什麼是基因轉殖時最常用的方法

⑴ 轉基因技術的方法

由於導入基因的表達,引起生物體性狀的可遺傳的修飾,這一技術稱之為轉基因技術。人們常說的「遺傳工程」、「基因...因此,轉基因技術與傳統技術是一脈相承的,其本質都是通過獲得優良基因進行遺傳改良。

轉基因技術是指利用分子生物學技術，將某些生物的基因轉移到其它物種中，改造生物的遺傳物質，使遺傳物質得到改造的生物在性狀、營養和消費品質等方面向人類需要的目標轉變。轉基因技術在農業生產、動物飼養和醫葯研究等諸多領域有著廣泛的應用前景。

世界上第一種轉基因植物是一種含有抗生素葯類抗體的煙草，1983年培育成功。世界上第一種轉基因食品是1993年投放美國市場的轉基因晚熟西紅柿。

目前，美國是世界上轉基因作物種植最廣泛的國家，種植面積佔全球轉基因作物種植面積的66％。美國國內約80％的大豆、75％的棉花和40％的玉米都是轉基因作物。與美國相反，歐盟對轉基因的態度就保守了許多。歐盟允許種植的轉基因作物只有大豆、玉米和油菜等，種植面積僅佔世界轉基因作物面積的0．3％。

然而，自第一種轉基因生物問世，人類有關轉基因技術和轉基因食品的爭論就從未停止。對轉基因技術的主要擔心有：含有抗蟲害基因的食品是否會威脅人類健康；轉基因產品對環境的影響；轉基因產品是否會破壞生物多樣性；轉基因產品帶來的倫理問題等等。

⑵ 基因工程中轉化的方法有哪些

轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表現型發生相應變化的現象。該現象首先發現於細菌。

化學法(化學葯物如氯化鈣等)轉化
氯化鈣法轉化細胞 細菌處於0℃及CaCl2低滲溶液中時,菌細胞膨脹成球形.轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附於細胞表面,經42℃短時間熱擊處理促進細胞吸收DNA復合物。

直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」

具體做法：用限制酶將供體細胞中的DNA切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別載人不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在各個受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫擴增）,從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法把帶有目的基因的DNA片段分離出來。但這種方法工作量大,具有一定的盲目性。20世紀80年代以後,隨著DNA核苷酸序列分析技術的發展,人們已經可以通過DNA序列自動測序儀對提取出的基因進行核苷酸序列分析,並且通過一種擴增DNA的新技術（也叫PCR技術）,使目的基因片段在短時間內成百萬倍地擴增。上述新技術的出現大大簡化了基因工程的操作技術。

⑶ 常用的轉基因方法有哪些

常用的轉基因方法包括農桿菌轉化法、基因槍轉化法和顯微注射法3種。

⑷ 最常用的轉基因動物製作方法

生產轉基因動物的方法有很多，如：顯微注射法、精子載體法、逆轉錄病毒載體法、胚胎幹細胞介導法、體細胞克隆介導法、人工染色體介導的基因轉移法等，這些方法各有其優缺點，在轉基因動物生產中有著不同程度的應用。

顯微注射法是動物轉基因技術中最早使用的方法。1982年，美國人Gordon就是利用這種方法獲得了名噪一時的轉基因鼠。其基本原理是在顯微鏡下直接將目的基因注射到受精卵細胞的原核內，在目的基因與胚胎基因組融合後進行體外培養，最後移植給受體母畜「借腹懷胎」。這種方法的優點是：可靠性高，重復性好，目的基因的整合效率相對較高，導入基因片段的大小和類型不受限制，轉基因在世代之間可以穩定遺傳。該方法也有其缺點，主要體現在導入基因整合的隨機性和不可見性，這樣會導致基因表達不穩定及可能出現不希望的插入突變。該方法成功的範例很多，如：美國科學家Hammer等在1985年獲得一批轉基因兔、綿羊和豬；荷蘭科學家KrimPenfort等於1991年獲得了轉基因牛；1985年，我國朱作言院士等成功獲得了世界上首例轉基因魚；由中國農業大學李寧院士領導的課題組於2008年獲得了一頭導入人CD20抗體基因的轉基因奶牛——貝貝。

有的學者另闢蹊徑，創立了精子載體轉基因法。該方法是將精子與目的DNA進行預培養後，使精子具有攜帶目的基因進入卵子的能力，精子與卵子結合後，該基因被整合到受精卵的DNA中。同顯微注射法相比，該方法有幾個明顯的優點：無需顯微注射操作，不會對胚胎造成損傷，整合率高，成本很低，不需要對動物進行胚胎移植手術處理等。但該方法成功率不高、效果不穩定，有待科研人員進一步探索和改進。與顯微注射法相比，該方法成功的例子不多。1989年義大利Lavitrano等首次報道利用精子載體法獲得轉基因鼠；1996年義大利Sperandio科研小組報道了採用該方法生產轉基因牛和豬。

談到病毒，人們往往面容失色，殊不知病毒在科學上有很多妙用。逆轉錄病毒是一種RNA病毒，在轉基因技術中有著獨特的應用。人們將目的基因結合到逆轉錄病毒上，通過病毒感染可將目的基因插入到宿主基因組中去。該方法具有可同時感染大量胚胎、不需要昂貴的顯微注射設備等優點，但也存在插入外源DNA大小有限、外源基因易發生重排和丟失、逆轉錄病毒的序列可能幹擾轉基因表達等缺點。應用該方法，美國人Salter等（1987）生產出轉基因雞；德國學者Hofmann等獲得綠色熒光蛋白轉基因豬（2003），隨後又生產出轉基因牛（2005）；來自冷泉港實驗室的Michael獲得能夠發熒光的山羊（2006）。

⑸ 轉基因怎麼轉

轉基因植物是基因組中含有外源基因的植物。通過原生質體融合、細胞重組、遺傳物質轉移、染色體工程技術獲得，改變植物的某些遺傳特性。
人工轉基因動物就是基因組中含有外源基因的動段孝消物。它是按照預先的設計，融合重組細胞、遺傳物質轉移、染色體工程和基因工程技術將外源基因導入精子、卵細胞或受精卵，再以生殖工程技術，有可能育成轉基因動物。

遺傳轉化的方法按其是否需要通過組織培養、再生植株通常可分成兩大類，第一類需要通過組織培養再生植株，常用的方法有農桿菌介導轉化法、基因槍法；另一類方法不需要通過組織培養，比較成熟的主要有花粉管通道法，花粉管通道法是中國科學家提出的。
農桿菌介導轉化
農桿菌是普遍存在於土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，並誘導產生冠癭握知瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可將T-DNA插入到植物基因組中。
因此，農桿菌是一種天然的植物遺傳轉化體系。人們將目的基因插入到經過改造的T-DNA區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合，然後通過細胞和組織培養技術，再生出轉基因植株。
農桿菌介導法起初只被用於雙子葉植物中，自從技術瓶頸被打破之後，農桿菌介導轉化在單子葉植物中也得到了廣泛應用，其中水稻已經被當作模式植物進行研究。
花粉管通道法
在授粉後向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導入受精卵細胞，並進一步地被整合到受體細胞的基因組中，隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體。該方法於80年代初期由中國學者周光宇提出，中國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優點是不依賴組織培養人慎搭工再生植株，技術簡單，不需要裝備精良的實驗室，常規育種工作者易於掌握。
核顯微注射法
核顯微注射法是動物轉基因技術中最常用的方法。它是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細胞的原核內，注射的外源基因與胚胎基因組融合，然後進行體外培養，最後移植到受體母畜子宮內發育，這樣分娩的動物體內的每一個細胞都含有新的DNA片段。-這種方法的缺點是效率低、位置效應(外源基因插入位點隨機性)造成的表達結果的不確定性、動物利用率低等，在反芻動物還存在著繁殖周期長，有較強的時間限制、需要大量的供體和受體動物等特點。
詳細步驟：在顯微鏡下，用一根極細的玻璃針（直徑1-2微米）直接將DNA注射到胚胎的細胞核內，再把注射過DNA的胚胎移植到動物體內，使之發育成正常的幼仔。用這種方法生產的動物約有十分之一是整合外源基因的轉基因動物。
基因槍法
利用火葯爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然後通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制。而且其載體質粒的構建也相對簡單，因此也是轉基因研究中應用較為廣泛的一種方法。
精子介導法
精子介導的基因轉移是把精子作適當處理後，使其具有攜帶外源基因的能力。然後，用攜帶有外源基因的精子給發情母畜授精。在母畜所生的後代中，就有一定比例的動物是整合外源基因的轉基因動物。
同顯微注射方法相比，精子介導的基因轉移有兩個優點：首先是它的成本很低，只有顯微注射法成本的1/10。其次，由於它不涉及對動物進行處理，因此，可以用生產牛群或羊群進行實驗，以保證每次實驗都能夠獲得成功。
核移植轉基因法
體細胞核移植是一種轉基因技術。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養基中培養，使外源基因整合到供體細胞上，然後將供體細胞細胞核移植到受體細胞——去核卵母細胞，構成重建胚，再把其移植到假孕母體，待其妊娠、分娩，便可得到轉基因的克隆動物。
體細胞核移植法
先在體外培養的體細胞中進行基因導入，篩選獲得帶轉基因的細胞。然後，將帶轉基因體細胞核移植到去掉細胞核的卵細胞中，生產重構胚胎。重構胚胎經移植到母體中，產生的仔畜百分之百是轉基因動物。