紫外分光光度常用方法

① 紫外分光光度計使用方法及原理

可見-紫外分光光度計的工作原理基於朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律，即物質在一定濃度 的吸光度與它的吸收介質的厚度呈正比，其應用波長范圍為200～400nm的紫外光區、400～850nm的可見光區。
主要由輻射源（光源）、色散系統、檢測系統、吸收池、數據處理機、自動記錄器及顯示器等部件組成。
將分析樣品和標准樣品以相同濃度配製在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標 准譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器准確，精密度高，且測定條件要相同。 實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不 同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑 。

② 紫外分光光度法

分光光度法
分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。 在分光光度計中，將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與眾不同波長相對應的吸收強度。如以波長（λ）為橫陵念坐標，吸收強度（A）為縱坐標，就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法，稱為分光光度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質的方法，稱為紫外分光光度法；用可見光光源測定有色物質的方法，稱為可見光光度法。它們與比色法一樣，都以Beer-Lambert定律為基礎。 上述的紫外光區與可見光區是常用的。但分光光度法的應用光區包括紫外光區，可見光區，紅外光區。
波長范圍
(1)200～400nm的紫外光區，(2)400～760nm的可見光區， (3)2.5～25μm(按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區。
儀器
紫外分光光度計，可見分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進行校正檢定。
編輯本段絕汪笑基本原理
當一束強度為I0的單色光垂直照射某物質的溶液後,由於一部分光被體系吸收,因此透射光的強度降至I,則溶液的透光率T為: 根據朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律: A=abc 式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm^3)， a為吸光系數。其中吸光系數 與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關。溶液中其他組分（如溶劑等）對光的吸收可用空白液扣除。 由上式可知，當固定溶液層厚度l和吸光系數 時，吸光度A與溶液的濃度成線性關系。在定量分析時，首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況（吸收光譜），從中確定最大吸收波長 ，然後以此波長 的光為光源，測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時，根據測量的吸光度A，查工作曲線即可並含確定出相應的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。

③ 簡述用紫外分光光度法定性鑒定方法有哪些

1、比對最大吸收峰的方法；
2、摩爾吸光系數的比對法；
3、比對吸收光譜曲線法。

④ 紫外分光光度法常用的鑒別方法有哪些

（一）使用的收池必須潔凈，並注意配對使用坦激。量瓶、移液管均應校正、世扒洗凈後使用。
（二）取收池時，手指應拿毛玻璃面的兩側，裝盛樣品以池體的4/讓返襪5
為度，使用揮發性溶
液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭乾凈，檢視應無溶劑殘留。

⑤ 光學分析法的紫外-可見分光光度法

紫外-可見光區一般指波長200nm至760nm范國內的電磁波。根據物質分子對此光區電磁波的吸收特性進行定性和定量分析的方法稱為紫外-可見分光光度法。紫外分光光度法使用的輻射波長范圍是200~400nm，主要是引起分子中的外層價電子的能級躍遷。分子吸收此區域的紫外線後，在發生價電子能級躍遷的同時，也伴隨著分子的振動和轉動能級的躍遷，故形成帶狀紫外吸收光譜。據此可進行某些類型的有機物的定性、定量和結構分析：可見分光光度法使用的輻射波長范圍是400~760nm，具有長共軛結構的有機物或有色無機物吸收一定波長的可見光後，發生價電子能級躍遷，並伴隨振動和轉動能級的躍遷，其吸收光譜也是帶狀光譜。通常紫外分光先度計都有可見光波段，因此常將兩者一起稱為紫外-可見分光光度法。

⑥ 紫外可見分光光度計的具體使用方法

1、機器開關在機器的右側，按一下就會打開，有個小的屏幕，可以按數字鍵來操作選項，測吸光值操作。

⑦ 紫外-可見分光光度法的使用方法

《中華人民共和國葯典》2005年版 第一部 附錄VA （P附錄28）： （1） 波長 由於環境因素對機械部分的影響，儀器的波長經常會略有變動，因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外，還應於測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、搏游435.83nm、546.07nm與576.96nm，或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進行校正，鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm與637.5nm波長處有尖銳吸收峰，也可作波長校正用，但因來源不同或隨著時間的推移會有微小的差別，使用時應注意。
（2）吸光度的准確度可用重鉻酸鉀的硫酸辯如溶液檢定。取在120℃乾燥至恆重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定 ，用0.005mol/L硫酸溶液溶解並稀釋至1000ml，在規定的波長處測定並計算其吸收系數，並與規定的吸收系數比較，應符合表中的規定。 波長/nm235（最小）257（最大）313（最小）350（最大）吸收系數
的規定值 124.5 144.0 48.62 106.6 吸收系數
的許可范圍 123.0～126.0 142.8～146.2 47.0～50.3 105.5～108.5 （3） 雜散光的檢查可按下頁表的試劑和濃度，配製成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規定的波長處測定透光率，應符合表中的規定。 試劑濃度%（g/ml）測定用波長（nm）透光率 %碘化鈉 1.00 220 <0.8 亞硝酸鈉5.00340<0.8 測定時，除另有規定外，應以配製供試品溶液的同批溶劑為空白對照，採用1cm的石英吸收池，在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度，或由儀器在規定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規定外，吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內，並以吸光度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數，以在0.3～0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應小於供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度會偏低；狹縫寬度的選擇，應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增大為准，由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度後應減去空白讀數，或由儀器自動扣除空白讀數後再計算含量。當溶液的pH值對測定結果有影響時，應將供試品溶液和對照品溶液的pH值調成一致。
（1） 鑒別和檢查 分別按各品種項下的方法進行。
（2） 含量測定 一般有以下幾種。 按各品種項下的方法，分別配製供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分規定量的100%±10%，所用溶劑也應完全一致，在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度後，按下式計算供試品中被測溶液的濃度∶
CX=（AX/AR）CR
式中 CX為供試品溶液的濃度；
AX為供試品溶液的吸光度；
CR為對照品溶液的濃度；
AR為對照品溶液的吸光度。 供試品溶液加入適量顯色劑後測定吸光度以測定其含量的方法為比色法。
用比色法測定時，應取數份梯度量的對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色後，以相應試劑為空白，在各品種規定的波長處測定各份溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標准曲線，再根據供試品的吸光度在標准曲線上查得其相應的濃度，並求出其含量。
也可取對照品溶液與供試品溶液同時操作，顯色後，以相應的試劑為空白，在各品種規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸光度，按上述（1）法計算供試品溶液的濃度。
除另有規定外，比色法所用空白系指用同體積溶劑代替對照品或供試品溶液，然後依次加入等攜銀啟量的相應試劑，並用同樣方法處理製得。

⑧ 紫外可見分光光度法是什麼

紫外可見分光光度法：是根據物質分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立輪宴起來的一種定性、定量和結構分析方法。

紫外可見分光光度法從問世以來，在應用方面有了很大的發展，尤其是在相關學科發展的基礎上，促使分光光度計儀器的不斷創新，功能更臘配銀加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。

分光光度計的主要部件

1、光源：發出所需波長范圍內的連續光譜，有足夠的光強度，穩定。可見光區：鎢燈，碘鎢燈（320-2500nm)，紫外區：氫燈，氛燈（180-375nm)氬燈：紫外、可見光區均可用作光源。

2、單色器：將光源發出的連續光譜分解為單色光的裝置。

3、棱鏡：依據不同波長光通過棱鏡時折射率不同，光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數量很大的等寬度等間距條痕。利用光通過光柵時發生衍射和干涉現象而分光。

4、吸收池：用於盛待測及參比溶液，可見光區∶光學玻璃池；紫外區賣虛：石英池。

5、檢測器：利用光電效應，將光能轉換成電流訊號，光電池，光電管，光電倍增管。

6、檢流計：刻度顯示或數字顯示、自動掃描記錄。

⑨ 紫外分光光度計的使用步驟是什麼

儀器名稱：紫外/可見分光光度計系統
使用方法：開機步驟
1 開光譜儀電源
2 開計算機電源
3 在文件管理器中用滑鼠指按UV WinLab圖標,此時出現UV WinLab的應用窗口,儀器已准備好,可選用適當方法進行分析操作.
2 方法：在分析中必須對分光光度計設定一些必要的參數,這些參數的組合就形成一個「方法」.Lambda系列UV WinLab軟體預設四類常用方法.
1）掃描（SCAN）,用以進行光譜掃描.
2）時間驅動（TIME DRIVER）,用以觀察一定時間內某種特定波長處縱坐標值的變化,如酶動力學.
3）波長編程（WP）用以在多個波長下測定樣品在一定時間內的縱坐標值變化,並可以計算這些縱坐標值的差或比值.
4）濃度（CONC）用以建立標准曲線並測定濃度.
2.1 進入所需方法,在方法窗口中選擇所需方法的文件名.
2.2 方法的設定
2.2.1 掃描、波長編程及時間驅動
各項方法可根據顯示的參數表,逐項按需要選用或填入,並可參考提示.
2.2.2 濃度
濃度方法窗口下方標簽較多,說明做濃度測定時需要參數較多.用滑鼠指按每一標簽,可翻出下頁,其上有一些需要測定的參數.必須逐頁設定.
3 工具條
3.1 SETUP
當所需的各項參數都已在參數中設好後,必須用滑鼠指按SETUP,才能將儀器調整到所設狀態.
3.2 AUTOZERO
用滑鼠指按此鍵,分光光度計即進行調零（在光譜掃描中則進行基線校正）.
3.3 START
用滑鼠指按此鍵,光度計即開始運行所設定的方法.
4 方法運行
4.1 掃描,時間驅動,波長編程
方法選好後,先放入參比溶液,按AUTOZERO鍵,進行自自動校零或背景校正結束後再放入樣品,按START,分光光度計即開始進行,同時屏幕上出現圖形窗口,將結果顯示出來.
4.2 濃度
4.2.1制訂標准曲線
1 方法選好後,確認各項數據正確,特別是REFS頁中第一行要選中右上角的「edit mode」.再放入參比溶液,按AUTOZERO鍵自動校零或背景校正.
2 按setup,待該圖標消失後,再按「start」,按提示依次放入標准色列的各管溶液,每次都按提示進行操作.
3 標准色列測定
完畢後,屏幕上出現calibgraphwindow,顯示擬合的標准線,並標出各項標准管的位置,屏幕下方還有一條Concentration mode的對話框,可以用來修改擬合的曲線類型（按 change calbration）,或修改標准溶液的任何一管（replace）,或取消某一管（delete）,或增加標准溶液管數（add）.如過已經滿意,則按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口.
4 標准曲線有關的各項數據,均在calibresultwindow中,可用滑鼠將其調出觀察.其中包括每個標准溶液的具體數據,標准曲線的回程方程式,相關系數,殘差.
4.2.2樣品濃度測定
4.2.2.1剛制定好的標准曲線接著進行樣品濃度測定時
1 只需在concentration mode對話框按analyse sample鍵,進入樣品測定窗口.
2 按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作.
3 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中的相應位置.
4.2.2.2利用原有的標准曲線接著進行樣品濃度測定時
4.2.2.2.1 調出所測定樣品的濃度方法文件,首先調出refs頁,將原設edit mode選項取消,改設左上角的using exiting
calibration.重新將方法存檔,則今後再調用時即不需再作修改.
4.2.2.2.2 在sample頁中按要求重設各種樣品名稱機樣品信息.
4.2.2.2.3 按工具條中setup鍵,將主機設到該方法所設定的條件.
4.2.2.2.4 將參比溶液放入比色室,按autozero鍵做背景校零.
4.2.2.2.5 按start鍵,按設定的樣品順序放入各樣品管,每次按提示進行操作.
4.2.2.2.6 屏幕上出現結果窗口,結果數據將依次顯示在樣品表中相應位置.

⑩ 紫外光度法

方法提要

在紫外光譜區，硝酸根有強烈的吸收，其吸光度與硝酸根的濃度呈正比。在波長210～220nm處，可測量其吸光度。水中溶解的有機物在波長220nm及275nm處均有吸收，而硝酸根在275nm處沒有吸收。這樣，需在275nm處測定硝酸根的吸光度進行校正。

方法適用於地下水中硝酸根的測定。最佳測定范圍為0.2～20mg/L。

儀器和裝置

紫外分光光度計。

石英比色皿。

試劑

鹽酸。

氨基磺酸銨溶液(50g/L)取5g氨基磺酸銨溶於100mL蒸餾水中。

硝酸根標准儲備溶液ρ(NO^-₃)=100mg/L稱取0.1631g在105～110℃滾梁烘乾1h的硝酸鉀(KNO₃)溶於蒸餾水中，定容至1000mL。

硝酸根標准溶液ρ(NO^-₃)=10.0mg/L分取10.0mL硝酸根標准儲備溶液，以水稀釋至l00mL容量瓶中。

校準曲線

分取含硝酸根0μg、10μg、20μg、50μg、100μg、…1000μg的硝酸根標准溶液(10mg/L)於一系列100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至50mL左右，加入1mLlmol/LHCl，搖勻。加入3～5mL氨基磺酸銨溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。在分光光度計上，於波長210nm處，用1cm石英比色杯，以試劑空白作參比，測量吸光度。殲掘以硝酸根含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制校準曲線。

分析步驟

取水樣50.0mL於100mL容量瓶中，按校準曲線操作步驟進行測定。於210nm處測定後，調整波長至275nm，仍以試劑空白作參比，再一次測量吸光度。

按下式計算水樣中硝酸根的質量濃度:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

以硝酸鹽氮表示的質量濃度:

岩石礦物分析第四分冊資源與環境調查分析技術

式中:ρ(NO^-₃)為水樣中硝酸根的質量濃度，mg/L;A_NO-3為減去有機物的吸收值後，從校準曲線(λ=210nm)上查得的硝酸根量，μg;V為所取水氏備核樣體積，mL。0.226為硝酸根換算為氮的系數。