獲得蛋白質沉澱的常用方法

『壹』 有哪些方法可使蛋白質沉澱沉澱的原理是什麼有何實用意義

鹽析法可以使蛋白質沉澱。
鹽析法的原理
蛋白質在水溶液中的溶解度取決於蛋白質分子表面離子周圍的水分子數目，亦即主要是由蛋白質分子外周親水基團與水形成水化膜的程度以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。蛋白質溶液中加入中性鹽後，由於中性鹽與水分子的親和力大於蛋白質，致使蛋白質分子周圍的水化層減弱乃至消失。同時，中性鹽加入蛋白質溶液後由於離子強度發生改變，蛋白質表面的電荷大量被中和，更加導致蛋白質溶解度降低，之蛋白質分子之間聚集而沉澱。由於各種蛋白質在不同鹽濃度中的溶解度不同，不同飽和度的鹽溶液沉澱的蛋白質不同，從而使之從其他蛋白中分離出來。簡單的說就是將硫酸銨、硫化鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質在水溶液中的穩定性因素去除而沉澱。
---摘自網路

『貳』 請問使蛋白質沉澱的方法有幾種

1、鹽析法：多用於各種蛋白質和酶的分離純化，不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。

2、等電點沉澱法：不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。

3、有機溶劑沉澱法：多用於生物小舉廳分子、多糖及核酸產品的分離純正搜隱化，中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉漏蘆淀蛋白質。

『叄』 蛋白沉澱的方法和原理

蛋白質通過鹽析的辦法沉澱的原理是降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出。
蛋白質的沉澱是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉澱。蛋白質沉澱常用的方法有鹽析、等電點沉澱、有機溶劑沉澱、生物鹼試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉澱等。

『肆』 沉澱蛋白質的方法有哪些，各有和特點

沉澱蛋白質的方法有哪些？各有何特點？
答：（1）鹽析法，此方法並未破壞蛋白質天然狀態，沉澱出的蛋白質可不變性，所以鹽析法是分離制備蛋白質或蛋白類生物制劑的常用方法。
（2）有機溶劑沉澱法，通過破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉澱，此方法在常溫下可使蛋白質變性，低溫下可使變性速度減慢。
（3）重金屬鹽沉澱法，可與蛋白質結合形成不溶於水的蛋白質鹽沉澱，引起蛋白質變性。臨床用於救重金屬鹽中毒。

『伍』 蛋白質沉澱有哪幾種方法哪些是可逆的沉澱反應

蛋白質沉澱 蛋白質在溶液中的穩定性是有條件的、相對的.如果條件發生改變,破壞了蛋白質溶液的穩定性,蛋白質分子則聚集成大的顆粒沉澱出來.
蛋白質溶液的穩定性與質點大小、電荷和水化作用有關,只要破壞這些條件,蛋白質自然會從溶液中沉澱出.
沉澱蛋白質有以下方法：
1、鹽析法
2、有機溶劑沉澱法
3、重金屬鹽沉澱法
4、生物鹼試劑和某些酸（三氯醋酸,磺基水楊酸,硝酸等）沉澱法
5、加熱變性沉澱法
蛋白質變性：蛋白質的天然構象遭到破壞導致其生物活性喪失的現象.蛋白質在受到光照、熱、有機溶劑以及一些變性劑的作用時,次級鍵受到破壞,導致天然構象的破壞,使蛋白質的生物活性喪失.
蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉澱（precipitation）,變性蛋白質一般易於沉澱,但也可不變性而使蛋白質沉澱,在一定條件下,變性的蛋白質也可不發生沉澱.
蛋白質所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩定因素,即顆粒表面的水化層和電荷.若無外加條件,不致互相凝集.然而除掉這兩個穩定因素（如調節溶液pH至等電點和加入脫水劑）蛋白質便容易凝集析出.
可以看出,如將蛋白質溶液pH調節到等電點,蛋白質分子呈等電狀態,雖然分子間同性電荷相互排斥作用消失了.但是還有水化膜起保護作用,一般不致於發生凝聚作用,如果這時再加入某種脫水劑,除去蛋白質分子的水化膜,則蛋白質分子就會互相凝聚而析出沉澱；反之,若先使蛋白質脫水,然後再調節pH到等電點,也同樣可使蛋白質沉澱析出.

『陸』 沉澱蛋白質的方法有哪些，各有和特點

等電點沉澱法和鹽析

一、等電點沉澱法

等電點沉澱法是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。

在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉澱物。

等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利於懸浮液的過濾。

二、鹽析

鹽析是指在蛋白質水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質沉澱出來的現象。中性鹽是強電解質，溶解度又大，在蛋白質溶液中，一方面與蛋白質爭奪水分子，破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜；另一方面又大量中和蛋白質顆粒上的電荷，從而使水中蛋白質顆粒積聚而沉澱析出。

向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液後，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。向某些蛋白質溶液中加入某些重金屬鹽，可以使蛋白質性質發生改變而凝聚，進而從溶液中析出，這種作用叫作變性，性質改變，是化學反應，無法復原。

把動物脂肪或植物油與氫氧化鈉按一定比例放在皂化鍋內攪拌加熱，反應後形成的高級脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物（膠體）。往鍋內加入食鹽顆粒，攪拌、靜置，使高級脂肪酸鈉與甘油、水分離，浮在液面。

(6)獲得蛋白質沉澱的常用方法擴展閱讀：

蛋白質的變性

1、物理因素包括：加熱、加壓、攪拌、振盪、紫外線照射、X射線、超聲波等

2、化學因素包括：強酸、強鹼、重金屬鹽、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。

3、在熱、酸、鹼、重金屬鹽、紫外線等作作用下，蛋白質會發生性質上的改變而凝結起來。這種凝結是不可逆的，不能再使它們恢復成原來的蛋白質．蛋白質的這種變化叫做變性。蛋白質變性之後，紫外吸收，化學活性以及粘度都會上升，變得容易水解，但溶解度會下降。

4、蛋白質變性後，就失去了原有的可溶性，也就失去了它們生理上的作用，因此蛋白質的變性凝固是個不可逆過程。

『柒』 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例

1、鹽析法：此方法並未破壞蛋白質天然狀態，沉澱出的蛋白質可不變性，所以鹽析法是分離制備蛋白質或蛋白類生物制劑的常用方法2、有機溶劑沉澱法：通過破壞蛋白質的水化膜而使蛋白質沉澱，此方法在常溫下可使蛋白質變性，低溫下可使變性速度減慢3、重金屬鹽沉澱法：可與蛋白質結合形成不溶於水的蛋白質沉澱，引起蛋白質變性。

『捌』 沉澱蛋白質的方法五種

蛋白質從溶液中析出的現象，稱為蛋白質的沉澱。蛋白質沉澱常用的方法有鹽析法、等電點沉澱法伏碧輪、有機溶劑沉澱法、重金屬鹽沉澱法、生物鹼試劑與某些酸（如三氯醋酸）沉澱等。

鹽析法

在蛋白質溶液中加入大量的硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽，破壞蛋白質的水化膜和中和電荷，使蛋白質顆粒相互聚集，發生沉澱。

等電點沉澱

等電點沉慧旁淀法是利用蛋白質在等電點時溶解度最低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。

有機溶劑沉澱

有機溶劑能降‎低溶液的電解‎常數，從而增加蛋白‎缺信質分子上不同‎電荷的引力，導致溶解度的‎降低；另外，有機溶劑與水‎的作用，能破壞蛋白質‎的水化膜，故蛋白質在一‎定濃度的有機‎溶劑中的溶解‎度差異而分離‎的方法稱有機溶劑分段‎沉澱法。常用於蛋白‎質或酶的提純‎。使用的有機溶‎劑多為乙醇和‎丙酮。

重金屬鹽沉澱法

其原理是重金屬鹽可與蛋白質形成不溶於水的蛋白鹽沉澱，從達到沉澱蛋白質的目的。

生物鹼試劑/酸沉澱

蛋白質又可與生物鹼試劑以及某些酸結合成不溶性的鹽沉澱，沉澱的條件應當是pH小於等電點，這樣蛋白質帶正電荷易於與酸根負離子結合成鹽。

『玖』 有哪些沉澱方法可以純化蛋白質多寫幾種

1、等電點沉澱空基法纖嘩.蛋白在其等電點位置溶解度最低,因而易於沉澱出來.
2、鹽析法.根據蛋白在不同濃毀虧行度的鹽溶液中溶解度不同,進行蛋白分離純化.
3、有機溶劑沉澱法.如乙醇、丙酮能使大多數球狀蛋白在水溶液中的溶解度降低,使得蛋白從溶液中沉澱出來.

『拾』 常用蛋白質沉澱方法有哪些有哪些應用實例

沉澱可以是由蛋白質變性從而產生沉澱，也可以是由於鹽析。
蛋白質變性是指光照，熱，有機溶濟以及一些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質的空間結構被破壞，使得蛋白質喪失活性，該過程不可逆。
鹽析是指向蛋白質的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質沉澱析出，這是由於加入鹽降低了蛋白質得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質又會溶解。
（一）材料的預處理及細胞破碎

分離提純某昌緩鄭一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：

1. 機械破碎法

這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。

2. 滲透破碎法

這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。

3. 反復凍融法

生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。

4. 超聲波法

使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。

5. 酶法

如用溶菌酶破壞微生物細胞等。

(二) 蛋白質的抽提

通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取耐頌出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。

（三）蛋白質粗製品的獲得

選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：

1. 等電點沉澱法

不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。

2. 鹽析法

不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解哪皮而不變性。

3. 有機溶劑沉澱法

中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉澱蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機溶劑濃度。

（四）樣品的進一步分離純化

用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。