1. 獨立實驗室里,診斷試劑的存放方式與使用方法
獨立實驗室但不得少於60平方米(住宅用房不得用做倉庫),庫區環境整潔,無污染源,庫房內牆,頂和地面應光潔,平整,門窗結構嚴密,診斷試劑儲存作業區應與經營,辦公等其他區域有效隔離
免疫診斷試劑使用注意事項
一.試劑准備
1)試驗前將所需試劑盒組分在室溫或37℃平衡30 分鍾;
2)試劑盒及其組分的保存按試劑盒操作說明書進行;
3)保存試劑盒的冰箱應經常檢查儲存溫度並作好記錄;
4)保存試劑盒的冰箱應避免頻繁開關。
二.標本准備
1)抽血時,應盡量避免溶血;
2)非抗凝血自然凝固1-2 小時後,3000rpm 離心15 分鍾以制備血清標本;
3)用含有抗凝劉的采血管采血後,應立即顛倒混合5-10次並放置一段時間後,3000rpm離心15
分鍾以制備血漿標本;
4)標本若在五天內檢測,應在2-8℃冰箱中保存,標本若需長期貯存,應於-20℃中密封保存,
長期貯存的標本應為血清或血漿;
5)用於ELISA 一步法檢測的標本,不能使用NAN3防腐;
6)標本如需稀釋,請用人血清或小牛血清稀釋(說明書有指明的除外)。
三.加樣
1)加樣應嚴格按照試劑盒說明書中所規定的量和順序進行;
2)加樣時應將標本加在微孔反應板底部;
3)如不慎將樣本或試劑濺出孔外時,應用吸水紙輕拭吸干,並做好記錄;
4)手工操作時,微孔反應板加樣後應及時溫育;
5)標本加樣過多時應分批操作,以免加樣後溫育前等待時間過長。
四.溫育
1)測量溫度應使用校準過的水銀溫度計;
2)溫育容器的溫度應衡定為37℃;
3)如果使用恆溫箱溫育時,除保證恆溫箱內溫度為37℃外,還應注意盡量少開啟恆溫箱門;溫育時
微孔板不要疊加;
4)微孔板不要置室溫溫育;
5)嚴格按試劑盒操作說明書控制溫育時間,不能人為延長或縮短溫育時間;
6)微孔反應板溫育時要加貼封片,這樣可以防止孔內液體成分蒸發或水珠等雜質滴入孔內影響檢
測結果;封片不能重復使用。
五.洗板
1)配置洗滌液需要新鮮、干凈,為無細菌污染的蒸餾水或去離子水,洗滌液應現用現配;
2)盛放洗滌液的塑料容器應經常使用清洗劑徹底清洗,清洗干凈後的容器方可使用;
3)洗板時應保證洗滌液注滿微孔反應板的每個孔,洗完板後將微孔反應板在吸水板上輕輕拍干;
4)為保證洗板前洗板針的暢通,應經常用細針清除掉洗板針內積存的纖維蛋白等雜質;
5)使用洗板機洗板時,合理安排洗板時間和洗板間隔,避免因反應板過多造成洗板等待時間長;
6)微孔反應板洗板次數要保持一致,不能過多或過少;
7)如果微孔反應板需要拼接於板架上,必須確保板條放平,以免影響洗板機操作而造成洗板不徹
底。
六、顯色
1)OPD 顯色劑要在使用前配置,不能使用過期顯色劑;請勿使用肉眼可見淺藍色TMB 顯色劑;
2)添加顯色劑時,注意不能濺出孔外;
3)顯色劑應避免接觸金屬器械。
七.終止
加終止液應避免產生氣泡,以免比色時結果不準確。
八.結果判讀
1)酶標儀讀數時應保證微孔反應板底部清潔;
2)按說明書的規定進行讀數和結果判讀。
九.全過程
ELISA 試驗的整個操作過程中保證微孔反應板不接觸次氯酸
2. 怎麼樣正確的進行ELISA試劑盒的檢測
最全的ELISA試劑盒說明書在這里(通用版)
規格:96T 48T
用途:科研實驗(僅供實驗室研究使用)
保存:2-8℃。
有效期:6個月
結合物的制備
1. 戊二醛交聯法
戊二醛是一種雙功能團試劑,它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯結。鹼性磷酸一般用此法進行標記。交聯方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊二醛直接加入酶與抗體的混合物中,反應後即得酶標記抗體。
ELISA中常用的酶一般都用此法交聯。它具有操作簡便、有效和重復性好等優點。缺點是交聯反應是隨機的,酶與抗體交聯時分子間的比例不嚴格,結合物的大小也不均一,酶與酶,抗體與抗體之間也有可能交聯,影響效果。在兩步法中,先將酶與戊二醛作用,透析除去多餘的戊二醛後,再與抗體作用而形成酶標抗體。也可先將抗體與戊二醛作用,再與酶聯結。兩步法的產物中絕大部分的酶與蛋白質是以1:1的比例結合的,較一步法的酶結合物更有助於本底的改善以提高敏感度,但其偶聯的有效率較一步法低。
2. 過碘酸鹽氧化法:本法只適用於含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的標記常用此法。反應時,過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑,可與蛋白質上的氨基形成Schiff氏鹼而結合。酶標記物按克分子比例聯結,其最佳比例為:酶/抗體=1-2/1。此法簡便有效,一般認為是HRP最可取的標記方法,但也有人認為所有試劑較為強烈,各批實驗結果不易重演。
按以上方法制備的酶結合物一般都混有未結合物的酶和抗體。理論上,結合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中最後的酶活性測定,因經過徹底洗滌,游離酶可被除去,並不影響最終的顯色。但游離的抗體則不同,它會與酶標抗體競爭相應的固相抗原,從而減少了結合到固相上的酶標抗體的量。因此制備的酶結合物應予純化,去除游離的酶和抗體後用於檢測,效果更好。純化的方法很多,分離大分子化合物的方法均可應用。硫酸銨鹽析法最為簡便,但效果並不理想,因為此法只能去除留在上清中的游離酶,但相當數量的游離抗體仍與酶結合物一起沉澱而不能分開。用離子交換層析或分子篩分離更為可取,高效液相層析法可將制備的結合物清晰地分成三個部分:游離酶、游離抗體和純結合物而取得最佳的分離效果,但費用較貴。
結合物製得後,在用作ELISA試劑前尚需確定其適當的工作濃度。使用過濃的結合物,既不經濟,又可使本底增高;結合物的濃度過低,則又影響檢測的敏感性。所以必須對結合物的濃度予以選擇。最適的工作濃度就是指結合物稀釋至這一濃度時,能維護一個低的本底,並獲得測定的最佳靈敏度,達到最合適的測定條件和測定費用的節省。就酶標抗體本身而言,它的有效工作濃度是指與其相應抗原包被的載體作試驗時,能得到陽性反應的最高稀釋度。例如某一HRP:抗人IgG制劑標明的工作濃度為1:5000,表示該制劑經1:5000稀釋後,在與人IgG包被的固相作ELISA試驗時,將發生陽性反應。但在用於具體的ELISA檢測中,酶標抗體的最適工作濃度受到固相載體的性質、包被抗原或抗體的純度以及整個檢測系統如標本、反應溫度和時間等的影響,因此必須在實際測定條件下進行"滴配"選擇能達到高敏感度的最大稀釋度作為試劑盒中的工作濃度。
結合物的保存
酶標抗體中的酶和抗體均為生物活性物質,保存不當,極易失活。高濃度的結合物較為穩定,冰凍乾燥後可在普通冰箱中保存一年左右,但凍干過程中引起活力的減低,而且使用時需經復溶,頗為不便。結合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時間保存。早期的ELISA試劑盒中的結合物一般均按以上兩種形式供應,配以稀釋液(見3.2.5)臨用時按標明的稀釋度稀釋成工作液。現在較先進的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液,使用時不需再行稀釋,在4-8℃保存期可達6個月。由於蛋白質濃度較低,結合物易失活,需加入蛋白保護劑。另外再加入抗生素(例如慶大黴素)和防腐劑(HRP結合物加硫柳泵,AP結合物可加疊氮鈉),以防止細菌生長。
結合物的稀釋液
用於稀釋高濃度的結合物以配成工作液。為避免結合物在反應中直接吸附在固相載體上,在稀釋緩沖液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如1%牛血清白蛋白),通過競爭以抑制結合物的吸附。一般還加入具有抑制蛋白質吸附於塑料表面的非離子型表面活性劑,如吐溫20,0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時,血清標本需稀釋後進行測定,也可應用這種稀釋液。
試劑盒組成
標本要求
1. 標本採集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反復凍融
2. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標准品的稀釋:本試劑盒提供原倍標准品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣
分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標准孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標准品准確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震盪混勻,37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。
操作程序總結:
計算
以標准物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標准曲線,根據樣品的OD值由標准曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標准物的濃度與OD值計算出標准曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其准確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鍾內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標准曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標准品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為准.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
洗滌液
在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水。
酶反應終止液
常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的最終體積而異,在板式ELISA中一般採用2mol/L。
陽性對照品和陰性對照品
陽性對照品和陰性對照品是檢驗試驗有效性的控製品,同時也作為判斷結果的對照,因此對照品,特別是陽性對照品的基本組成應盡量與檢測標本的組成相一致。以人血清為標本的測定,對照品最好也為人血清,因為正常人血清在各種ELISA模式中可產生不同程度的本底。由於大量正常人血甭較難得到,國外試劑盒中的對照品多以復鈣人血漿為原料,即在血漿中加入鈣離子,使其中的纖維蛋白質凝固,除去凝塊後所得的液體,其組成與血清相似。陰性對照品須先行檢測,確定其中不含待測物質。例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg,最好抗HBs也是陰性。陽性對照品多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質,其中加入一定量的待檢物質,此量最好在試劑說明書中標明。加入的量應與試劑的敏感度相稱,在測定中得到的吸光值與受檢標本吸光值比較,可對標本中受檢物質的量有一個粗略的估計。國外檢測HBsAg的ELISA試劑盒檢測敏感度約為0.5ng/ml,陽性對照品中含量約為10ng/ml。在對照品中一般加入抗生素和防腐劑,以利保存。
包被用抗體
包被固相載體的抗體應具有高親和力和高特異性,可取材於抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養液。如免疫用抗原中含有雜質(即便是極微量的),在抗血清中將出現雜抗體,必須除去(可用吸收法)後才能用於ELISA,以保證試驗的特異性。抗血清不能直接用於包被,應先提取IgG,通常採用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用於包被,高度純化的IgG性質不穩定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性,則可採用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強,因此不需要作吸收和親和層析處理,一般可將腹水作適當稀釋後直接包被,必要時也可用純化的IgG。應用單抗包被時應注意,一種單抗僅針對一種抗原決定簇,在某些情況下,用多種單抗混合包被,可取得更好的效果。
包被的條件
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體和蛋白質抗原一般採用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液後,在4-8℃冰箱中放置過夜,37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。包被的最適當濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
包被的方式
將抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用於。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面。 IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯結多發生在Fc段上,抗體結合點暴露於外,因此抗體的包被一般均採用直接吸附法。蛋白質抗原大多也可採用與抗體相似的方法包被。當抗原決定簇存在於或鄰近於疏水區域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以採用間接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預包被,其後通過抗原抗體反應使抗原固相化。此間接結合在固相上的抗原遠離載體表面,其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質較多的抗原也可採用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。間接包被的另一優點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至於/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質抗原可採用特殊的包被方式。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結合。可將聚苯乙烯板先經紫外線照射,以增加其吸附性能。固相載體先用鹼性蛋白質,如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預包被,也可提高核酸的結合力。也可用親和素生物素系統作間接包被,即用親和素先包被載體,然後加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴大應用於各種抗原物質的定量測定。
脂類物質無法與固相載體結合,可將其在有機溶劑中溶解後加入ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹乾,待酒精揮發後,讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般採用這種包被方式。
洗板方法:
1. 手工洗板方法:吸去或甩掉酶標板內的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鍾,根據需要,重復此過程數次。
2. 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等
3. 酶聯免疫吸附測定實驗(ELISA)的操作流程,謝謝大家
Elisa 操作流程(以人IL-4 ELISA KIT為例):
檢測原理:
本實驗採用雙抗體夾心ELISA法。抗人IL-4單抗包被於酶標板上,標本和標准品中的IL-4會 與單抗結合,游離的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗體和辣根過氧化物酶標記的親 和素。生物素與親和素特異性結合;抗人IL-4抗體與結合在單抗上的人IL-4結合而形成免疫 復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應孔中有IL-4,辣根過氧化物酶會使無色 的顯色劑現藍色,加終止液變黃。在450nm處測OD值,IL-4濃度與OD450值之間呈正比,可 通過繪制標准曲線求出標本中IL-4的濃度。
試劑盒組成:
1.抗體預包被酶標板(8×12 或 8×6)
2.凍干標准品(2 / 1 支;0.5ng/支)
3.標准品和標本稀釋液(橙蓋瓶)(1 瓶;20ml/12ml)
4.濃縮生物素化抗體(紫蓋瓶)(1 支)
5.生物素化抗體稀釋液(藍蓋瓶)(1 瓶;16ml/10ml)
6.濃縮酶結合物(棕蓋瓶)(1 支)
7.酶結合物稀釋液(紫蓋瓶)(1 瓶;16ml/10ml)
8.濃縮洗滌液 20× (白蓋瓶)(1 瓶;50ml/25ml)
9.顯色底物(TMB)(棕蓋瓶)(1 瓶;12ml/6ml)
10.反應終止液(紅蓋瓶)(1 瓶;12ml/6ml)
11.封板膠紙(6/3 張)
12.產品說明書(1 份)
標本收集:
1. 收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
2. 血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血,高血脂標本。
3. 標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
4. 標本收集後若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存於-20℃,-70℃電冰箱內,避免反復凍融,3-6月內檢測。
5. 如果您的樣本中檢測物濃度高於標准品最高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建 議做預實驗,以確定稀釋倍數)。
注意事項:
1. 試劑盒使用前請保存在2-8℃。復溶後的標准品應分裝後,將其放在-20~-70℃貯存。
2. 濃縮生物素化抗體,濃縮酶結合物體積小,運輸中顛簸和可能的倒置,會使液體沾到管壁 或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000轉/分離心1分鍾,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前,請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬於正常現象,微加熱至40℃使結晶完全溶解後 再配製洗滌液。(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應為室溫。
4. 若需要分次使用標准品應按照每一次用量分裝,將其放在-20~-70℃貯存。避免反復凍 融。
5. 不同批號的試劑盒組份不能混用(洗滌液和反應終止液除外)。
6. 充分輕微混勻對反應結果尤為重要,最好使用微量振盪器(使用最低頻率),如無微量振盪器,可在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。
7. 在試驗中標准品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
8. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用,嚴禁在不同的液體之間混用!否則將影響試 驗結果。
9. 試驗中請穿著試驗服並帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標本時, 請按國家生物試驗室安全防護條列執行。
檢測前准備工作:
1. 請提前20分鍾從冰箱中取出試劑盒,以平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:20)。未用完的放回4℃。
3. 標准品: 加入標准品/標本稀釋液0.5ml至凍干標准品中,靜置15分鍾,待其充分溶解後,輕輕混勻(濃度為1000 pg/ml)。然後根據需要進行稀釋。(建議標准曲線使用以下濃度: 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/ml)。復溶標准品原液(1000 pg/ml)若未用完請分裝後放入-20℃以下電冰箱內保存,保存兩個月。已稀釋的標准品請廢棄。
4. 生物素化抗體工作液:按當次試驗所需要得用量,使用前20分鍾,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:30)成工作濃度。當日使用。若實驗次數過多導致生物素化 抗體量不足,可向我們公司單獨購買生物素化抗體。(須提供抗體批號)
5. 酶結合物工作液:按當次試驗所需要得用量,使用前20分鍾,以酶結合物稀釋液稀釋濃 縮酶結合物(1:30) 成工作濃度。當日使用。若實驗次數過多導致濃縮酶結合物量不足, 可向我們公司單獨購買濃縮酶結合物。(須提供酶結合物批號)
洗滌方法:
1. 自動洗板機:要求注入的洗滌液為350ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350ul,靜置30秒後甩盡液體,在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。
操作步驟:
1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,未用的板條和乾燥劑請放回鋁箔袋內壓 實自封條,密封口袋,放回4℃。
2.空白孔加標准品和標本稀釋液,其餘相應孔中加標本或不同濃度標准品(100ul/孔),用封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育90分鍾。
3.提前20分鍾准備生物素化抗體工作液。
4.洗板5次。
5.空白孔加生物素化抗體稀釋液,其餘孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱孵育60分鍾。
6.提前20分鍾准備酶結合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7.洗板5次。
8.空白孔加酶結合物稀釋液,其餘孔加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱,避光孵育30分鍾。
9.打開酶標儀電源,預熱儀器,設置好檢測程序。
10.洗板5次。
11.加入顯色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鍾。
12.加入終止液100ul/孔, 混勻後即刻測量OD450值(3分鍾內)。在儀器保存讀數結果並列印一份紙質結果。
13.實驗完畢後將未用完的試劑按規定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束。
建議保存酶標板框,以備下次或者今後試驗使用。
結果判斷:
1. 每個標准品和標本的OD值應減去空白孔的OD值。
2. 手工繪制標准曲線。以標准品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標准品的坐標點。通過標本的OD值可在標准曲線上查出其濃度。
3. 若標本OD值高於標准曲線上限,應適當稀釋後重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。
靈敏度、特異性和重復性:
● 靈敏度:最小可測人IL-4達7pg/ml。
● 特異性:不與IL-1,2,3,5,6,8,10,12,IFN,TNF及sTNF-RII等反應。
● 重復性:板內,板間變異系數均<10%。