常用的核酸分離純化的方法

⑴ 核酸純化的方法有哪幾種

主要有3種，分別是磁珠法，柱子法，和膠回收法，一氪生物核酸純化，一氪就夠了！

⑵ 在實驗中，經常提取核酸的時候有很多方法，其中磁珠法是什麼意思，有什麼好處

傳統的核酸分離技術包含沉澱，離心等過程，這些純化方法的步驟繁雜、費時長、收率低，接觸有毒試劑，很難實現自動化操作；而採用磁性載體微球分離技術就能很好地克服這些缺點，實現樣品的快速、高效制備.
磁珠法提取核酸是通過細胞裂解液裂解細胞，從細胞中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面，而蛋白質等雜質不被吸附而留在溶液中。反應一定時間之後，再在磁場作用下，使磁性顆粒與液體分開，回收顆粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脫液洗脫即可以得到純凈的DNA。

⑶ 簡述核酸分離的基本 原理

通過機械磨碎細胞或加入表面活性劑裂解細胞使內容物提取出來，再加入蛋白變性劑變性沉澱蛋白質。最後靠核酸在醇溶液中溶解度下降的特點提取純的核酸。

⑷ 純化dna的方法有哪些

DNA純化

首先利用瓊膠電泳將不同分子量的DNA片段分開,將某一特定分子量區域的瓊膠切下,利用DNA extraction kit將DNA從瓊膠中溶出並濃縮.

實驗材料

( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列試劑來自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube

實驗步驟

A.將欲分離之DNA混合物以0.7%瓊膠電泳分離.
B.電泳後,將瓊膠置於紫外光箱上觀察,把含有欲純化之DNA片段的瓊膠部位切下.
C.將步驟B的瓊膠以藍色微量吸管盡可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分鍾,每2-3分鍾搖晃數次,直至瓊膠完全溶解.
E.將步驟D瓊膠溶液全部吸入DF Column,並套上Collection Tube(收集過濾液).
F.8000rpm離心1分鍾,將過濾液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm離心1分鍾,過濾液倒掉.
H.14000rpm離心2分鍾.
I.將DF Column轉移至上另一乾凈的微量離心管.加入15ml Elution Buffer,室溫靜置2分鍾.
J.14000rpm離心2分鍾,微量離心管內之液體即為純化的DNA片段.
K.取0.5ml純化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%瓊膠電泳,與marker比較,估計DNA的濃度.

⑸ 認識核酸提取的知識筆記2020-05-07

一．核酸抽提原理：

核酸抽提包含樣品的裂解和純化兩大步驟。其是：裂解樣品中的核酸游離在體系；純化游離的核酸，使之與體系中的其它成分分離（如蛋白質、鹽及其它雜質徹底分離）。

常用的裂解液：包括去污劑 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和鹽 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。

去污劑的作用，是通過使蛋白質變性、破壞膜結構、解開與核酸相連接的蛋白質，從而實現核酸游離在裂解體系中。

鹽的作用，除了提供一個合適的裂解環境 (如 Tris)，還包括抑制樣品中的核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞 (如 EDTA)、維持核酸結構的穩定 (如NaCl) 等。

裂解體系中還可能加入蛋白酶，利用蛋白酶將蛋白質消化成小的片段，促進核酸與蛋白質的分開，同時，也便於後面的純化操作以及獲得更純的核酸。也有直接使用高濃度的蛋白質變性劑 (如 GIT、GuHCl 等) 裂解的，該方法已經成為了 RNA 抽提的主流，卻不是基因組 DNA 抽提的主流。

二．最常用的純化方法

（一） PC 抽提（Phenol-chloroform extraction：酚氯仿抽提）+醇沉澱：利用PC對裂解體系進行反復抽提以去除蛋白質，實現核酸與蛋白質的分離，再用醇將核酸沉澱下來，實現核酸與鹽的分離。

（二）介質純化：利用某些固項介質，在某些特定的條件下，選擇性地吸附核酸，而不吸附蛋白質及鹽的特點，實現核酸與蛋白質及鹽的分離。

（三）高鹽沉澱去除蛋白質是第一種純化方法的一個變體，省略了PC操作的麻煩，也有不純化的抽提方法，但是用途多局限於簡單的 PCR。

三．裂解方法的評價

（一）含蛋白酶的裂解方法是抽提基因組 DNA 的首選。包括裂解游離的膜蛋白與基因組 DNA 相連接的游離蛋白質。

（二）不使用蛋白酶的去污劑裂解方法，在細胞基因組 DNA 抽提方面仍然有優勢。尤其是當得率和純度要求不是最高，而經濟性及操作簡單很重要時，控制好裂解液/樣品的比例是該方法成功的關鍵。該方法結合高鹽沉澱，可以實現最簡單的操作，但純度及得率的穩定性可能會比用 PC 抽提的差一些。

（三）高濃度蛋白質變性劑 (如 GIT、GuHCl 等) 的裂解方法是抽提 RNA 的首選。

（四）含 CTAB 的裂解液，幾乎成為富含多糖的樣品，如細菌、植物的基因組 DNA 抽提的首選裂解方法。

（五）SDS 鹼裂解法是質粒抽提的首選裂解方法，具有快速、得率高、幾乎無基因組 DNA 污染的特點。

（六）PCR 模板的簡易裂解方法，也是使用面很廣的一類方法。該方法的特點是無須純化，樣品被裂解後即可直接取裂解液用於 PCR，非常快速。

四．純化方法的評價

（一）PC 抽提/醇沉澱方法：穩定、可靠、經濟、方便。PC 抽提可以徹底去除蛋白質，醇沉澱可以去除鹽，對於一般的干凈的樣品 (雜質為蛋白質)，該方法完全可以獲得高質量的核酸。

（二）高鹽沉澱蛋白質/醇沉澱方法：同樣也是一個非常不錯的方法。與 PC 抽提方法相比，除了純度的穩定性可能要低一點外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點。更快、更輕松去除蛋白質所伴隨的好處是，可以用於大規模抽提，不足是純度 (蛋白質殘留) 不夠穩定。

（三）介質純化方法：是一個越來越受到重視的方法。其最大特點是非常適合大規模核酸抽提，並且因為受人為操作因素影響小，純度的穩定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。其致命弱點是樣品過量。介質可以分為兩大類，一類是柱式的，即介質被預先裝填在下面是通的柱子里；另外一類則是顆粒狀 (如Glassmilk、磁性小珠等)。

五．醇的沉澱

醇的沉澱，目的是使核酸從裂解體系中沉澱下來，從而實現核酸與其它雜質（主要是鹽）的分離。實際操作中，許多雜質也會與核酸一起被醇沉澱下來，尤其是當其它雜質的濃度也比較高的時候。醇的沉澱並不是非常特異性的，任何有機大分子及一些鹽，當濃度達到一定水平後，都可能同步被沉澱下來。最有參考價值的是 TRIzol 提供的一個沉澱方案：一半異丙醇加一半高鹽溶液替代純粹的異丙醇，可以大大降低多糖殘留。

PEG、LiCl、CTAB 都可以用於核酸沉澱。雖然它們遠沒有醇沉澱的高使用頻率，但卻各有特點。LiCl 可以沉澱 RNA 以去除DNA，CTAB 可以從含多糖的裂解體系中將核酸沉澱下來。PEG是沉澱病毒顆粒的方便手段。

六．洗滌

洗滌首先一定要將沉澱懸浮起來；第二就是要有一定的時間，尤其是當核酸沉澱比較大時 (使核酸沉澱最終蓬鬆)；第三是少量多次；第四則是去上清要徹底。

七．核酸質量的檢測問題

目前用於正式實驗前檢測核酸質量的方法，一是電泳，二是紫外分光光度儀。

（一）電泳檢測的主要是核酸的完整性和大小，只要核酸不是太小或者太大 (超出電泳分離范圍)，電泳還可以用於估計核酸的濃度，但其准確度與經驗有關；另外，電泳也可能提供某些雜質污染的信息。

（二）紫外分光光度儀檢測的是純度和核酸含量，該儀器的靈敏度非常高，A230 : A260 : A280 = 1 : 2 (DNA 為 1.8) : 1 為理論上的數據，實際測定時會有一些差別；但如果差別太大，就有問題了。如： A260/A230 > 2 就是純的，如果 A260/A280

> 2.3 就是核酸降解，A260/A230比2大許多，一定是有雜質殘留的。

八．核酸的溶解和保存

純化後的核酸，最後多使用水或者低濃度緩沖液溶解；其中 RNA以水為主，DNA 則多以弱鹼性的 Tris 或者 TE 溶解。經典的 DNA 溶解方法多提倡使用 TE 溶解，認為 EDTA 可以減少DNA 被可能殘留下來的 DNase 降解的風險；如果操作過程式控制製得當，DNase 的殘留幾乎是可以忽略的，完全可以直接使用 Tris 或者水 (pH 接近 7) 溶解DNA。

實驗室常用保存方法: -20℃保存的 DNA， -70℃保存的RNA。

⑹ 核酸的分離方法有什麼

核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質之一。核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡稱RNA）和脫氧核糖核酸（簡稱DNA）。DNA是儲存、復制和傳遞遺傳信息的主要物質基礎。RNA在蛋白質合成過程中起著重要作用——其中轉運核糖核酸，簡稱tRNA，起著攜帶和轉移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，簡稱mRNA，是合成蛋白質的模板；核糖體的核糖核酸，簡稱rRNA，是細胞合成蛋白質的主要場所。
核酸同蛋白質一樣，也是生物大分子。核酸的相對分子質量很大，一般是幾十萬至幾百萬。核酸水解後得到許多核苷酸，實驗證明，核苷酸是組成核酸的基本單位，即組成核酸分子的單體。一個核苷酸分子是由一分子含氮的鹼基、一分子五碳糖和一分子磷酸組成的。根據五碳糖的不同可以將核苷酸分為脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。
核酸大分子可分為兩類：脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），在蛋白質的復制和合成中起著儲存和傳遞遺傳信息的作用。核酸不僅是基本的遺傳物質，而且在蛋白質的生物合成上也占重要位置，因而在生長、遺傳、變異等一系列重大生命現象中起決定性的作用。
希望我能幫助你解疑釋惑。

⑺ 提取基因組DNA的方法有哪些各有何優缺點

1、苯酚氯仿抽提法

優點是採用了實驗室常見的試劑和葯品，做起來成本比較低廉。

缺點是由於使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長時間操作對人員健康有較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由於操作體系大，不同實驗人員操作重復性差，不利於保護RNA，很難進行微量化的操作。

2、離心柱法

離心柱法DNA提取它的優點是比傳統的酚氯法提取的純度高，有利於RNA保護，而且能進行微量操作，以其低廉的價格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統DNA提取方法，被高校科研所等市場普遍接受。

離心柱法DNA提取的缺點是需要較多的樣本，耗材多，對於珍稀樣本無能為力，特別是在法醫、考古等領域顯得力不從心。

同時離心柱法DNA提取需要反復離心，不便於高通量、自動化操作，與現代生物學實驗的高通量、自動化要求格格不入，特別是在基因診斷、疾病檢測、轉基因檢測等領域，離心柱法DNA提取需要大量的操作人員及儀器設備。

當面對突發疫情時，更是需要有高通量的DNA提取設備與方法才能更有效准確的監測疫情、控制疫情。

3、磁珠法

磁珠法是納米科技與生物技術的完美結合，具有其他DNA提取方法無法比擬的優勢，主要體現在：

（1）能夠實現自動化、高通量操作，配合96孔的核酸自動提取儀，在以往做一個樣品的提取時間內可同時實現對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當前生物學高通量操作的要求，使得在大規模疫情爆發時能夠進行快速篩查原因，這個優點是其他方法難以趕超的。

（2）操作簡單、用時短，整個提取流程只有裂解、結合、洗滌、洗脫四步短時間內即可完成。

（3）安全無毒，不使用傳統方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對實驗操作人員的傷害少，保護了實驗人員的身體健康。

（4）磁珠與核酸的特異性結合使得提取的核酸純度高、濃度大。

（5）靈敏度高，適合法醫樣本等痕量DNA提取。

(7)常用的核酸分離純化的方法擴展閱讀：

磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對核酸有吸附作用的特定活性官能基團，通過不同的裂解液結合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質進行特異性結合，同時利用磁珠自身的磁性，在外磁場的作用下可以方便地實現定向移動與富集，從而達到核酸與雜質分離的目的，進而實現對目標物質的分離純化，獲得純化核酸。

⑻ 核酸的分離方法有什麼

核酸（nucleic acid）是遺傳信息的攜帶者,是基因表達的物質基礎.無論是進行核酸結構還是功能研究,首先需要對核酸進行分離和純化.核酸樣品質量將直接關繫到實驗的成敗.核酸分離、純化原則：1.保持核酸分子一級結構的完整性.因為遺傳信息全部儲存在一級結構之中,核酸的—級結構還決定其高級結構的形式以及和其他生物大分子結合的方式.2.分離核酸原則:1）溫度不要過高；2）控制pH值范圍(pH值5-9); 3）保持一定離子強度; 4）減少物理因素對核酸的機械剪切力.
在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,細胞內或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵,破壞核酸一級結構.所用器械和一些試劑需高溫滅菌,提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑.
常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑：如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉)、8-羥基喹啉.2.陰離於型表面活性劑如SDS,該試劑除對核酸酶有抑製作用外,還能使蛋白質變性,並與變性蛋白結合成帶負電荷的復合物,該復合物在高鹽溶液中沉澱.
常用的RNA酶（RNAase)抑制劑有：1.皂土（bentonite ）作用機制：皂土帶負電荷,能吸附RNase,使其失活.2. DEPC(二乙基焦碳酸鹽) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液體,很強的核酸酶抑制劑.作用機制：與蛋白質中His結合使蛋白變性.