㈠ 生物製片的基本步驟
一 目的：
1.學習並掌握臨時裝片的製作方法。
2.完成基本實驗要求的基礎上，依自己的興趣，製作更多的臨時裝片
二 背景知識（點擊展開）
三 實驗內容
製作洋蔥表皮細胞臨時裝片
四 實驗用品
滴管、紗布、鑷子、吸水紙、載玻片、蓋玻片、清水、刀片、染液（碘液）
五 實驗材料
洋蔥表皮細胞、其他感興趣的生物材料
六 實驗步驟
1．擦拭載玻片、蓋玻片（動畫）
2．在載玻片的中央滴一滴清水（動畫）（圖zx-21）
3．在洋蔥內表皮用刀片劃出一個約1cm2的正方形（在使用刀片時注意安全），用鑷子撕取洋蔥內表皮（動畫）（圖zx-22）
4．將內表皮置於載玻片的清水中，並使之鋪開（動畫）（圖zx-23）
5．從一側開始慢慢蓋上蓋玻片，不能有氣泡產生（動畫） （圖zx-24）
6．在蓋玻片的一側滴一滴染液（動畫）
7．然後用吸水紙從另一側吸取多餘的染液，使洋蔥表皮細胞均勻染色（動畫）
8．顯微鏡下觀察。（圖zx-25）
染色後的洋蔥細胞(示細胞核)（圖）
顯微鏡使用的注意事項
1．搬動顯微鏡時，要一手握鏡臂，一手扶鏡座，兩上臂緊靠胸壁。切勿一手斜提，前後擺動，以防鏡頭或其他零件跌落。
2．觀察標本時，顯微鏡離實驗台邊緣應保持一定距離(5cm)，以免顯微鏡翻倒落地。鏡柱與鏡臂間的傾斜角度不得超過45度，用完立即還原。
3．使用時要嚴格按步驟操作，熟悉顯微鏡各部件性能，掌握粗、細調節鈕的轉動方向與鏡筒升降關系。轉動粗調節鈕向下時，眼睛必須注視物鏡頭。
4．觀察帶有液體的臨時標本時要加蓋片，不能使用傾斜關節，以免液體污染鏡頭和顯微鏡。
5．粗、細調節鈕要配合使用，細調節鈕不能單方向過度旋轉，調節焦距時，要從側面注視鏡筒下降，以免壓壞標本和鏡頭。
6．用單筒顯微鏡觀察標本，應雙眼同時睜開，左眼觀察物像，右眼用以繪圖，左手調節焦距，右手移動標本或繪圖。
7．禁止隨意擰開或調換目鏡、物鏡和聚光器等零件。
8．顯微鏡光學部件有污垢，可用擦鏡紙或綢布擦凈，切勿用手指、粗紙或手帕去擦，以防損壞鏡面。
9．凡有腐蝕性和揮發性的化學試劑和葯品，如碘、乙醇溶液、酸類、鹼類等都不可與顯微鏡接觸，如不慎污染時，應立即擦乾凈。不要任意取下目鏡，謹防灰塵落入鏡筒。
10．使用油鏡觀察樣品後，隨即用二甲苯將油鏡鏡頭和載波片擦凈，以防其他的物鏡玻璃上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用後馬上洗手。
11．實驗完畢，要將玻片取出，用擦鏡紙將鏡頭擦拭乾凈後移開，不能與通光孔相對。用綢布包好，放回鏡箱。切不可把顯微鏡放在直射光線下曝曬。
顯微攝影操作的重要注意事項
1.攝影者對顯微攝影裝置的調整：包括兩目鏡瞳孔間距的調整和個人屈光不正的校正。前者指將兩目鏡的距離按個人的瞳孔間距進行調整，拉動目鏡或捻轉瞳孔間距調節螺旋。校正屈光時應轉動目鏡筒上的屈光度調節環，使物鏡視野中心的「十」字由單線調成雙線，達到完全清晰，並且左右眼應分別調整。每個拍攝者都不宜省略這一步。
2.物鏡與攝相目鏡不同組合的選擇：攝影目鏡除放大功能外，並不具備空間分辨功能，只有物鏡才具有空間分辨力。在一般條件下，對組織切片厚度在20 μm以下者，應盡量選擇較高倍物鏡，例如欲放大實物50倍時，選擇「20×」物鏡配以「2.5×」目鏡的組合方式，其清晰度比「10×」物鏡及「5×」目鏡的組合方式要高些。但是也要考慮切片薄厚和觀察標本的特異性的問題，例如在厚度為30 μm以上的冰凍切片上，觀察蜿蜒走行的神經纖維或血管時，由於較低倍物鏡的焦點深度較長，有利於從不同深度、層次或角度，連續觀察分析不在同一平面上走行的神經或血管影像。在這種情況下，還可將物鏡與目鏡不同組合多次拍攝，最終擇其效果最佳者。
3.聚光器的調控使用問題：經驗較少的攝影者往往缺少對聚光器高度的調節，也不知光源是否偏離視野中心。不少人只進行了物鏡與組織切片間的所謂「上聚焦」，而沒有進行聚光器與組織切片間的「下聚焦」，這當然也無法獲得最佳清晰度的成像底片。 Kohler 照明法操做步驟如下：①將視場光闌縮至最小，使光闌葉片的通孔呈現其八角形影像；②兩手分別捻轉載片台下的左右定心螺絲，使光闌影像與視場中心圓圈重合，以校正光路；③調節聚光器高度，使八角形光闌影像由模糊變清晰，即「下聚焦」；④散大該光闌至135幀幅邊框（指常規135型負片畫幅，24 mm×36 mm）影像外周。再次微調聚光器高度，使光闌象最清晰為止。每變換一次放大倍率時，都要重復進行如上調整步驟。
4.提高攝影反差：組織結構對比反差的好壞，當然取決於組織制備技術的質量。這是提高顯微攝影質量的重要環節。但是一般情況下，為了彌補切片中對比反差的不足，常可採用如下的補救措施：①按照物鏡上的數值孔徑值即NA值，相應地進行聚光器孔徑光闌的匹配調節。一般質量優良的物鏡鏡頭上，除標有放大倍率外，同時還標有NA值，NA值越大者空間解析度相對越高。②如果按此法調節NA值轉盤後，若由於組織制備欠佳致使影像反差仍然不足時，則可將物鏡孔徑光闌的NA值再適當縮小，例如10x物鏡可調至0.19等。③如經過上述措施影像反差仍不好，則可將視場光闌從135（指常規135照片畫幅24 mm×36 mm）邊框外縮至邊框內，然後在暗室擴放時，再將視場光闌影像除去。當然，上述的後兩種措施，只不過是一種稍作修正的補救辦法而已。
5.低倍攝影難度大：低倍攝影有其特殊優點，例如在1（物）×2.5（目）放大倍率下，可拍攝大鼠腦切片一側全貌，對總覽特異性標記物的分布有一目瞭然之效果，但是低倍物鏡分辨力低，焦深較長，利用微調螺旋進行精確聚焦有一定難度。為避免視力的個體差異,應採取欠焦、過焦、正焦3步,聚焦不宜反復進行。
6.油浸鏡頭的使用：100×的物鏡多為油浸鏡頭，然而，使用後常因鏡頭擦不凈而使鏡頭受損。替代的辦法是滴加超純水或雙蒸水，觀察效果與香柏油差別不大。由於100×物鏡鏡頭與切片距離極近，極易碰損鏡頭，必須先以40×物鏡聚焦，再轉至100×物鏡，輕輕轉動聚焦微調螺旋至焦點。為避免鏡頭損傷，新型100×物鏡常有彈簧裝置，可使鏡頭微動伸縮而避免其損傷。
7.其它注意事項: ①按照常規,彩色膠卷應加LBD（色溫變換）濾片,黑白膠卷應加IF550（綠色）濾片。LBD濾片可使日光型彩卷獲得最佳色溫補償，IF550 濾片則可使黑白卷分光感度與人眼者接近。盡管有人認為不一定需要濾光處理，但因為攝影取決於膠片的化學感光度，並不取決於人們眼睛對視野的直觀感受，還是加濾光片為好。②曝光時間的選定，也是一個必需注意的問題。已知在光強與曝光時間兩個參數之間，有許多不同的組合，均在曝光的「安全」范圍內，但所謂的「安全」范圍，並不等於最佳條件，所以作者認為限定曝光時間還是十分必要的，其道理在於膠卷化學感光度有一定限制，一個膠卷36個幀幅若隨意變動曝光時間，在36張之間差異將很大，而沖洗膠卷是在同一條件下，難免有些幀幅顯影不佳。依據作者的經驗，曝光時間一般限定在0.5～1 s，底片的影像效果較佳。③要將重點拍攝的結構置於視場中心，因為自動曝光裝置測得的曝光時間，是以視場中心區為標准，而偏離中心區越遠越不準。有時為了兼顧結構局解關系，而重點結構又不在視場中心時，則可採取點（spot）曝光法。④若需將一張切片上的結構拍為幾張,之後拼接時,可在New Vanox 顯微攝影儀器上設有一個鎖定鍵（lock），有利於解決這一問題，以使同一結構的幾個幀幅曝光時間一致，然後在洗照片時將這組照片同時放入顯影液與定影液。
㈡ 脫落細胞塗片具有哪些要求，製片方法有哪幾種，分別適用於哪些標本
一、塗片前准備工作及塗片方法
1、塗片前准備工作
（1）保證標本新鮮，取材後盡快製片。
（2）塗片操作要輕巧，避免擠壓以防止損傷細胞。塗片要均勻，厚薄要適度，太厚細胞堆疊，太薄細胞過少，均影響診斷。
（3）玻片要清潔無油漬，先用硫酸洗滌液浸泡沖洗，再用75%乙酸浸泡。
（4）含蛋白質的標本可直接塗片，缺乏蛋白質的標本，塗片前先在玻片上塗薄層粘附劑，以防止染色時細胞脫落，常用粘附劑為蛋白甘油，由等量生雞蛋蛋白和甘油混合而成。
（5）每位患者的標本至少塗兩張玻片，以避免漏診。塗片後立即在玻片一端標上編號。
2、塗片制備方法
（1）推片法：用於稀薄的標本，如：血液、胸、腹水等。取離心後標本一小滴滴在玻片偏右側端，推片用30度夾角將玻片上檢液輕輕向左推。
（2）塗抹法：適用於稍稠的檢液，如：鼻咽部標本。用竹棉簽在玻片上塗布，由玻片中心經順時針方向外轉圈勻抹；或從玻片一端開始平行塗抹，塗抹要均勻，不宜重復。
（3）壓拉塗片法：將標本夾於橫豎交叉的兩張玻片之間，然後移動兩張玻片，使之重疊，再邊壓邊拉，獲得兩張塗片。該法適用於較粘稠標本，如：痰液。
（4）吸管推片法：用滴管將標本滴在玻片一端，然後將滴管前端平行置於標本滴上，平行向另一端均速移動滴管即可推出均勻薄膜。此法亦適用於胸、腹水標本。
（5）噴射法：用配細針頭的注射器將標本從左至右反復均勻地噴射在玻片上，此法適用於各種吸取的液體標本。
（6）印片法：將切取的病變組織用手術刀切開，立即將切面平放在玻片上，輕輕按印。此方法為活體組織檢查的輔助方法。
二、塗片的固定
固定（fication）的目的是保持細胞自然形態，防止細胞自溶和細菌所致的腐敗；固定液能沉澱和凝固細胞內蛋白質和破壞細胞內溶酶體酶，使細胞不但保持自然形態，而且結構清晰，易於著色。因此標本愈新鮮，固定愈及時，細胞結構愈清晰，染色效果愈好。
1、固定液：細胞學檢查常用的固定液有下列三種：第一種乙醚酒清固定液：該固定液滲透明性較強，固定效果好，適用於一般細胞學常規染色；第二種是氯仿酒精固定液：又稱卡諾氏固定液。其優點同上；第三種是95%酒精固定液，適用於大規模防癌普查。制備簡單，但滲透作用稍差。
2、固定方法
（1）帶濕固定：塗片後未待標本乾燥即行固定的方法稱帶濕固定。此法固定細胞結構清楚，染色新鮮。適用於巴氏或HE染色。痰液、陰道分泌物及食管拉網塗片等常用此方法。
（2）乾燥固定：塗片後待其自然乾燥，再行固定。適用於稀薄標本如尿液、胃沖洗液等，也適用於瑞特染色和姬姆薩染色。
3、固定時間：一般為15-30min。含粘液較多標本，如痰液、陰道分泌物、食管拉網等固定時間應適當延長；尿液、胸、腹水等塗片不含粘液，固定時間可酌情縮短。
三、塗片的染色
1、染色的目的和原理：染色的目的是藉助於一種或多種染料，使組織和細胞內結構分別著不同的染色，這樣在顯微鏡下能清楚地觀察細胞內部結構，作出正確判斷。
組織細胞染色原理至今尚無滿意的解釋，可能是物理作用，也可能是化學作用，或者是兩者綜合作用的結果。
染色的物理作用是利用毛細管現象，滲透、吸收和吸附作用，使染料的色素顆粒牢固地進入組織細胞，並使其顯色；染色的化學作用是滲入組織細胞的染料與其相應的物質起化學反應，產生有色的化合物。
各染料都具有兩種性質，即：產生顏色；徵收被組織形成親和力。這兩種性質主要由發色基因和助色基因所產生。發色基團：苯的衍生物具有可見光區吸收帶。這些衍生物顯不出吸收帶與其價鍵的不穩定性有關，如對苯二酚為無色，當其氧化後失去兩個氫原子，它的分子或則變為有黃色的對醌，這種產生顏色的醌式環稱為發色基團。若一種化合物含有幾個環，只要其中有一個醌式環就會發出顏色，稱此發色基團為色原（chromogen）。助色基團：是一種能使化合物以生電離作用的輔助原子團（酸鹼性基團）。它能使染色的色澤進一步加深，並使其與被染色組織具有親和力。
助色基團的性質決定染料是酸性鹼性。鹼性染料具有鹼性助色基團，在溶媒中產生的帶色部分為帶正電荷的陽離子，吻與組織細胞內帶負電荷的物質結合而顯色。如細胞核內的主要化學成分脫氧化核糖核酸易被蘇木素染成紫藍色，稱嗜鹼性。酸性染料具有酸性用力色基團，在溶酶中產生帶色部分為陰離子，易與組織細胞內帶正電荷部分結合而顯色，此性質被稱為嗜酸性，如細胞漿內訂成分為蛋白質，易與伊紅或橘黃結合呈紅色或橘黃色。
2、常用染色方法：臨床日常工作中較為常用的染色方法有下列3種：
（1）巴氏染色法：本法染色特點是細胞具有多色性顏色，色彩鮮艷多彩。塗片染色的透明性好，胞質顆粒分明，胞核結構清晰，如鱗狀上皮過度角化，細胞質呈橘黃色；角化細胞顯粉紅色；而角化前細胞顯淺綠色或淺藍色，適用於上皮細胞染色或觀察陰道塗片中激素水平對上皮細胞的影響。此方法的缺點是染色程序比較復雜。
（2）蘇木精—伊紅（he
㈢ 組織學教學標本常用的製片技術是
課堂學習過程中基本組織形式，就是指教師採用一定的方式，運用一定的協調機制等來組織而形成的課堂學習活動的過程模式。例如有：
（一）環套式的組織形式
指通過教師編制一整套的、系統的、層層遞進式的問題（問題情境），以此來引導學生不斷地去探索、發現，直至問題的解決。
例如，在課堂學習兩位數乘法（例題：17×32）是，教師就可以通過下列一組問題來引導學生思考：①17×32表示什麼？能否用算式表示？②第一步先算什麼？為什麼先算17×30？③再算什麼？兩個結果怎樣相加？④怎樣用豎式相加？為什麼這樣對？找到什麼規律？
（二）迴旋式的組織形式
指通過教師編制的一個引導學生對問題情境的探索、思考與發現的系統，來組織學生的學習。並且這個系統不是直線式的，而是一個循環式的迴路系統。在這個系統中，「情景①」和「情景②」之間構成一個不斷比較、探索、思考和修正的迴路，而「情景②」與「情景③」又構成了一個不斷比較、探索、思考和修正的迴路。如此往復不斷地通過嘗試、比較、修正，來逼近問題目標。
㈣ 生物製片方法有哪些主要包括哪些步驟
生物製片的方法主要包括動物或者是植物細胞的製片，有永久裝片也有一些切片圖片還有其他的一些裝片。不同的裝片方法是不一樣的。
㈤ 【高中生物】求列舉高中生物常見的臨時裝片的製片方法，和它與永久裝片的主要區別，謝謝^ω^
一個蓋片一個不蓋片 印象中這樣
㈥ 比較各種製片方法的特點,分析各種製片方法分別適用哪類放線菌
摘要
㈦ 植物組織器官中主要製片方法有哪些
保護組織位於植物的植物體幼嫩的根、莖、葉、花、果實的表面、直接接觸外界環境的細胞層
而輸導組織則是貫穿於植物體的根
莖
葉等器官為他們提供營養
掐去一根枝條的頂端就不會向上長了
因為植物生長靠的是細胞分裂，頂端的分生組織被破壞，就不
㈧ 液基TCT有哪些製片方法怎樣選擇液基試劑與製片設備
液基TCT製片方法大致可以分為：1、離心式製片；2、膜式製片；3、沉降式製片；4、離心沉降式製片；5、手工製片。這些製片方法與使用的耗材有不同，康乃欣生物有適合不同製片方式的液基TCT試劑與配套液基製片機。
㈨ 幾種生物製片方法各適宜觀察什麼生物樣品
裝片：可觀察從生物體上取下來的細胞（如口腔上皮細胞、洋蔥鱗片葉內表皮細胞）或個體微小的生物如衣藻、水綿、水螅、青黴結構
切片：用於觀察用特製刀具把生物體的組織或礦物切成的薄片,如葉片切片（觀察葉片結構氣孔等結構）
切片：用於觀察懸液狀態的生物材料,如人的血液血細胞的觀察
㈩ 冰凍切片，he是最常見的製片和染色方法嗎
冰凍切片，HE的確是最常見的製片和染色方法
冰凍切片HE蘇木素伊紅染色步驟
切片固定30秒到1分鍾。
水洗。
染蘇木素3到5分鍾。成熟蘇木素製作，加入碘酸鈉0.2g碘酸鈉每1L蘇木素。
分化。
於鹼水中返藍20秒。
伊紅染色10到20秒。
脫水，透明，中性樹膠封固。