❶ 茶粕中的茶皂素含量怎麼檢測
茶籽餅粕營養豐富，是潛力很大的飼料資源
但茶籽餅粕含有茶皂素，對動物機體有很大毒害
作用本文針對茶皂素，對現有的主要檢測檢驗方
法綜述如下
1 茶皂甙的分析方法
1.1 重量法
朱全芬等（1983）從糖體，配基兩方面著手測
定，對比出以其配基含量為基礎的定量法較宜茶
皂甙能與鉛鋇鹽等作用產生沉澱，形成復鹽，沉
淀劑的選擇以鹼式醋酸鉛為好，其測定值穩定，干
擾少，誤差范圍小，重演性強 復鹽在酸性條件下
又重新解離出金屬離子和茶皂甙 除去金屬離子
後，茶皂甙在強酸條件下水解，糖體被水解，獲得
不溶於水的茶皂苷元 由茶皂苷元的含量可求得
茶皂甙的含量 該法涉及到換算系數的問題，即
100g茶皂苷元相當於多少克茶皂甙理論上，一個
分子的茶皂甙水解可以得到一個分子的茶皂苷
元，但是茶皂甙是一類混合物，配基結構有多種，
因此，不同研究者對於茶皂甙分子量的測定值略
有出入；茶皂甙中有機酸類也能發生上述反應，其
結果的准確度亦受水解條件的制約；另外，該法雖
測定數值穩定重演性強等優點，但分析時間長，
操作繁復，難以滿足工業分析的需要
1.2 比色法
比色法是利用三萜類皂苷的顯色反應，選擇
一種線性關系良好的顯色劑，反應後用分光光度
計測吸光度，用對照品皂甙的標准工作曲線定量
常用的顯色劑有間苯三酚- 乙醇溶液 苯酚- 硫
酸香草醛- 濃硫酸對- 二甲氨基苯甲醛三氯
化鐵- 濃硫酸法等 研究表明，比色法消耗試劑
少，操作簡便，分析快，重現性及准確度也較好，適
用於工業分析
1.2.1間苯三酚法（皂甙糖體定量分析法）
該法基於測定水解前後糖含量之差，間接定
量皂甙的含量 戊糖與己糖在非含氧酸存在的酸
性條件下可轉化成糖醛，糖醛進一步可與間苯三
酚作用形成有色物質，色澤強度與糖分含量呈一
定相關性樣品中除了茶皂素以外，尚有寡糖和多
糖存在，選用溶劑法提取茶皂素以排除多糖的干
擾，再用鹼式醋酸鉛除去供試液中的茶皂素，測定
出其他糖分的含量，與供試液中總糖分測定值之
差，計算出茶皂素的含量
該法適用於實驗室研究和工業分析中茶皂甙
含量的測定，操作簡便快速，消耗試劑量少，重現
性強此法不僅能用於茶籽中茶皂素的定量分析，
亦適用於已知糖分種類的糖體定量分析 與重量
法相比，2種方法都比較穩定，但間苯三酚法測定
結果略高，且分析一個樣品，間苯三酚法一般只需
1個工作日，重量法至少需要3個工作日
1.2.2苯酚- 硫酸法
單糖或低聚糖在濃硫酸作用下迅速脫水生成
糠醛衍生物，與苯酚縮合成有色物質，其呈色與濃
度呈線性關系，據此測定糖含量，從而間接測定皂
甙的含量 島田和子採用固相萃取柱的前處理方
式，將茶葉浸出液加入到Sep- Pak C18固體萃取
柱，先用蒸餾水洗去水溶性的單寧，再用濃度20%
的甲醇洗去兒茶素，最後用濃度80%的甲醇洗提
得到含皂甙的甲醇溶液，真空乾燥下濃縮得到茶
皂素的粗品，測定了GyokuroMatchaSenchaHojicha和Bancha的浸出液中茶皂甙的含量，並指出
Gyokuro中的皂甙含量最高Mukai等也用該法對
茶籽中的皂甙進行了測定
1.2.3香草醛- 硫酸法
香草醛- 硫酸法反應機理可能是皂甙在強氧
化性酸作用下脫氫，氧化後再與香草醛加成生成
有色物質該方法具有操作流程短，方法簡便可行
等優點 朱全芬等，傅春玲等指出以8%的香草醛
- 乙醇溶液和77%硫酸為顯色劑，測定波長為
2.5nm，顯色反應溫度為60 ，反應時間為
15min為宜，線性范圍為0- 20 g/ml
該法與間苯三酚法相比較，反應靈敏，顯色相
對穩定，反應條件容易控制，但試劑消耗量大，操
作流程長，被測樣品需要經過初步純化間苯三酚
法測定結果稍高，可能是由於部分多糖類未被完
全除去造成的 香草醛- 濃H2SO4顯色法是最常
用的皂苷定量方法, 實驗結果表明它具有反應靈
敏, 操作相對簡測糖定量法具有顯色相對穩定,反
應條件容易控制,但試劑消耗量大,操作流程長,被
測樣品需經過初步純化等缺點
1.2.4對- 二甲氨基苯甲醛法
皂素與對二甲氨基苯甲醛在濃磷酸的乙醇溶
液顯棕紅色，且在一定濃度范圍內符合比爾定律，
確定的最佳條件如下：顯色劑加量為1mL3%對二
甲氨基苯甲醛乙醇溶液和1.5mL的濃磷酸，顯色
反應溫度70 ，反應時間15min，測定波長
525nm，本方法相對標准偏差（RSD%）為1.61%，平
均加標回收率X=99.44% 五環三萜的齊墩果烷結
構的皂甙類都能與對- 二甲氨基苯甲醛反應顯
色，且色澤強度隨皂甙濃度增加而增強利用這一
反應，用1%對- 二甲氨基苯甲醛與茶皂甙浸提液
加熱顯色，用H3PO4作穩定劑，在525nm進行測
定，用茶皂甙對照品作標准曲線，從而求出茶皂甙
的含量該法測量濃度范圍為0- 100mg/ml 譚新東
等用該法分別對茶樹的不同部位進行測定，指出
樣品顆粒的粉碎程度對試驗結果有較大影響；未
脫油的茶籽粉中含有約30%的粗脂肪，對茶籽粉
中茶皂甙的提取造成了困難，使測量結果偏低
1.2.4三氯化鐵- 濃硫酸法
茶皂甙與三氯化鐵（FeCl3）呈黃綠色的顯色反
應，因此可用分光光度計測其吸光度，用對照品皂
苷的標准工作曲線定量 姜勤等採用該法，用D
型大孔樹脂除去小分子糖氨基酸無機鹽等水溶
性雜質及部分大分子色素等雜質後，用分光光度
計測定其吸光度，對茶皂甙進行了定量分析 劉曉
庚等認為植物樣品中的酚類物質也能與FeCl3發
生類似的顯色反應，直接用單波長分光光度法測
定時干擾嚴重 為此，其利用茶皂甙與FeCl3反應
之間的反應速率不同，進行速差分光光度法（或雙
波長分光光度法等）測定，結果可以在二者不進行
分離的條件下直接測定樣品中的茶皂甙含量，測
量濃度范圍為0- 20mg/ml
1.3 熒光光度法
熒光光度法是基於茶皂甙對鋁- 8- 羥基喹啉
的熒光有增敏作用，且在一定濃度范圍內熒光相
對強度（F）隨茶皂甙含量的變化而呈線性變化進
行測量 劉曉庚等考察了Na
+ K+
Cu
2+
Fe
3+
Fe
2+
NH
4+
Ma2+
Mg2+
Ca
2+
Zn
2+
Co
2+
M0 (Ⅳ）Cr
3+ 等常
見陽離子和Cl
- SO4
2-Br
- CO3
2- 等常見陰離子以
及蔗糖葡萄糖大豆蛋白腖等干擾劑的影響，在
干擾劑的濃度不超過試樣中茶皂甙含量50倍時，
均不產生明顯的干擾作用因此認為，在通常情況
下用該方法對茶皂甙進行測定時，無需對樣品進
行特殊或分離處理便可直接測定，該法的線性范
圍為0耀4.25mg/ml 用熒光光度法和速差分光光
度法測定茶皂甙的結果與重量法的測定結果十分
吻合，而且2種方法都具有相對標准差（RSD）小
重現性好靈敏度高測量濃度范圍較寬回收率
也好等特點 熒光光度法與速差分光光度法相比
較，熒光法的重現性和靈敏度優於速差法，但熒光
法的回收率偏低，測量濃度范圍稍小，更適合於微
量茶皂甙的測定
1.4 薄層掃描法
茶皂甙中皂甙雖是一系列結構極為相似的三
萜皂甙化合物，但在高效薄層色譜（HPTLC）板上
通常只顯示一個斑點，在280nm附近有最大光吸
收，可以將對照品與之比較，利用薄層色譜掃描儀
進行定量，即可測定茶皂甙中皂甙類成分的含量
該法重現性好，回收率高，結果較准確，穩定性好，
即使沒有薄層掃描儀，可以用碘顯色，然後刮板分
離，待碘揮發後溶解在甲醇中，用紫外光譜測定
田世雄等用HPTLC（20cm 10cm），以正丁醇（用
水飽和）：甲醇：吡啶=18：1：1為展開劑，測定了茶
皂甙含量 結果表明，薄層色譜分離樣品，可除去
干擾成分，在不經顯色的情況下，直接進行紫外掃
描，大大降低了皂甙測定誤差，其測定值在數十小
時內無明顯變化
1.5 溴酸鉀法
溴對沒有空間阻礙的碳- 碳雙鍵加成反應很
快，故可以作為滴定反應的滴定劑茶皂甙的五環
三萜的糖苷配基上的19 有一具環己烯性質的
雙鍵，有些與其成酯的酸間也有個雙鍵，且均不呈
空間阻礙，因而可以溴酸鉀作為滴定劑，以甲基橙
為指示劑，以溶液由橙紅色變淺或消失作為滴定
終點來測定茶皂甙的含量 由於茶皂甙有些含1
個雙鍵有些含2個雙鍵，因此茶皂甙與溴加成的
n值需要通過對純品測試結果來確定；另外，由於
干擾溴加成反應的影響因素較多，所以宜在測定
之前對試樣加以預處理，排除干擾物
1.6 高效液相色譜法
高效液相色譜（HPLC）法具有高壓高速高
效高靈敏度的特點，現已成為分離皂甙的常用方
法 由於茶皂甙結構的相似性和復雜性，目前
HPLC主要應用於茶皂甙的分離和純化方面鍾世
安等（2007）研究了用索氏提取器提取茶籽餅中茶
皂素，選擇合適的最大吸收波長，排除了黃酮和單
寧酸的干擾，優化了色譜條件，建立了反相高效液
相色譜法測定茶皂素含量的方法：以RP- ODS
C18(150mm 4.6mm，5 m)作分析柱，以甲醇作茶
皂素溶液的溶劑和流動相，流速慢，控制在0.50
mLmin- 1，檢測波長為280nm，以質量濃度為橫坐
標，峰面積為縱坐標，得到工作曲線，其回歸方程
為Y=3.54 106X+1.15 105，相關系數為0.9997
測得回收率在97.2 102.1 之間，相對標准偏
差(n=7)小於0.35 此法的試劑消耗量少，操作簡
便，回收率高，相對標准偏差較小，精確度和准確
度高 劉新清採用該法對茶籽中的茶皂甙進行定
量分析，採用ODS- Hypersil柱，甲醇作流動相，在
215nm處進行檢測 劉新清檢測茶皂素採用
Hewlett Packard ODSHypersil5微米色譜柱，125
4毫米不銹鋼柱，甲醇作流動相，0.5毫升/ 分流
速；檢測波長215納米，柱溫為室溫，茶皂素標准
品含量大於95% 結果表明，該法簡便快捷重現
性好准確度高，適於茶皂甙含量的測定 譚博等
（2009）以VP- ODS（250mm 4.6mm，C18，5 m）
作分析柱，以甲醇- 水（v v=9 1）作流動相，流
速控制在1.0ml min，檢測波長280nm，以質量濃
度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得到工作曲線為
Y=3.02 10
6X 1.16 10
4，線性相關系數為0.999
5 回收率為97.02% 102.82% 該法具有相對標
准偏差較小，精密度和回收率高，操作簡便等優
點，是一種較好的分析方法採用該方法測得茶籽
餅中粗茶皂素的含量為11.89% 趙靜娟等（2009）
採用Angilen,TC- C18, 25 m,250mm 4.6mm做
色譜柱檢測波長為209nm，柱溫: 25 ，用流動相
A:純水；流動相B:乙腈進樣5 L，運行25min 梯
度:0~10min 內流動相B由5%增至25%, 保持
14min後1min內回至5% 流速: 1mL/min 並比較
了)比較了香草醛濃硫酸顯色定量法和HPLC定量
法,得出HPLC法可以對油茶皂苷進行更准確的定
量的結論
2 小結
目前，茶皂甙以其優越的表面活性以及生物
活性得到了廣泛的應用由於皂甙結構的相似性
多樣性以及復雜性，單體皂甙的分離工作一直是
茶皂甙研究中最主要的困難之一 盡管HPLC的
應用使得皂甙的研究工作發生了質的飛躍，現已
分離鑒定茶皂甙60 種左右，但是在進入HPLC
系統前經多次的萃取，多次的硅膠柱，操作繁瑣且
一定程度上造成了重復性差等問題，因此，對茶皂
甙單體的定量分析還有待於分離條件的進一步提
高 另外，也還有許多的問題有待於進一步的研
究，如茶皂甙總量的測定方法各有優缺點，沒有一
種標準的方法；茶皂甙標准品難尋，且現有的標准
品大多為混合物，不同品種的茶 不同工藝得到的
標准品有一定的差異等
試驗研究