸桿菌內則可與染色體結合，這種質粒稱為附加體(episome)。轉座因子(transposableelement)近年來發現微生物的某些DNA片段作為一個獨立單位可在染色體上移動，此種移動甚至可發生在不同種細胞之間。這種可移動的DNA片段稱之為轉座因子。細菌的轉座因子有三種類型：插入序列(insertsequence，IS)、轉座子(transposon，Tn)以及某些特殊的噬菌體。毒力島(pathogenicityisland，PAl)是20世紀90年代提出的一個新概念。PAI指病原菌的某個或某些毒力基因群，分子結構與功能有別於細菌染色體，但位於細菌染色體之內，因此稱之為『島」。PAI雖然是染色體的DNA片段，但兩端往往具有重復序列與插入元件，其G+C％及密碼使用與細菌染色體有明顯差異，分子量多為30～40kb，也有達100kb者。

『柒』 細菌的形態鑒別染色法最常用的是什麼

細菌的形態鑒別染色法最常用的方法如下：

『捌』 細菌的簡單染色方法誰能介紹下

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。

操作步驟

1．塗片：用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻，塗成極薄的菌膜。

2．乾燥：可自然晾乾，或將塗片置於火焰高處微熱烘乾，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2-3次（用手指觸塗片反面，以不燙手為宜）。

4．染色：加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液)，染l～2min。

5．水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。

6．乾燥

7．鏡檢

『玖』 細菌簡單染色

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用於菌體一般形狀和細菌排列的觀察。
常用鹼性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、鹼性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而鹼性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷(酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷)，因此鹼性染料的染色部分很容易與細菌結合使細菌著。染色後的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易於識別。
常用作簡單染色的染料有：美藍、結晶紫、鹼性復紅等。
你使用草酸銨結晶紫染色液，染色迅速，著色深，菌體呈紫色。

『拾』 細菌有哪些染色方法

1
革蘭氏染色法
是最常用的鑒別染色法之一。此法起始1881年，染色步驟是先用結晶紫或龍膽紫染液加於已固定好的標本上使之著色，其後加碘液作媒染劑，再用酒精脫色，最後用復紅或沙黃復染。革蘭氏染色的結果與培養基成分、培養條件及操作技術等有密切關系。如塗片太厚影響酒精脫色，革蘭氏陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌。脫色時若酒精作用時間太長,
www.ttplay8.cn
,革蘭氏陽性菌又會染成革蘭氏陰性菌。在缺乏鎂鹽的培養基中，革蘭氏陽性菌可變成革蘭氏陰性菌。菌齡也能影響染色的結果，這與生長過程中核酸含量的改變有關。革蘭氏染色法的原理還不十分清楚，有化學學說、等電點學說、滲透性學法，目前最通常的解釋是革蘭氏陽性菌在95%酒精中因含粘肽多而導致細胞壁脫水，通透性減低，使在細菌細胞內著色的染料─碘復合物不易透出細胞壁，所以保留了紫色；革蘭氏陰性菌含粘肽少，其細胞壁在95%酒精作用下通透性變化不大，酒精容易進入菌體內溶解染料─碘復合物而透出，失去紫色後被復染成為紅色。
2
抗酸染色法
有些細菌，如結核桿菌，不般不易著色，一旦染上色後又不易被鹽酸酒精脫色，稱為抗酸菌。主要步驟是將細菌塗片、乾燥、固定後，以石炭酸復紅染液加溫進行染色，然後用含酸的酒精脫色，最後用美藍復染。一般細菌以及標本中的物質都被脫色，抗酸菌則不能，仍為紅色。在藍色背景上呈紅色的細菌即為抗酸菌。
3
細菌特殊結構的染色法
細菌的特殊結構，如鞭毛、莢膜、細胞壁、芽孢及異染顆粒等，用普通染色法不易著色，故需用特殊染色法。
4
負染色法
是指背景著色而細菌本身不著色。常用墨汁負染色法配合單染色法（如美藍）檢查細菌的莢膜，背景呈黑色，菌體染成藍色,
www.qq1880.com
,莢膜不著色，包繞在菌體周圍，成為一層透明的空圈。
5
熒光染色法
用熒光染料，如金胺、吖啶橙等進行染色。細菌用熒光染料著色後在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細菌發出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細菌，有加快檢查速度和提高陽性率等優點。
求採納