基因工程水稻最常用的轉化方法

『壹』 基因工程中轉化的方法有哪些

轉化（transformation）是某一基因型的細胞從周圍介質中吸收來自另一基因型的細胞的DNA而使它的基因型和表現型發生相應變化的現象。該現象首先發現於細菌。

化學法(化學葯物如氯化鈣等)轉化
氯化鈣法轉化細胞 細菌處於0℃及CaCl2低滲溶液中時,菌細胞膨脹成球形.轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附於細胞表面,經42℃短時間熱擊處理促進細胞吸收DNA復合物。

直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」

具體做法：用限制酶將供體細胞中的DNA切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別載人不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分別在各個受體細胞中大量復制（在遺傳學中叫擴增）,從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法把帶有目的基因的DNA片段分離出來。但這種方法工作量大,具有一定的盲目性。20世紀80年代以後,隨著DNA核苷酸序列分析技術的發展,人們已經可以通過DNA序列自動測序儀對提取出的基因進行核苷酸序列分析,並且通過一種擴增DNA的新技術（也叫PCR技術）,使目的基因片段在短時間內成百萬倍地擴增。上述新技術的出現大大簡化了基因工程的操作技術。

『貳』 植物轉基因工程的基本過程是怎樣的

您這題目太大了.
幾種常用的植物轉基因方法
BIOX.CN 2005-5-19 16:54:41 來源：生命經緯
遺傳轉化的方法按其是否需要通過組織培養再生植株可分成兩大類,第一類據要通過組織培養再生植株,常用的方法有農桿菌介導轉化法、基因槍法；另一類不需要通過組織培養,目前比較成熟的主要有帆悄花粉管通道法.
1農桿菌介導轉化法
農桿菌是普遍存在於土壤中的一種革蘭氏陰性細菌,它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙於葉植氏昌物的受傷部位,並誘導產生冠瘓瘤或發狀根.根想農桿菌和發根農桿菌細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒,其上有一段T—DNA,農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後,可將T—DNA插入到植物基因組中.因此,農桿菌是一種天然的植物遺傳轉化體系.人們將目的基因插入到經過改造的T—DNA區,藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合,然後通過細胞和組織培養技術,再生出轉基因植株.農桿菌介導法態核渣起初只被用於雙於葉植物中,近年來,農桿菌介導轉化在一些單子葉植物(尤其是水稻)中也得到了廣泛應用.
2基因槍介導轉化法
利用火葯爆炸或高壓氣體加速(這一加速設備被稱為基因槍),將包裹了帶目的基因的
DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中,然後通過細腦和組織培養技術,再生出植株,選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株.與農桿菌轉化相比,基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制.而且其載體質粒的構建也相對簡單,因此也是目前轉基因研究中應用較為廣泛的一種方法.
3花粉管通道法
在授粉後向於房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,並進一步地被整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體.該方法於印年代初期由我國學者周光字提出,我國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的.該法的最大優點是不依賴組織培養人工再生植株,技術簡單,不需要裝備精良的實驗室,常規育種工作者易於掌握.

『叄』 可以在水稻原生質體里轉化的載體需要滿足什麼條件

水稻原生質體分離與轉化方法

（儲成才 課題組 2014-01-20）

【概述】原生質體是一種非常好的瞬時表達系統，現在已被廣泛應用於植物生理生化和分子機制的研究，包括細胞信號轉導過程，離子轉運，細胞壁合成，蛋白質分泌以及細胞程序化死亡等生物學過程。現在已有的基於原生質體的實驗技術包括亞細胞定位，基因瞬時表達分析，啟動子活性分析，離子吸收實驗以及蛋白質相互作用驗證（如BiFC和蛋白質免疫共沉澱）等。本文主要闡述如何利用原生質體進行亞細胞定位，包括原生質體的制備與轉化，定位載體的選擇，共定位蛋白參照的游鏈介紹，熒光蛋白的性質和波長選擇等問題。

一、實驗的前期准備：

1. 水稻材料：將露白的水稻種子(中花11或者日本晴均可)整齊的播種在營養土（最好混有蛭石，營養土與蛭石的比例為1:1）中，放在溫室生長14-21天。或者放在96孔PCR板上，萌發兩天後，換成1×木村營養液培養7-10天。注意如果採用水培苗必須每天更換營養液，否則水培苗纖維化程度較高，葉鞘部分不夠肥厚，且不容易被酶液消化。制備一次原生質體需要50-60棵水稻幼苗，可供轉化質粒5-8個。

2. 質粒制備：轉化原生質體對質粒的質量要求比較高，需要使用試劑盒大量提取。通常大量提取一次需要100 mL菌液，使用Qiagen中量提取試劑盒可獲得100-150 μg的高純度無內毒素的質粒。質粒提取完畢後需要定量，通常將質粒稀釋到 2 μg/μL，一次原生質體轉化需要5-10μg質粒。

二、試劑和耗材：

1. 耗材：耗材准備如下表所示。

50 mL 藍口瓶 1 否 用於配製酶液

250 mL 三角瓶 2 是 用於盛放酶液和過濾原生質體

A4列印紙 4-10 否 暫時盛放刀片切下的葉鞘薄片

玻璃板 1 否 避免刀片劃傷實驗台

50 mL Nalgen圓底有機玻璃管 2 是 用於離心收集原生質體

2 mL離心管 6-10 是 用於原生質體轉化

雙面刀片 8 否 用於切水稻莖和葉鞘

0.22 μm濾膜 2-3 否 用於過濾酶液

細胞培養板 1 否 用於培養轉化的原生質體

2. 試劑准備：

(1) Enzyme solution

0.6 M D-Mannitol (M=182.17) 2.74 g 5.47 g 10.93 g

10 mM MES (M=195.24, pH=5.7) 0.0487 g 0.0975 g 0.195 g

1.5% Cellulase R-10（w/v, Yakult）0.375 g 0.75 g 1.5 g

0.75% Macerozyme（w/v, Yakult）0.1875 g 0.375 g 0.75 g

D-Mannitol 和MES 在常溫儲存，Cellulase R-10和Macerozyme R-10在4度冰箱儲存。用1M KOH 調pH 至5.7，然後65℃水浴10min ，過0.22μM 濾膜除菌至宏磨首無菌三角瓶中（注意pH 值一定要准確，否則將極大的影響原生質體的制備效率。Cellulase R-10可以用Cellulase RS 代替，但是Cellulase RS 的最適pH 大約為6.0左右）。待酶液冷卻至室溫後，加入如下試劑： 0.1% BSA

0.025 g 0.05 g 0.1 g 3.4 mM CaCl 2 (M=110.99) 0.0095 g 0.019 g 0.038 g 50 mM β-ME (14.3 M) 8.75 μL 17.5 μL 35 μL

50 μg/ml Carbenicillin

1.25 mg

2.5 mg

5 mg

(CaCl 2可配製1M CaCl 2，然後加入85 μL/ 25 mL ，Carbenicillin 配製50 mg/ mL 的母液)。 (2) W5 Solution 154 mM NaCl (M=58.44) 0.9 g 1.8 g 3.6 g 125 mM CaCl 2 (M=110.99) 1.39 g 2.78 5.56g 5 mM KCl (M=74.55)

0.037 g 0.074 g 0.148 g 2 mM MES (M=195.24, pH=5.7)

0.039 g

0.078 g

0.156 g

用1M KOH 調pH 至5.7 , 121℃滅蔽數菌20 min 。 (3) MMg Solution 0.6 M D-Mannitol (M=182.17) 10.93 g 15 mM MgCl 2 (M=95.22) 0.143 g 4 mM MES (M=195.24, pH=5.7)

0.078 g

用1M KOH 調pH 至5.7 , 121℃滅菌20 min 。 (4) 40% PEG Solution 0.6 M D-Mannitol 0.546 g

10.93 g 100 mM CaCl 2

0.5 mL (1M CaCl 2) 1.11

g 40% (v/v) PEG 4000 (Fluka, Sigma-Aldrich )

2 g (體積約等於1.75 mL)

40 g

Tips ：由於PEG 吸水後體積會膨脹，所以必須在定容前給PEG 留出一部分體積。配製該

溶液時先溶解D-Mannitol 和CaCl 2後，再加入PEG ，65℃水浴加熱10min 至完全溶解後，再定容到最終體積。

三、實驗步驟

1. 原生質體制備：

(1) 預先配製0.6 M D-Mannitol 溶液100 mL 。

(2) 將培養的水稻苗從莖基部截斷後，用刀片切成0.5 mm 薄片，每次4-5顆苗/1個刀片(莖部比較好，葉片的細胞比較小，去除衰老的葉鞘)。將切好的水稻細條迅速轉移入0.6 M D-Mannitol 溶液中，在常溫下60-80 rpm 培養30 min 。

(3) 用神奇濾布（Miracloth）過濾後，再葯匙將濾布上的水稻薄片轉移入含有酶液的250 mL 三角瓶中（三角瓶需用錫箔紙包住，避免見光）。放入28℃搖床，在黑暗條件下60-80 rpm酶解4-5 h。

Tips：以上步驟為節省時間，也可以直接將切好的水稻薄片轉移入酶液中進行酶解。如果不經過0.6 M Mannitol質壁分離預處理的，則需抽真空半小時（15 mmHg）。

(4) 取10 μL在光學顯微鏡下觀察原生體的完整性，健康的原生質體為邊緣清晰的圓形游離態。

(5) 加入與酶液等體積的W5 Solution，用力搖晃15 s，充分釋放原生質體。

(6) 用W5 Solution潤洗滅菌過的網篩(35 μm, 100目), 將酶解的原生質體通過網篩，過濾到新的250 mL三角瓶中。再用少量W5 Solution沖洗網篩，充分洗脫網篩上的原生質體，並將其全部轉入250 mL三角瓶中。

(7) 將三角瓶中的原生質體分裝到兩個50 mL透明離心管中，水平轉子450 g（大約1500 rpm）離心3 min（注意調整升降速為3），小心去除上清。

(8) 加入15 mL W5 Solution重懸原生質體，並於450 g 離心3 min。小心去除上清後，重懸原生質體於1 mL MMg Solution中，使細胞的終濃度為1-5×106 cell/mL。

2. 原生質體轉化：

(1) 在2 mL離心管中加入5-10 μg 質粒，再加入100 μL制備好的原生質體，並輕柔地吸打混勻。

(2) 加入110 μL 40% PEG，並迅速輕柔混勻，勿使原生質體成團。

(3) 置於28 ℃水浴15 min，加入1.8 mL W5 Solution重懸，並終止反應。

(4) 將2 mL離心管套在10 mL離心管中，水平轉子450 g離心3 min。

(5) 用移液器小心吸除上清後，重懸原生質體於750 μL W5 Solution中。

(6) 轉移原生質體到12孔細胞培養板里，用封口膜包好後，於28℃避光培養12-16h。Tips：原生質體的轉化體系一定要按比例放大，否則PEG濃度的改變會導致轉化效率的降低。用於Co-localization和BiFC等共轉化實驗需要的質粒要更多更純。

四、亞細胞定位以及BiFC的載體信息

1. 用於亞細胞定位的載體有：

pCAMBIA2300-35S-EGFP(N)：EGFP融合於目的蛋白N端。可用來做瞬時表達和穩定表達。pCAMBIA2300-35S-EGFP(C)：EGFP 融合於目的蛋白C端。可用來做瞬時表達和穩定表達。(這兩個載體可用於穩定轉化水稻、擬南芥和煙草，注意農桿菌分別對應AGL1和GV3101。) pUC-35S-EGFP(Modified): eGFP融合於目的蛋白N端。僅可用來瞬時表達。

pSAT6-EYFP-C1(35S,CD3-1103)：eGYP融合於目的蛋白N端。僅可用來瞬時表達。

pSAT6-EYFP-N1(35S,CD3-1104)：eGYP融合於目的蛋白C端。僅可用來瞬時表達。

2. 用於BiFC的載體有（雙分子熒光互補的載體是成對的）：

pSPYNE173和pSPYCE（M）：分離的EYFP融合於目的蛋白的C端，用於瞬時表達。pSCYNE和pSCYCE：分離的CFP融合於目的蛋白的C端，用於瞬時表達。

pVYNE和pVYCE：分離的Venus融合於目的蛋白的C端，用於瞬時表達和穩定表達。pVYNE(R)和pVYCE(R)：分離的Venus融合於目的蛋白的N端，用於瞬時表達和穩定表達。Tips：在轉化原生質體時，應當盡量採用 ~4.5 kb的質粒。越小的質粒轉化效率越高，蛋白熒光越強。

五、共定位蛋白參照

我們實驗室現有的共定位蛋白參照如下：

Endoplasmic reticulum ER-RFP（RFP-HDEL） Unknown Golgi Golgi-RFP（SialT-RFP） Unknown

Tonoplast Alpha-TIP-RFP

Gamma-TIP-RFP

Delta-TIP-RFP At1g73190 At2g36830 At3g16240

Chloroplast RbcS-EGFP Os12g0291100 Nuclear OsbZIP52-mRFP Os06g0662200

此外，還有一些共定位蛋白參照可以參考：

Chloroplast OsRbcS Os12g0292400 Chloroplast OsRbcA Os11g0707000 Mitochondrion OsRpl6-2 Os08g0484301 Mitochondrion OsAtpC Os07g0513000 Nuclear OsSRT1 Os04g0271000 Golgi Golgi-mCherry（Man49-mCherry）Unknown

Golgi OsNST1 Os02g0614100 Endoplasmic reticulum DEP2 Os07g0616000

六、熒光蛋白的基本特性

目前，常用的一些熒光蛋白的基本性質總結如下：

Aequorea FP derivatives (水

母來源的熒光蛋白)

Cyan (CFP) 433/452 475/505 Monomer/weak

dimer

Cerulean 433 475 Monomer/weak

dimer Enhanced green (eGFP) 488 506 Monomer/weak

dimer Enhanced yellow (eYFP) 514 527 Monomer/weak dimer

Venus 515 528 Monomer/weak

dimer Citrine 516 529 Monomer/weak

dimer Anthozoa FP derivatives (珊

瑚來源的熒光蛋白)

mOrange 548 562 Monomer

Red (RFP) 555 584 M

『肆』 什麼是轉基因水稻

將一段仿伍凳目標基因用載體連接，通過農橘清桿菌或者花備旅粉管導入法（這兩種最常用）導入水稻中，使其獲得目標性狀。轉入的這段基因可以是水稻的，也可以是其他植物的，甚至可以是微生物的。比如，轉基因抗蟲棉就是將蘇雲金芽孢桿菌中一段編碼殺蟲晶體蛋白的基因導入棉花中，使棉花獲得了產生這種對棉鈴蟲有毒的蛋白的功能，於是就成為抗棉鈴蟲的優秀品種了。所有的轉基因作物大都是這樣了。

『伍』 基因工程中單子葉植物不是不能用農桿菌轉化法的嗎為什麼水稻都能用呢

由於單子塌塌卜葉植物不是農桿菌的天然宿主，曾經認為農桿菌介導法不適合禾穀類植物等單子葉植物的遺傳轉化
但是隨著農桿菌侵染機理研究的深入，採用相應的技術措施，農桿菌介導禾穀類等單子葉植物基因轉化已經獲得成功。其實早在1990年水稻的農桿菌介導法轉化就獲得過轉基因植株（見Raineri的論文）。1997年小麥的農桿菌介導法成功。除了禾穀類作物外，其他衫顫單子葉植物也獲得了成功。如吊蘭，水仙等
到目前為止，已有約7科20多種單子葉植物利用農桿菌介導法轉化成功
但是與雙子葉植物相比，農桿菌侵染單子葉植物能力較差，轉化率低，轉化的外源基因表達水平低。因此人們還在不斷改進Vir區的基因表達，感受態細胞選擇等方面改進農桿菌介導法。
我們實驗室一直在進行的百合轉基因至今沒有成功。所以說並不是說農桿菌介團穗導法無法轉化單子葉植物。

『陸』 根據基因工程的原理構建轉基因水稻

1.克隆植酸酶基因，構建到植物表達載體上，轉入農桿菌，侵染水稻愈傷組織；愈傷組織會長成第一鏈塌代陽性水稻苗，再收集第二代種子或者第三代種子，根據形狀分離比，得到最終的純合的陽性苗。
2.把大豆塌租鐵蛋白基因用Glu-B1啟動子來啟動表達。
3.方法1：直接把柚苷酶的基因轉入柑橘植株里，從而得到具有柚苷酶的柑橘；方法2：利用蛋白表達載體，在體外表達柚苷酶蛋白，通過分離純化得到高濃度的柚苷酶，在加工果汁的時候棚衫圓，按比例加入即可。

『柒』 轉基因怎麼轉

轉基因植物是基因組中含有外源基因的植物。通過原生質體融合、細胞重組、遺傳物質轉移、染色體工程技術獲得，改變植物的某些遺傳特性。
人工轉基因動物就是基因組中含有外源基因的動段孝消物。它是按照預先的設計，融合重組細胞、遺傳物質轉移、染色體工程和基因工程技術將外源基因導入精子、卵細胞或受精卵，再以生殖工程技術，有可能育成轉基因動物。

遺傳轉化的方法按其是否需要通過組織培養、再生植株通常可分成兩大類，第一類需要通過組織培養再生植株，常用的方法有農桿菌介導轉化法、基因槍法；另一類方法不需要通過組織培養，比較成熟的主要有花粉管通道法，花粉管通道法是中國科學家提出的。
農桿菌介導轉化
農桿菌是普遍存在於土壤中的一種革蘭氏陰性細菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數雙子葉植物的受傷部位，並誘導產生冠癭握知瘤或發狀根。根癌農桿菌和發根農桿菌中細胞中分別含有Ti質粒和Ri質粒，其上有一段T-DNA，農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可將T-DNA插入到植物基因組中。
因此，農桿菌是一種天然的植物遺傳轉化體系。人們將目的基因插入到經過改造的T-DNA區，藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合，然後通過細胞和組織培養技術，再生出轉基因植株。
農桿菌介導法起初只被用於雙子葉植物中，自從技術瓶頸被打破之後，農桿菌介導轉化在單子葉植物中也得到了廣泛應用，其中水稻已經被當作模式植物進行研究。
花粉管通道法
在授粉後向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導入受精卵細胞，並進一步地被整合到受體細胞的基因組中，隨著受精卵的發育而成為帶轉基因的新個體。該方法於80年代初期由中國學者周光宇提出，中國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優點是不依賴組織培養人慎搭工再生植株，技術簡單，不需要裝備精良的實驗室，常規育種工作者易於掌握。
核顯微注射法
核顯微注射法是動物轉基因技術中最常用的方法。它是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細胞的原核內，注射的外源基因與胚胎基因組融合，然後進行體外培養，最後移植到受體母畜子宮內發育，這樣分娩的動物體內的每一個細胞都含有新的DNA片段。-這種方法的缺點是效率低、位置效應(外源基因插入位點隨機性)造成的表達結果的不確定性、動物利用率低等，在反芻動物還存在著繁殖周期長，有較強的時間限制、需要大量的供體和受體動物等特點。
詳細步驟：在顯微鏡下，用一根極細的玻璃針（直徑1-2微米）直接將DNA注射到胚胎的細胞核內，再把注射過DNA的胚胎移植到動物體內，使之發育成正常的幼仔。用這種方法生產的動物約有十分之一是整合外源基因的轉基因動物。
基因槍法
利用火葯爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然後通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制。而且其載體質粒的構建也相對簡單，因此也是轉基因研究中應用較為廣泛的一種方法。
精子介導法
精子介導的基因轉移是把精子作適當處理後，使其具有攜帶外源基因的能力。然後，用攜帶有外源基因的精子給發情母畜授精。在母畜所生的後代中，就有一定比例的動物是整合外源基因的轉基因動物。
同顯微注射方法相比，精子介導的基因轉移有兩個優點：首先是它的成本很低，只有顯微注射法成本的1/10。其次，由於它不涉及對動物進行處理，因此，可以用生產牛群或羊群進行實驗，以保證每次實驗都能夠獲得成功。
核移植轉基因法
體細胞核移植是一種轉基因技術。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養基中培養，使外源基因整合到供體細胞上，然後將供體細胞細胞核移植到受體細胞——去核卵母細胞，構成重建胚，再把其移植到假孕母體，待其妊娠、分娩，便可得到轉基因的克隆動物。
體細胞核移植法
先在體外培養的體細胞中進行基因導入，篩選獲得帶轉基因的細胞。然後，將帶轉基因體細胞核移植到去掉細胞核的卵細胞中，生產重構胚胎。重構胚胎經移植到母體中，產生的仔畜百分之百是轉基因動物。

『捌』 轉基因抗病水稻能用大腸桿菌作運載體嗎

一般來說，植物的基因工程用農桿菌轉化法，經濟，方便。但農桿菌只侵染漏搭雙子葉植物，而水稻是單子葉植物。所以以應該用基因槍法或花粉管通道返殲拿法改稿。沒有用大腸桿菌的。這是我第一次答題。就給我分吧

『玖』 國際水稻研究所人員從產量低的耐淹水稻中找到一種耐淹的基因，將其移入到高產熱帶水稻中，終於培育出耐水

（頌並磨1）轉基因過程中構建基因表達載體時，首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和質粒，然後需要用DNA連接酶將目的基因和質粒連接形成重組質粒．
（2）質粒是基因工程中最常用的運載體，其本質是雙鏈環狀DNA分子，因此質粒的基本組成單位是脫氧核苷酸．
（3）將目的基因（耐淹基因）導入植物細胞最常用的方法是農桿菌轉化法．
（4）在基因工程中使用標記基因的目的是篩選出含有目的基因的受體細胞；鑒定培育出的高產耐水淹水稻植株，最直接的方法是從個體水平上檢測其是否抗水淹．
（5）在植物組織培養的再分化過程中，為防止感染，器皿、培養基與植物組織等必須進行滅菌、消毒處理．決定植物脫分化和再分化的關鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協同作用在組蔽橡織培養過程中非常重要．生長素濃度大於細胞分裂素濃度時，將誘導愈傷組織出根．
（6）蛋白質工程是在分子水平上通過改造基因來實現對蛋白質的改造的，因為改造基因易於操作且改造後能夠遺傳．
故答案：（1）限制性內切酶、DNA連接酶（2）運載體脫氧核苷酸
（3）農桿菌轉化法
（4）篩野斗選出含有目的基因（或重組DNA分子）的受體細胞檢測是否抗水淹
（5）滅菌、消毒大於（6）改造基因易於操作且改造後能夠遺傳

『拾』 轉基因水稻的發展歷程

水稻轉基因技術在20世紀80年代才有所突破，人們通過原生質體體系將外源基因導入到水稻中，並發展了直接轉化法、PEG介導法、電激法和脂質體介導法等水稻轉化方法。
20世紀90年代初，根癌農桿菌(Agrobacte— rium tumo咖ciens)轉化水稻技術的建立使水稻轉化成為一項常規的實用技術，目前絕大多數的水稻轉基因事件都是通過此法獲得的。
國際水稻所將抗蟲基因導入水稻，育成抗二化螟、縱卷葉螟的轉基因水稻。
1995年，中國農科院開始Bt抗蟲轉基因水稻拍羨的研發工作。1999年成果通過了農業部的成果鑒定，同年開始中間實驗。
2001年，美國批准一種葯用型轉基因水稻商業化種植。
2002年，中國農科院Bt抗蟲轉基因水稻完成環境釋放，2003年到2004年進行生產性試驗。
2004年，伊朗批准Bt抗蟲轉基因水稻的商業化種植。
2004年，綠色和平組織曾在湖北展開了對轉基因水稻種植的四次調查，並於2005年4月13日發布了《非法轉基因水稻污染中國大米》調查報告。該報告認為，轉基因種植在湖北等地的種植已經非常廣泛。該組織同時將調查報告送往農業部。
2005年4月14日，農業部農業轉基因生物安全管理辦公室公布了《關於「轉基因水稻污染我國大米」的書面答復材料》，對綠色和平的檢測結果「無法認同」，關於報告中所提轉基因水稻的種植面積、允許范圍、是否違規等問題，農業部將依據《農業轉基因生物安全管理條例》和湖北農業廳對此事的執法檢查結果進行判斷和處理。
2005年8月11日，湖北省政府委託省農業廳就「轉基因水稻事件」首次發表申明，武漢科尼植物基因有限公司、武漢禾盛種衣劑有限責任公司和華中農大新技術研發公司在承擔轉基因水稻生產性實驗過程中，「擅自擴大制種」，並責成有關單位對其進行處罰。
湖北省農業廳隨即對已種植的上萬畝轉基因水稻進行鏟除，並對農民進行每畝約四五百塊錢的補助。隨後，農業部下發通知，要求全國各地加強轉基因安全監管工作。
2006年美國批准一種抗除草劑轉基因水稻的商業化種植。
2007年5月16日，一種能夠表達人類乳汁中常見蛋白的轉基因水稻通過美國農業部的批准，開始大規模種植。
2009年12月初，中國生物安全網上公布的「2009年第二批農業轉基因生物安全證書批准清單」上，出現了一直備受爭議的轉基因水稻，兩個由華中農業大學研發的抗蟲轉基因水稻「華恢1號」和「Bt汕優63」首吵困次獲得農業部為轉基因水稻頒發的安全證書，並准予在湖北升賀念省進行種植。