病毒的分離培養常用的方法

A. 病毒的分離培養的原理

原理通過組織培養法分離培養HSV。
通過每天觀察病毒對敏感細胞的細胞病變作用，初步確定病毒的存慶汪在。CPE通常是HSV感染的特徵性改變，但其他皰疹病毒如水痘帶狀皰疹病毒（VZV）、巨細胞病毒（CMV）感染也可引起類似的CPE，因而需要通過免疫學方法。
病毒必須在易感的活細胞內才能增殖，因此，根據不同病毒選擇敏感動物，離體組織細胞和雞胚進行分離培養。實驗方法原理雞胚培養方法操作簡便，適用於余差滑流感豎臘病毒，痘病毒，皰疹病毒和腦炎病毒等的培養。最常用的雞胚接種方法有四種，即絨毛尿囊膜接種法，羊膜腔（羊水囊）接種法，尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。

B. 細菌和病毒的培養方法

1繁殖方式:前者復制,後者二分裂；生活方式:前者寄生,離開宿主細胞無法生活,且對宿主有害,後者可寄生,腐生或自生,寄生時可能對寄主有益也可能有害；結構:前者無細胞結構,後者有；遺傳物質:前者是DNA或RNA,後者只有DNA；變異速度:前者特別是RNA病毒變異速度極快,後者較為緩慢,突變率低.2培養基製作過程較繁瑣,自己找相關資料.3病毒利用特異性的宿主,培養基中營養條件取決於宿主,細菌利用特異性的培養基,營養條件取決於自身.4.同2.5.寄主是否有相應的抗原；環境條件是否適宜；是否有一定的群體使大量細胞死亡,從而使器官失去相應功能.6外毒素:由細菌所分泌、能在局部及全身產生毒性效應的蛋白質成分.
內毒素:只在細菌被破壞時才被釋放的細菌毒素.
類毒素:由於變性或化學修飾而失去毒性的毒素,但仍保留其抗原性.
7.特異性的培養基分別篩選,不同菌種有不同的鑒定方法

C. 目前最常用的培養病毒的方法是哪種

1.動物接種
這是最原始的病毒培養方法。常用的動物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等，接種的途徑有鼻內、皮下、皮內、腦內、腹腔內、靜脈等。根據病毒種類不同，選擇敏感動物及適宜接種部位。
2.雞胚接種雞胚對多種病毒敏感。根據病毒種類不同，可將標本接種於雞胚的羊膜腔、尿囊腔、卵黃囊或絨毛尿囊膜上。
3.組織培養
將離體活組織塊或分散的活細胞加以培養，統稱為組織培養。組織培養法有三種基本類型：器官培養、移植培養和細胞培養。細胞培養最常用於培養病毒，根據細胞的來源，染色體特性及傳代次數又可分為下列類型：原代和次代細胞培養，二倍體細胞株和傳代細胞系。

D. 病毒毒株是怎麼分離的

病毒毒株分離就是用含病毒的標本材料接種到漏毀適合的細胞裡面。在這過程中要保證絕對的無菌環境操作，排除各種雜菌和其它微生物的污染。所以，一個有資質的、絕對干凈，無污染的實驗室和保證安全潔凈的標准操作是整個流程的關鍵隱洞點。

成功分離出新型冠狀病毒毒株的浙江省疾控中心微生物檢驗所所長張嚴峻：我們從病人痰液標本裡面給它(新型冠狀病毒毒株)處理了以後，接種到相應的細胞里，(讓)這個病毒在細胞里能夠生長。到了1月24日，我們對培養物進行鑒定，病毒已經在細胞里增殖，說明這個病毒培養分離已經成功了。

不是隨便一個實驗室都具有分離培養新型冠狀病毒的資質，要有這個資質，至少要有生物安全三級實驗室，而且實驗室人員資質、工作流程、污染物的處理都要通過嚴格的審核，同時對於每一種高致病性病毒分離培養活動，都要專門向國家衛生健康委員會提出申請，經過審核後才能開展特定的分離和培養活動。

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分離病毒毒株的意義

這能知道病毒是通過什麼樣的途徑侵入到人體當中怎樣的細胞器官里去的、在人體裡面是怎麼樣繁殖的、哪些部位會產生一些毒粒、這些毒粒怎樣作用於人類讓人類生病、最後這個病毒怎樣排出來再去感染人。通俗說可以知道它是誰、它到底要到哪裡去、去的哪個地方它到底要做哪些事情、做完壞事情之後它又怎樣逃出來到另外一個地方去干同樣的壞事，整個過程都可以給它弄清楚。

了解了整個過程之後，醫葯專家就可以針對性地去研究相應的葯物和疫苗，對病毒的預防、治療有著重大意義。

E. 病原體的培養和分離

雖較直接檢查法為慢,且較為復雜,但更准確,應用范圍也更廣,幾乎可用於所有的病原體。一般除病毒、衣原體和立克次氏體外，都可用無生命的培養基培養和分離。培養基的種類很多，可根據不同的病原體加以選用。培養分離病原體後，還可進行各種試驗，如發酵試驗、毒力試驗等，這對病原體的進一步鑒定非常重要。病毒、衣原體和立克次氏體缺乏維持生命衡悶所必須的各種酶，不能像細菌那樣從培養基中攝取營養物質，利用自己的酶來合成自己所需的各種成分，不能用無生命的培養基培養,而必須接種到有生命的機體內,利用機體的酶來合成它們所需的各種成分。這種方法稱「病毒分離」、「衣原體分離」或「立克次氏體分離」。
分離的方法一般有三種：
①組織培養。最簡單常用；
②動物胚胎（如雞胚、鴨胚）接種；
③動物接種，神型如接種小白鼠、豚鼠等。不同的病毒、衣原體或立克次氏體常需要不同的分離方法，分離陽性後也常需進行各種試驗（如血清學試驗等）才能最後判定其種類。病原體的直接檢查常與病原體的培養分離同時進行。
除上述兩種方法外，還有一些特殊的檢查方法。例如對懷疑為的人或動物可取其腦組織檢查特異性包涵體（內格里氏小體）確診；檢查乙型肝炎表面抗原可用反向被動血凝法(RPHA)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及放射免疫試驗(RIA)等方法;檢查糞便中的甲型肝炎病毒可用免疫電鏡等。還可應用分子雜交或核酸分咐瞎彎析的方法來檢驗病人血液、組織或排泄物中的病原體核酸以協助診斷，如血液中及肝組織中的乙型肝炎病毒核酸，就可用分子雜交的方法檢測；糞便中的輪狀病毒可用核酸分析的方法來檢測等。由於病原體的各種抗原和病原體的核酸都是病原體的特異性成分，因此如果它們出現陽性也就表示病原體陽性，故這些方法也具有很大的確定診斷的意義。

F. 病毒的培養方法有哪些為什麼不能用一般培養基來培養病毒

適齡雞胎接種，傳代培養，組織細胞培養，易感動物接種。不可以。病毒是寄生在活體上的生物，而培養基是沒有生命的有機物或無機物，病毒在上面不能生存。
病毒的結構是有一個DNA，和蛋白質外殼，和其它功能性的附屬結構。
病毒不能自己生產蛋白質，它只有在寄生在活體上之後，把自己的DNA，注入到寄主細胞內，和寄主DNA結合，然後表達，利用寄主的蛋白質、DNA的和成功能，和成自己的蛋白質外殼，DNA，然後這些DNA和外殼在及主細胞破裂之後溢出，重新組合成好多病毒，感染其它細胞或寄主。 可以看出，這個細胞必須有生命（新陳代謝，能合成蛋白質DNA等），培養基是不行的。

G. 病毒學研究的基本方法有哪些

（一）生物學特性測定：在寄住上的反應——症狀、傳播等；
（二）病毒分離與培養：提純與純化，二元培養法；
（三）光鏡與電鏡觀察：病毒粒子和病毒與相應抗血清的特異性免疫吸附情況；
（四）免疫學技術：以血清學和組織免疫化學方法檢測材料帶毒情況，多克隆抗體，單克隆抗體；
（五）分子生物學技術：核酸分子雜交，PCR等。

H. 病毒鑒定常用方法有哪些

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
（一）臨床標本檢測。
1．病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。
（1）核酸檢測：採用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
（2）病毒分離：將標本接種於蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以後，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2．血清學檢測
（1）血清特異性IgM抗體：發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易於產生假陽性。
（2）中和抗體：採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。
1．標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲，按照採集地點，每10～20隻為一份進行研磨處理。
2．病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3．病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。

I. 流行病毒的分離培養與鑒定實驗的原理

RT-PCR。利用Vero細胞進行雹慶病原分離，經RT-PCR鑒定頌簡及測序分析。血液、體液、分泌物、糞便等宿主來源並包含野肆褲病毒的物質稱病料，病毒分離時，傳代細胞系、原代細胞是常用的分離方法。

J. 病毒的培養方法有哪些

病毒的培養方法：
（1）動物接種：病毒鎮仿經注射、口服等途徑進入易感動物的體內後可大量增殖，並使動物產生特定的反應。優點：操作方面易行。缺點：受機體免疫力的影兄盯響，常需要用無菌動物。運用：分離、增殖病毒，疫苗效力試驗，疫苗和抗血清的生產。
（2）雞胚培養：一般用9-12日齡的雞胚，分別接種於卵黃囊內，羊膜腔，尿囊腔等部位。病毒生長的標志為雞胚死亡、畸型和出血。用於病毒分離羨旅和與疫苗生產。
（3）組織培養：在離體活細胞上培養病毒的方法
1）組織塊培養：取組織片（如一段胎兒氣管或一小塊鼻黏膜）進行培養。
2）細胞培養：病毒感染細胞後，大多數引起細胞病變，稱為病毒的致細胞病變作用。表現為細胞變形，胞漿內出現顆粒化，核濃縮、核裂解等。