測定小麥蛋白質含量常用方法

㈠ 常用的蛋白質含量測定方法有哪些

①凱氏定氮法
原理：蛋白質平均含氮量為16%。當樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉化為銨鹽，在強鹼性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最後用標准酸滴定硼酸，通過標准酸的用量即可求出蛋白質中的含氮量和蛋白質含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在鹼性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩定的紫紅色絡合物。蛋白質中的肽鍵實際上就是醯胺鍵，故多肽、蛋白質等都有雙縮脲（biuret）反應，產生藍色或紫色復合物。比色定蛋白質含量。
缺點：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數mg)，且會受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 准確度 較高，不受蛋白質的種類影響。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當於雙縮脲試劑（鹼性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在鹼性條件下，蛋白質中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應生成藍色物質，600nm比色測定蛋白質含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會有大誤差。
④紫外法
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進行測定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計算：
蛋白質濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標）
⑤色素結合法（Bradford 法）
直接測定法：利用蛋白質與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結合物的光吸收用分光光度法進行測定。
考馬斯亮蘭（CBG）染色法測定蛋白質含量。CBG 有點像指示劑，會在不同的酸鹼度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍色。當 CBG接到蛋白質上去的時候，因為蛋白質會提供 CBG一個較為中性的環境，因此會變成藍色。當樣本中的蛋白質越多，吸到蛋白質上的CBG也多，藍色也會增強。因此，藍色的呈色強度，是與樣本中的蛋白質量成正比。
間接測定法：蛋白質與某些酸性或鹼性色素分子結合形成不溶性的鹽沉澱。用分光光度計測定未結合的色素，以每克樣品結合色素的量來表示蛋白質含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procere，4,4』-二羧-2,2』-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在鹼性溶液中，蛋白質使Cu2+轉變Cu+後，進一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結合產生深紫色，在波長562 nm有強的吸收。
它的優點在於鹼性溶液中BCA 比Folin試劑穩定，因此BCA與鹼性銅離子溶液結合的呈色反應只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對於陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，並能與多種生物大分子結合。
膠體金是一種帶負電荷的疏水膠體遇蛋白質轉變為藍色，顏色的改變與蛋白質有定量關系，可用於蛋白質的定量測定。
⑧其他方法
有些蛋白質含有特殊的 非蛋白質基團，如 過氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團，可測 403 nm 波長的吸光來定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。

㈡ 蛋白質含量的測定方法有哪些

蛋白質含量測定的方法有微量凱氏定氮法、雙縮脲法、folin―酚試劑法、考馬斯亮蘭法、紫外吸收法等。

1、微量凱氏定氮法：含氮有機物即分解產生氨（消化），氨又與硫酸作用，變成硫酸銨。經強鹼鹼化使之分解放出氨，借蒸汽將氨蒸至酸液中，根據此酸液被中和的程度可計算得樣品之氮含量。

2、雙縮脲法：雙縮脲是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。在強鹼性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物，稱為雙縮脲反應。

3、folin―酚試劑法：這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。過去此法是應用最廣泛的一種方法，由於其試劑乙的配製較為困難，近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。

4、考馬斯亮蘭法：1976年由bradford建立的考馬斯亮蘭法，是根據蛋白質與染料相結合的原理設計的。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質測定法。

5、紫外吸收法：蛋白質分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，使蛋白質具有吸收紫外光的性質。吸收高峰在280nm處，其吸光度（即光密度值）與蛋白質含量成正比。

㈢ 雙縮脲法測定蛋白質的含量實驗分析與討論怎麼寫

雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有哪些：

• 雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。
  

• 雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5~160mg/ml。
  

㈣ 如何測定麵粉中麵筋，蛋白質，和水分的含量

利用凱氏定氮法測定麵粉中蛋白質的含量。
麵粉中麵筋的檢測，參考糧食、油料檢驗麵筋測定法（GB5506－85） 本標准適用於商品小麥及小麥粉中麵筋含量的測定。
麵粉水分含量檢測用SFY-6LS快速水分測定儀的烘箱法原理檢測

㈤ 如何利用生物科技提取小麥蛋白質

谷朊粉。目前國內還把谷朊粉作為一種高效的綠色麵粉增筋劑、方便麵的生產中、麵包專用粉的生產，是從小麥(麵粉)中提取出來的天然蛋白質.谷朊粉還是增加食品中植物蛋白質含量的有效方法，含有人體必須的十五種氨基酸，具有粘性、面條小麥蛋白粉簡介小麥蛋白粉又稱活性麵筋粉，是營養豐富的植物蛋白資源，添加量不受限制。全過程不加任何添加劑，同時也是高檔水產飼料的基礎原料、彈性、延伸性，也可用與肉類製品中作為保水劑，廣泛用於麵包。小麥蛋白粉用途谷朊粉是一種優良的面團改良劑、薄膜成型性和吸脂性，將其用於高筋粉，由多種氨基酸組成。麵粉加水和成面團醒發面團洗滌 攪拌洗出澱粉類成為濕麵筋團乾燥碾磨成粉末狀包裝，蛋白質含量高達 75%～85%，原料為麵粉100%

㈥ 檢測食品中蛋白質最常用的方法

一般是根據產品標准要求選測定方法的，食品中蛋白質測定的最常用方法當然是凱氮測定法：常量凱氏定氮法和微量凱氏定氮法。
我大學時還做過考馬斯亮藍
半微量定氮法，與最新標准一致，我這有稍微簡化的方法：
以餅干為例：稱取2.000克於定氮瓶中，加20mL濃硫酸，加0.2g硫酸銅，加3.0g硫酸鉀，然後進行消化，消化至澄清液體後倒入100mL具塞比色管，3次清洗定氮瓶，洗液並入100mL具塞比色管，蒸餾水加至100mL刻度線，搖勻，取10mL進半微量定氮裝置蒸餾，收集瓶中為2%硼酸溶液10mL，以甲基紅-亞甲藍為指示劑2滴，用購置的0.1000標准溶液進行滴定，步驟結束。
要點：稱量需准確；吸取也准確；玻璃儀器需檢定合格。